彭 瑾，張 蓉，彭 梅

（1．中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院，重慶 400037； 2．貴州省中國科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽 550002）

紫外－可見分光光度法測定不同產(chǎn)地羅漢果中多糖含量

彭 瑾1，張 蓉1，彭 梅2

（1．中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院，重慶 400037； 2．貴州省中國科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽 550002）

目的 為尋找新的羅漢果培育地提供參考。方法 以 D－無水葡萄糖作為對照品，采用紫外－可見分光光度法于480 nm波長處對10批羅漢果多糖的含量進(jìn)行測定，分析不同產(chǎn)地羅漢果多糖的含量。結(jié)果 不同產(chǎn)地羅漢果多糖的含量差異較大，廣西三江縣的羅漢果多糖含量為福建上杭縣的2倍。結(jié)論 多糖含量的分析結(jié)果驗(yàn)證了廣西北部地區(qū)為羅漢果的道地產(chǎn)地。栽培于江西南部南康市的羅漢果多糖含量也較高，該地區(qū)也可初步作為羅漢果栽培的重點(diǎn)地區(qū)進(jìn)行深入考察驗(yàn)證。

羅漢果；多糖；紫外－可見分光光度法

羅漢果為葫蘆科植物羅漢果 Siraitia grosvenorii（Swingle）C．Jeffrey ex A．M．Lu et Z．Y．Zhang的干燥果實(shí)[1]。植物分布于廣西、廣東、貴州、江西、湖南南部等地區(qū)，主產(chǎn)于廣西，味甘、性涼，歸肺、大腸經(jīng)，具有清熱潤肺，利咽開音、潤腸通便的功效，用于肺熱燥咳、咽痛失音、腸燥便秘等?，F(xiàn)代研究表明，羅漢果具有祛痰止咳[2]、保肝[3]、增強(qiáng)免疫力[4]、抗氧化[5]等活性，且多與羅漢果甜味物質(zhì)（如糖或糖苷類化合物）有關(guān)[5]。但2010年版《中國藥典(一部)》僅對羅漢果皂苷V作了規(guī)定，并未界定羅漢果多糖的含量。多糖是羅漢果中重要的活性成分，具有抗癌、抗氧化等活性[6]。筆者利用紫外－可見分光光度法對10批栽培羅漢果樣品中多糖的含量進(jìn)行了測定，分析了羅漢果產(chǎn)地和多糖含量之間的關(guān)系，為開發(fā)羅漢果提供必要的科學(xué)依據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

10批栽培羅漢果藥材的來源信息見表1，經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院王悅蕓副教授鑒定為葫蘆科植物羅漢果 Siraitia grosvenorii（Swingle）C．Jeffrey ex A．M．Lu et Z．Y．Zhang的干燥果實(shí)。759S型紫外－可見分光光度計(jì)（上海棱光技術(shù)有限公司）；AB104－S／FACT型電子天平（梅特勒－托利多儀器＜上海＞有限公司，d＝0．000 1 g）；水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）。D－無水葡萄糖對照品（批號(hào)為110833－201205，中國食品藥品檢定研究院）；苯酚、濃硫酸等試劑均為分析純。

表1 10批羅漢果的來源

2 方法與結(jié)果

2．1 溶液制備[7]

用超聲提取。取10批干燥的羅漢果粉末各約1．0 g，各加入50℃熱水30 mL，超聲提取3次，每次5 min，合并3次的提取液，減壓濃縮，加入95%乙醇使羅漢果多糖沉淀，離心20 min，過濾得沉淀，將沉淀溶解于水后濾除不溶物，回收殘留的乙醇，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶里，加水定容，即得供試品溶液。精密稱取在100℃干燥至恒重的 D－無水葡萄糖對照品10．1 mg，用蒸餾水溶解，轉(zhuǎn)液至100 mL容量瓶中，定容，即得0．10 g／L的對照品溶液。

2．2 換算因子測定

精密稱取羅漢果多糖30．0 mg，置100 mL容量瓶中，加蒸餾水溶解并定容。精密吸取配制好的多糖溶液2．0 mL，置25 mL容量瓶，蒸餾水定容后，吸取1．0 mL，置10 mL比色管中，加入1 mL新配制的5%苯酚和5 mL濃硫酸，搖勻，靜置30 min，在480 nm波長處掃描，按下式計(jì)算換算因子(f)，f＝W／（C×D）。式中，W為羅漢果多糖的質(zhì)量（mg）；C為羅漢果多糖中葡萄糖的質(zhì)量濃度（g／L）；D為羅漢果多糖的稀釋倍數(shù)。經(jīng)計(jì)算得換算因子 f為3．41，RSD為1．44%。

2．3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：精密量取質(zhì)量濃度為 0．10 g／L的對照品溶液0．2，0．4，0．6，0．8，1．0，1．2 mL，分別置試管中，補(bǔ)加蒸餾水至體積為2 mL，分別取新配制5%的苯酚溶液 1 mL，搖勻后迅速加入 5 mL的濃硫酸，搖勻后沸水加熱20 min，取出冷卻至室溫，以相應(yīng)的試劑為空白對照。在480 nm波長處測定吸光度，以對照品溶液中 D－無水葡萄糖的質(zhì)量濃度（C，μg／mL）為橫坐標(biāo)、吸光度（A）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程A＝33．42 C＋0．059，r＝0．999 7(n＝6)。結(jié)果表明，D－無水萄葡糖質(zhì)量濃度在10．10～60．60 μg／mL范圍內(nèi)與吸光度具有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密量取1．0 mL同一 D－葡萄糖對照品溶液，于480 nm波長處掃描，連續(xù)重復(fù)測定吸光度6次。結(jié)果的 RSD＝1．27%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別在放置0，15，30，45，60，90 min后測定吸光度。結(jié)果的 RSD＝2．41%（n＝6），表明供試品溶液在2．0 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批藥材的供試品溶液，采用與穩(wěn)定性試驗(yàn)相同的方法制備6份平行測定3次。結(jié)果的RSD＝0．95%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量為55．08 mg／g的羅漢果樣品約1．0 g，按已知樣品含量的80%，100%，120%加入對照品，依法測定。計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

表2 D－無水葡萄糖加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2．4 樣品含量測定

取10批羅漢果藥材，按供試品溶液方法對各批藥材平行測定3次，計(jì)算得羅漢果多糖含量，見表3。

表3 不同產(chǎn)地栽培羅漢果中多糖含量測定結(jié)果（n＝3）

3 討論

糖類成分在天然藥物中分布十分廣泛，占植物干重的80%～90%。如人參、靈芝、刺五加等都含有大量的糖類，也是其有效成分。由于糖類在生物合成及在細(xì)胞間的識(shí)別、受精、胚胎形成、細(xì)胞增殖、腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移等許多基本生命過程中具有重要作用，對糖類的研究一直十分活躍[8]。目前已知多糖具有抗菌[9]、抗氧化[10]、抗癌[11]等多種活性，作為天然的高效藥物，在癌癥、艾滋病等重大疾病的治療藥物研究中具有廣泛的應(yīng)用前景[12]。

本研究結(jié)果顯示，廣西三江縣的羅漢果中多糖含量最高。雖然羅漢果在多個(gè)地區(qū)均有栽培，但其對自然環(huán)境的要求比較特殊，結(jié)合其地理分布及采集地區(qū)，在廣西北部（三江縣、永?？h、融安縣）、廣東北部（乳源縣、連山縣）栽培的羅漢果多糖含量高于云南、福建等地的樣本，同時(shí)也驗(yàn)證了廣西北部地區(qū)為羅漢果的道地產(chǎn)地。該結(jié)果與樣本收集地的地理位置、土質(zhì)及地理氣候環(huán)境的差異也有一定關(guān)系。此外，栽培于江西南部南康市的羅漢果多糖含量也較高，結(jié)合羅漢果的市場供需狀況及多糖含量，該地區(qū)可作為羅漢果培育地區(qū)，值得進(jìn)一步考察驗(yàn)證。

[1]國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：197．

[2]劉 晶，孫 瑜．羅漢果及羅漢果提取物藥理作用的研究[J]．黑龍江科技信息，2013（5）：99．

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[4]肖 剛，王 勤．羅漢果甜苷對小鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷保護(hù)作用的研究[J]．中國藥房，2008，19（3）：163－165．

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Contents Determination of Polysaccharides in Siraitia Grosvenorii（Swingle）from Different Regions by UV M ethod

Peng Jin1，Zhang Rong1，Peng Mei2
（1．Department of Pharmacy，Xinqiao Hospital of The Third Military Medical University，Chongqing，China 400037；2．The Key Laboratory of Chemistry for Natural Products of Guizhou Province and Chinese Academy of Sciences，Guiyang，Guizhou，China 550002）

Objective To analyze the contents of polysaccharides in Siraitia grosvenorii（Swingle）from different regions and provide a reference for looking for new cultivation．M ethods The contents of polysaccharides in 10 samples were evaluated with D－glucose as standard material by Ultraviolet－Visible spectrophotometry at 480 nm．Results The contents of polysaccharides in Siraitia grosvenorii（Swingle）from different regions had significant difference．The sample from Sanjiang city of Guangxi province was twice as large as Shanghang cityof Fujian province．Conclusion According totheresults of the contentsof polysaccharides，thenorth of Guangxi province was the best origin of Siraitia grosvenorii（Swingle），and the sample from Nankang city of Jiangxi province also has higher contents of polysaccharides，the region can also be as a focus areas of cultivation of Siraitia grosvenorii（Swingle）for further research．

Siraitia grosvenorii（Swingle）；polysaccharides；Ultraviolet－Visible Spectrophotometry

彭瑾（1985－），女，重慶人，大學(xué)本科，藥師，主要從事藥品調(diào)配及評(píng)價(jià)工作，（電子信箱）530955177＠qq．com；彭梅（1985－），女，碩士研究生，助理研究員，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究工作，本文通訊作者，（電子信箱）573278625＠qq．com。

2015－03－30；

2015－06－29)

R284．1；R282．71

A

1006－4931(2016)02－0051－03