虞 陽，林新艷，唐雯慧，殷書梅

（江蘇康緣陽光藥業(yè)有限公司，江蘇 南京 210046）

高效液相色譜法測定山黃祛痛噴霧劑中秋水仙堿含量

虞 陽，林新艷，唐雯慧，殷書梅

（江蘇康緣陽光藥業(yè)有限公司，江蘇 南京 210046）

目的 建立測定山黃祛痛噴霧劑中秋水仙堿含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 色譜柱為Phenomenex Luna C18柱（150 mm× 4．6 mm，5 m），流動相為甲醇－水（45∶55），檢測波長為245 nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為10 L。結(jié)果 秋水仙堿質(zhì)量濃度在2．0～50．1 g／mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，回歸方程為 A＝35 181．93 C＋8．72(r＝0．999 9)，平均加樣回收率為 100．31%，RSD為2．23%（n＝9）。結(jié)論 該方法分離效率高、分析速度快、靈敏度高、易于實現(xiàn)自動化，為后期產(chǎn)品的質(zhì)量控制和評價提供了科學(xué)依據(jù)。

高效液相色譜法；山黃祛痛噴霧劑；麗江山慈菇；秋水仙堿

山黃祛痛噴霧劑為中藥注冊6類新藥，源自江蘇省中醫(yī)院汪悅教授臨床經(jīng)驗方，用于治療痛風(fēng)急性發(fā)作期的外用抗炎鎮(zhèn)痛。本品處方君藥麗江山慈菇中所含秋水仙堿對急性痛風(fēng)關(guān)節(jié)炎具有選擇性抑制作用，可與微管蛋白結(jié)合，妨礙有絲分裂中紡錘體的功能，并引起粒細(xì)胞和其他可移動細(xì)胞中原纖維微管解聚和消失，從而達(dá)到抗炎鎮(zhèn)痛的效果。本試驗中采用高效液相色譜（HPLC）法，以秋水仙堿作為山黃祛痛噴霧劑的含量控制指標(biāo)進(jìn)行方法學(xué)研究，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

安捷倫1200型高效液相色譜儀，DAD二極管陣列檢測器（安捷倫科技有限公司）；Mettler AB135－S型十萬分之一電子天平（梅特勒公司）；SK8200HP型超聲波清洗器（上?？茘u自動化系統(tǒng)有限公司）；甲醇為色譜純（默克公司）；水為重蒸餾水（自制）；秋水仙堿對照品（西格瑪公司，批號為2005985，標(biāo)示純度98．0%）；山黃祛痛噴霧劑樣品，陰性制劑（江蘇康緣陽光藥業(yè)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Phenomenex Luna C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm，美國菲羅門公司）；流動相：甲醇－水（45∶55）；檢測波長：245 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。在此色譜條件下，秋水仙堿與其他相鄰組分色譜峰的分離度大于1．5，按秋水仙堿峰計算，理論板數(shù)應(yīng)不低于1500。色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

精密稱取秋水仙堿對照品適量，置棕色瓶中，加甲醇制成每1 mL含0．01 mg的溶液，即得對照品溶液；分別取山黃祛痛噴霧劑（批號分別為 20100302，20100501，20100502，20100503，20110901）1 mL，精密取10 mL置容量瓶中，以70%甲醇定容至刻度，搖勻，再精密取1 mL，置10 mL容量瓶中，以70%甲醇定容至刻度，搖勻，以微孔濾膜（0．45 μm）過濾，即得供試品溶液；取缺麗江山慈菇的陰性制劑1 mL，同供試品溶液制備方法制備，即得陰性對照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：按對照品溶液的制備方法，制備質(zhì)量濃度為每 1 mL含秋水仙堿 0．100 2 mg的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，搖勻。吸取標(biāo)準(zhǔn)貯備液1 mL，分別置50，25，10，5， 2 mL容量瓶中，分別加甲醇制成質(zhì)量濃度為2．0，4．0，10．0，20．0，50．1 μg／mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。吸取上述溶液各10 μL進(jìn)樣，測定，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)、對照品質(zhì)量濃度（C，μg／mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A＝35 181．93 C＋8．72，r＝0．999 9（n＝5）。結(jié)果表明，秋水仙堿質(zhì)量濃度在2．0～50．1 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗：取質(zhì)量濃度為10．0 μg／mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液 10 μL，連續(xù)進(jìn)樣 6次測定。結(jié)果的 RSD＝0．25%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液（批號為20100302），分別于0，2，4，8，12，24 h時進(jìn)樣測定。結(jié)果的 RSD為1．03%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：取同一批樣品（批號為20100302）依法制備供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定含量。結(jié)果的RSD＝1．99%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為20100302）0．5 mL，精密取10 mL，置容量瓶中，分別精密加秋水仙堿對照品溶液（質(zhì)量濃度為0．100 2 g／L）2．1，2．5，3．1 mL，依法制備待測溶液，各重復(fù)進(jìn)樣3次，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定其含量。結(jié)果見表1。

表1 秋水仙堿加樣回收試驗結(jié)果（n＝9）

2．4 樣品含量測定

按擬訂方法，對4批樣品（批號分別為20100501，20100502，20100503，20110901）中秋水仙堿成分的含量進(jìn)行檢測。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（n＝4，g／L）

3 討論

山黃祛痛噴霧劑屬中藥復(fù)方制劑，具有清熱解毒、消腫止痛的功效，用于治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎濕熱蘊(yùn)毒證。本品處方君藥為百合科山慈菇屬植物麗江山慈菇Iphigenia indica Kunth的干燥球莖，味微苦，性辛、寒，有毒，用于痛風(fēng)、手足關(guān)節(jié)紅腫疼痛、瘡瘍腫毒、瘰疬結(jié)核、蟲蛇咬傷。其種子、球莖、葉、莖含秋水仙堿（colchicine）、角秋水仙堿（cornigerine）、β－光秋水仙堿（β－lumicolchicine）及N－甲酸－N－去乙酰秋水仙堿（N－formyl－N－deacetylcolchicine）等多種生物堿[1－2]，而秋水仙堿是針對痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎有效的首選抗炎劑。

本試驗中以秋水仙堿為指標(biāo)，采用簡便、準(zhǔn)確的高效液相色譜法進(jìn)行了含量測定方法的研究，結(jié)果顯示，該方法選擇性好，陰性無干擾。綜合文獻(xiàn)及前期自購麗江山慈菇藥材所測含量數(shù)據(jù)，麗江山慈菇中秋水仙堿的含量變化幅度較大（0．1% ～0．61%）[3]，其影響因素有生長年限、采收期、產(chǎn)地等。根椐實測麗江山慈菇藥材中秋水仙堿的含量及中試產(chǎn)品的秋水仙堿轉(zhuǎn)移率，并結(jié)合生產(chǎn)實際，暫訂本品含量限度為每1 mL含麗江山慈菇以秋水仙堿（C22H25NO6）計，不得少于0．27 mg。

[1]田素英，陳周全．山慈菇中秋水仙堿醇提工藝的優(yōu)選[J]．中草藥，2002，33（8）：708－710．

[2]何嘉莉，肖 瑩．從文獻(xiàn)統(tǒng)計探討急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的中醫(yī)藥治療規(guī)律[J]．浙江中醫(yī)雜志，2009，44（3）：224－225．

[3]袁理春，徐中志，趙 琪，等．麗江山慈姑秋水仙堿HPLC測定[J]．西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2007，20（1）：120－122．

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)02－0059－03

虞陽（1989－），男，漢族，大學(xué)本科，助理工程師，主要從事新藥研究與開發(fā)工作，（電話）025－85661972（電子信箱 ）yugenius＠ qq．com；殷書 梅（1966－），女，漢族，大學(xué)本科，主任中藥師，主要從事新藥研究與開發(fā)工作，本文通訊作者，（電話）025－85661972（電子信箱）yin－shumei＠163．com。

2015－02－05；

2015－05－08)