徐桑爾，盧 鵬，金莉萍，王勇軍*

（浙江農(nóng)林大學(xué)a.林業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院，b.生物農(nóng)藥高效制備技術(shù)國家地方聯(lián)合工程實驗室，浙江臨安 311300）

多粘類芽孢桿菌防治鐵皮石斛細(xì)菌性葉斑病及促生效果

徐桑爾a，盧 鵬b，金莉萍a，王勇軍ab*

（浙江農(nóng)林大學(xué)a.林業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院，b.生物農(nóng)藥高效制備技術(shù)國家地方聯(lián)合工程實驗室，浙江臨安 311300）

采用雙層培養(yǎng)法測定了生防細(xì)菌多粘類芽孢桿菌CF05對鐵皮石斛細(xì)菌性葉斑病病原細(xì)菌的拮抗活性，溫室試驗測定了CF05防治鐵皮石斛細(xì)菌性葉斑病的效果。結(jié)果表明，CF05菌劑顯著抑制鐵皮石斛細(xì)菌性葉斑病病原細(xì)菌的生長，對病害的防治效果達(dá)到63.6%。同時，CF05菌劑顯著促進(jìn)鐵皮石斛的生長，鮮質(zhì)量提高了31.0%，側(cè)芽增加31.58%。

多粘類芽孢桿菌；鐵皮石斛；細(xì)菌性葉斑病

鐵皮石斛（Dendrobium officinal Kimura et Migo）為蘭科石斛屬多年生草本植物，是一種重要的藥用植物，已在我國進(jìn)行了大面積栽培。當(dāng)前，一種由萎蔫短小桿菌（Curtobacterium flaccum faciens）引起的細(xì)菌性葉斑病在浙江很多鐵皮石斛種植大棚發(fā)生嚴(yán)重，導(dǎo)致產(chǎn)量損失嚴(yán)重［1］，亟待安全有效的防治措施。

多粘類芽孢桿菌（Paenibacillus polymyxa）是一種廣泛存在于土壤、植物體內(nèi)的根際促生菌，對真菌、細(xì)菌、線蟲等引起的植物病害具有防治效果，是一種安全高效的生物農(nóng)藥。多粘類芽孢桿菌通過產(chǎn)生多種抗生素及酶等物質(zhì)拮抗植物病原菌的生長，誘導(dǎo)植物產(chǎn)生水楊酸，誘發(fā)植物系統(tǒng)抗性，合成植物生長素、細(xì)胞分裂素等物質(zhì)促進(jìn)植物生長，具有溶磷、固氮等活性［2］。本研究測定了多粘類芽孢桿菌CF05對鐵皮石斛細(xì)菌性葉斑病的防治效果和促生效果。

1 材料與方法

1.1 材料

生防菌多粘類芽孢桿菌CF05分離自浙江天目山柳杉土壤中，本實驗室保存［3］。5×1010·m L-1芽孢桿菌液由生物農(nóng)藥高效制備技術(shù)國家地方聯(lián)合工程實驗室通過發(fā)酵制備，用水稀釋至108· m L-1。病原菌萎蔫短小桿菌YJ-05分離自發(fā)病的鐵皮石斛，本實驗室保存［1］。溫室生物防治效果測定在臨安天目山鐵皮石斛潘山基地，供試植物為6個月幼苗。

1.2 方法

1.2.1 雙層培養(yǎng)法測定CF05對植物病原細(xì)菌的拮抗作用

取10μL CF05菌懸液點于LB培養(yǎng)基上，每皿1點，30℃培養(yǎng)36 h后，用三氯甲烷熏蒸10～12 h，殺死細(xì)菌；制備1×109·m L-1的病原細(xì)菌菌懸液，取100μL病原菌菌懸液加入到10 m L融化后冷卻至45℃左右的半固體LB培養(yǎng)基中，迅速混勻，倒入經(jīng)過熏蒸后的多粘類芽孢桿菌培養(yǎng)基上，均勻鋪平，30℃培養(yǎng)24 h，觀察抑菌圈。

1.2.2 CF05防治鐵皮石斛細(xì)菌性葉斑病的效果測定

采用每盆20 m L稀釋后的CF05芽孢菌液進(jìn)行灌根處理，空白對照（CK）為20 m L清水。每處理設(shè)重復(fù)3次，隨機(jī)區(qū)組排列。每個重復(fù)100盆，分別于2015年4月24日和2015年5月11日進(jìn)行2次灌根，2015年6月30日調(diào)查病情指數(shù)。病級參考郭曉強(qiáng)等［4］進(jìn)行劃分。

1.2.3 鐵皮石斛促生能力測定

按照1.2.2節(jié)進(jìn)行處理，灌根2次后，稱量植株鮮質(zhì)量，計算植物側(cè)芽數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)采用DPS v7.05數(shù)據(jù)系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計分析，顯著性水平采用Duncan’s新復(fù)極差法分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 CF05對鐵皮石斛細(xì)菌性葉斑病病原菌的拮抗作用

從圖1可以看出，多粘類芽孢桿菌CF05對鐵皮石斛細(xì)菌性葉斑病病原菌具有明顯的拮抗效果，抑菌圈明顯，說明CF05菌株可產(chǎn)生活性較強(qiáng)的拮抗物質(zhì)。

圖1 多粘類芽孢桿菌對鐵皮石斛細(xì)菌性葉斑病病原菌的拮抗作用

2.2 CF05對鐵皮石斛細(xì)菌性葉斑病的防治效果

從表1可以看出，CF05芽孢菌液處理后病情增長率為32.8%，明顯低于對照的90.1%，防治效果達(dá)到63.6%，說明CF05對鐵皮石斛細(xì)菌性葉斑的擴(kuò)展具有明顯的抑制作用，防治效果顯著。

表1 多粘類芽孢桿菌CF05對鐵皮石斛細(xì)菌性葉斑病的防治效果

2.3 CF05對鐵皮石斛的促生效果

從表2可以看出，多粘類芽孢桿菌CF05處理的鐵皮石斛生長勢明顯較對照好，葉片幼嫩新鮮，鮮質(zhì)量較對照增加了31.0%。多粘類芽孢桿菌CF05對鐵皮石斛側(cè)芽的萌發(fā)具有明顯的促進(jìn)作用，增加率達(dá)到31.5%。因此，多粘類芽孢桿菌CF05對鐵皮石斛具有顯著的促生效果。

表2 多粘類芽孢桿菌CF05對鐵皮石斛的促生效果

3 小結(jié)與討論

隨著化學(xué)農(nóng)藥的大量使用，環(huán)境安全和食品安全等問題日趨嚴(yán)重，安全高效的生物農(nóng)藥可成為替代化學(xué)農(nóng)藥的首選，生物農(nóng)藥的研究和應(yīng)用也成為當(dāng)前植物病蟲害防治的熱點。本試驗測定了多粘類芽孢桿菌CF05對鐵皮石斛細(xì)菌性葉斑病的防治效果和促生效果，表明多粘類芽孢桿菌可有效防治鐵皮石斛細(xì)菌性葉斑病，并具有顯著的促生效果，是一種藥肥雙效的微生物菌劑，表現(xiàn)出很好的推廣應(yīng)用價值。當(dāng)前，活體生物農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)上的廣泛推廣使用仍面臨穩(wěn)定性不好、效果不高、生產(chǎn)成本偏高等問題［5］，今后將針對微生物遺傳改良、發(fā)酵工藝優(yōu)化及農(nóng)藥制劑品種改良等方面來開展下一步研究。

［1］ WANG Y，JIN L，LU P.First report of bacterial leaf spot caused by Curtobacterium flaccum faciens on Dendrobium officinale Kimura et Migo in China［J］.Plant Disease，2016，100（2）：515.

［2］ 蒼桂璐，張付云，楊陽，等.多粘類芽孢桿菌的研究進(jìn)展［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013（2）：487-489.

［3］ 郭芳芳，謝鎮(zhèn)，盧鵬，等.一株多粘類芽孢桿菌的鑒定及其生防促生效果初步測定［J］.中國生物防治學(xué)報，2014（4）：489-496.

［4］ 郭曉強(qiáng)，李翔，趙志強(qiáng)，等.不同殺菌劑對花生葉斑病防治效果及產(chǎn)量影響的研究［J］.花生學(xué)報，2014（1）：56-60.

［5］ 陳軍，孫冬麗，繆有志，等.微生物農(nóng)藥的研究進(jìn)展［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（23）：12561-12563.

（責(zé)任編輯：侯春曉）

S432.4+2；S567.23+9

：A

：0528-9017（2016）12-2033-02

文獻(xiàn)著錄格式：徐桑爾，盧鵬，金莉萍，等.多粘類芽孢桿菌防治鐵皮石斛細(xì)菌性葉斑病及促生效果［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，57（12）：2033-2034.

10.16178/j.issn.0528-9017.20161233

2016-09-27

浙江省“三農(nóng)六方”科技協(xié)作計劃

徐桑爾（1993—），女，浙江紹興人，碩士研究生，從事植物病理學(xué)研究工作，E-mail：610674352@qq.com。

王勇軍（1981—），男，江西撫州人，副教授，從事微生物農(nóng)藥開發(fā)工作，E-mail：wangyj@zafu.edu.cn。