陳其玖 丁婷婷 鄭錚 王國棟 劉奇龍 鄭洪

(1.遵義醫(yī)學(xué)院2012級大學(xué)生創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)，貴州 遵義 563000；2.四川大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院2012級本科生，四川 成都 610000；3.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，貴州 遵義 563000)

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雄激素受體在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系

陳其玖1丁婷婷1鄭錚2王國棟1劉奇龍1鄭洪3△

(1.遵義醫(yī)學(xué)院2012級大學(xué)生創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)，貴州 遵義 563000；2.四川大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院2012級本科生，四川 成都 610000；3.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，貴州 遵義 563000)

目的 探討乳腺浸潤性導(dǎo)管癌(IDC)中雄激素受體(AR)的表達(dá)狀態(tài)與臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)EnVision法和圖像分析技術(shù)檢測乳腺 IDC組織芯片共 134例中 AR的表達(dá)情況和平均光密度值，并分析其與發(fā)病年齡、腫瘤大小、病理組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期的相關(guān)性。結(jié)合隨訪情況用 Kaplan-Meier生存曲線分析 AR和生存期的關(guān)系。結(jié)果(1)在乳腺IDC中 AR陽性的表達(dá)率為 61.94%(83/134)，組織學(xué)分級Ⅰ級為 100%(3/3)、Ⅱ級為 71.76%(61/85)、Ⅲ級為 38.10%(16/42)，其 MOD值分別為 0.38、0.26和 0.12。AR的表達(dá)與組織學(xué)分級呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，即 AR表達(dá)量越高，組織學(xué)分級越低；與年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及 TNM分期無相關(guān)性(P>0.05)。(2)Kaplan-Meier生存曲線示乳腺 IDC中 AR陽性患者生存期較 AR陰性患者生存期長(P<0.05)。結(jié)論(1)AR表達(dá)可反映乳腺 IDC的分級，AR表達(dá)越高，其組織學(xué)分級越低。(2)乳腺 IDC AR陽性者生存期長，預(yù)后好。

乳腺浸潤性導(dǎo)管癌； 雄激素受體； 免疫組織化學(xué)； 臨床病理特征； 預(yù)后

乳腺癌是一種激素依賴性腫瘤，乳腺癌患者雌激素受體(ER)與孕激素受體(PR)水平的檢測已成為常規(guī)檢測項(xiàng)目，結(jié)合乳腺癌的臨床病理指標(biāo)可評估乳腺癌的生物學(xué)行為和預(yù)后且可選擇適當(dāng)?shù)膬?nèi)分泌治療方式，從而提高臨床治療效果，延長患者的生存期。事實(shí)上，乳腺癌具有異質(zhì)性的特點(diǎn)，很難應(yīng)用傳統(tǒng)的組織學(xué)特點(diǎn)及 ER、PR表達(dá)狀態(tài)來評估所有的乳腺癌，因此一些新的生物學(xué)標(biāo)記受到關(guān)注，雄激素受體(AR)就是其中之一[1-2]。臨床上雄激素受體檢測相對運(yùn)用較少，本文采用臨床病理指標(biāo)、隨訪資料齊全且組織樣本實(shí)驗(yàn)條件完全一致的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌(IDC)組織芯片，應(yīng)用免疫組織化學(xué) EnVision染色方法檢測 AR的表達(dá)情況，進(jìn)一步探討雄激素受體與乳腺癌發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 134例IDC組織芯片，購于上海芯超生物科技有限公司，編號HBre-Duc140Sur-02，隨訪 5.6～9.9年。未經(jīng)過放療、化療。試劑濃縮型鼠抗人雄激素受體(AR)單克隆抗體購自廣州深達(dá)生物制品技術(shù)有限公司，工作濃度 1∶100。

1.2 方法 將134例浸潤性導(dǎo)管癌組織芯片進(jìn)行免疫組化EnVision二步法染色。具體操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，脫水，透明封固，鏡下觀察。

1.3 結(jié)果判定 采用半定量分析法并按標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判定[3]。(1)乳腺癌 AR陽性的標(biāo)準(zhǔn)：蛋白表達(dá)定位于細(xì)胞核，無著色或<1%著色為陰性、≥1%著色為陽性。(2)AR的平均光密度值評定：將每例組織的染色結(jié)果在鏡下分為4個視野并依次截取圖像，應(yīng)用美國 Media Cybemetics公司開發(fā)的 Image-Pro Plus Version 6.0(IPP6.0)分析圖像平均光密度值(MOD)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，各組間AR表達(dá)的比較采用χ2檢驗(yàn)，關(guān)聯(lián)分析采用Spearman相關(guān)分析；AR與生存期的關(guān)系采用Kaplan-Meier生存曲線，用LogRank(Mantel-Cox)和Breslow兩種檢驗(yàn)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 結(jié) 果

2.1 AR在乳腺癌組織中的表達(dá) AR陽性信號呈淺棕色至深棕色或棕黃色顆粒位于細(xì)胞核(圖 1～3)。134例 IDC中 AR陽性表達(dá)率為 61.94%(83/134)，病理組織學(xué)分級Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級的 AR陽性表達(dá)率分別為 100%、71.76%、38.10%，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。由此可看出，隨著癌組織分化程度降低，AR的表達(dá)率逐漸降低。AR的表達(dá)強(qiáng)度在組織學(xué)分級Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級中的 MOD值分別為 0.38、0.26和 0.12，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。由此可見，隨著組織學(xué)分級升高，AR的表達(dá)含量逐漸減弱，即腫瘤分化程度越高，其 AR的表達(dá)含量越高。

2.2 乳腺IDC中AR的陽性表達(dá)率與臨床病理特征的關(guān)系 乳腺IDC患者年齡 33～88歲，平均 59歲，其中≤50歲 AR陽性率為 56.41%(22/39)，>50歲 AR陽性率為 64.21(61/95)，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，二者無差異(P>0.05)。MOD值分別為 0.21和 0.22，經(jīng)相關(guān)性分析，AR表達(dá)含量與年齡無相關(guān)性(P>0.05)。腫瘤直徑≤2 cm的患者AR陽性率為 72.97%(27/37)，直徑2～5 cm AR陽性率為 57.89%(44/76)，直徑≥5 cm AR陽性率為63.16%(12/19)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。MOD值分別為 0.25、0.21和0.23，經(jīng)相關(guān)性分析，AR表達(dá)含量與腫瘤大小無相關(guān)性(P>0.05)。

134例乳腺 IDC中，有 129例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否的資料，其中發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的 AR陽性率為 60.94%(39/64)，未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的 AR陽性率為 63.08%(41/65)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。MOD值分別為0.22和 0.22，經(jīng)相關(guān)性分析，AR表達(dá)含量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率無相關(guān)性(P>0.05)。TNM分期為Ⅰ期的AR陽性率為78.26%(18/23)，Ⅱ期的AR陽性率為61.33%(46/75)，Ⅲ期的 AR陽性率為 57.58%(19/33)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。MOD值分別為 0.26、0.22和0.22，經(jīng)相關(guān)性分析，AR表達(dá)含量與 TNM分期無相關(guān)性(P>0.05)。見表1。

表1 AR表達(dá)及其與IDC臨床病理特征的關(guān)系

2.3 134例乳腺IDC中AR陽性表達(dá)和AR陰性表達(dá)的生存期 134例IDC中，死亡40例，其中19例呈AR陽性表達(dá)，21例呈AR陰性表達(dá)。存活94例，其中64例呈AR陽性表達(dá)，30例呈AR陰性表達(dá)。5年生存率為74.63%,其中AR陽性的5年生存率為81.93%,而 AR陰性的為62.75%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明AR陽性的乳腺IDC患者的5年生存率高于其AR陰性者。根據(jù)Kaplan-Meier生存曲線，結(jié)果顯示在134例IDC中，AR表達(dá)陽性患者的生存期與其 AR表達(dá)陰性患者間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖4，說明乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中 AR表達(dá)陽性的患者較AR表達(dá)陰性的患者生存期長，預(yù)后好。在 88例 IDCⅠ～Ⅱ級中，AR表達(dá)陽性患者的生存期與其AR表達(dá)陰性患者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖5；而在42例IDCⅢ級中，AR表達(dá)陽性患者的生存期與其AR表達(dá)陰性患者間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖6。

3 討 論

近年采用免疫組織化學(xué)證實(shí)，人乳腺癌組織和乳腺癌細(xì)胞株中均存在AR異常分布，AR陽性表達(dá)率約為40%～80%，與ER、PR表達(dá)相當(dāng)甚至更高。Hu等[4]研究顯示乳腺癌中 AR陽性表達(dá)率為77%，ER陰性乳腺癌中為65%，而在三陰性乳腺癌中則超過 50%。Yu等[5]研究表明，335例乳腺癌患者的AR陽性表達(dá)率為 72.5%，其中激素受體陰性者為 53.2%。由此可見上述結(jié)果不盡一致，其原因可能是檢查方法、技術(shù)條件及陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)不一致所致。盡管如此，在乳腺IDC中AR表達(dá)是一個常見的特征。本研究通過乳腺癌組織芯片資料顯示，在 134例 IDC中，AR陽性率為 61.94%;隨著 IDC分級的增高，AR陽性表達(dá)率逐漸下降，表達(dá)強(qiáng)度也逐漸下降。說明分化高、惡性程度低的 IDC，其 AR表達(dá)高；分化差、惡性程度高的 IDC，其 AR表達(dá)低或缺失。Gasparini等[6]結(jié)果顯示，與ER陽性的乳腺癌患者比較，三陰性乳腺癌患者AR表達(dá)更低，同時AR的表達(dá)與腫瘤分級呈負(fù)相關(guān)?？梢?AR的表達(dá)可反映 IDC的分化程度和惡性程度，可作為臨床判斷預(yù)后的又一指標(biāo)。

研究[7]表明，AR表達(dá)陽性率越高，組織學(xué)分級越低，腫瘤直徑越小，淋巴結(jié)受累數(shù)目越少，且與 ER、PR陽性表達(dá)呈正相關(guān)，而大部分研究未發(fā)現(xiàn) AR表達(dá)與年齡、臨床分期等臨床病理特征有關(guān)。本研究表明，在乳腺 IDC中 AR的表達(dá)與年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及 TNM分期無關(guān)，而與 IDC的組織學(xué)分級有關(guān)。有研究顯示 AR的表達(dá)與年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級以及 HER-2無關(guān)，而與ER和PR有關(guān)[5]；而Ogawa等[8]應(yīng)用免疫組化法檢測227例原發(fā)性乳腺癌中 AR的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)越小的腫瘤AR陽性率越高。部分研究結(jié)果的不一致，如AR表達(dá)是否與 IDC的腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及 TNM分期有關(guān)，有待多中心性、大樣本量的進(jìn)一步研究。

雖然AR在乳腺癌組織中有較高的表達(dá)，但其在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中的作用一直存在爭議。有流行病學(xué)研究[9]認(rèn)為，雄激素是乳腺癌發(fā)病的相關(guān)因素，在參與乳腺癌發(fā)生發(fā)展中，雄激素一方面能直接與雌激素協(xié)同刺激乳腺癌細(xì)胞的生長和增生；另一方面在 ER/PR陰性的乳腺癌中則通過間接地轉(zhuǎn)化為雌激素的途徑而發(fā)揮其作用[10]。Loibl等[11]研究顯示AR陽性患者的無病生存期(DFS)及總生存期(OS)比AR陰性的乳腺癌患者更長，在三陰性乳腺癌患者中尤為明顯。Castellano等[12]發(fā)現(xiàn)在938例ER免疫組化陽性的乳腺癌患者中，AR陽性者的復(fù)發(fā)時間(TTR)及疾病特異性生存期(DSS)更長。因此認(rèn)為AR的表達(dá)與乳腺癌預(yù)后相關(guān)，AR陽性的乳腺癌患者預(yù)后更好,如DFS及OS。因此，AR可作為乳腺癌預(yù)后的指標(biāo)之一。

一項(xiàng)分析AR表達(dá)與488例乳腺癌患者預(yù)后關(guān)系的研究發(fā)現(xiàn)，AR陽性患者5年生存率較高(71.7% )，其無癥狀生存期約 4.08年，均優(yōu)于 AR陰性患者的50.7%和 3.02年;局部復(fù)發(fā)率為22.6%，亦低于AR陰性者的 52.2%[13]。我們的研究結(jié)果顯示，乳腺IDC的5年生存率為74.63%,其中AR陽性的5年生存率為81.93%,而AR陰性的為62.75%，AR陽性的乳腺 IDC患者的5年生存率高于AR陰性者。根據(jù) Kaplan-Meier生存曲線可得出乳腺IDC中 AR表達(dá)陽性的患者較AR表達(dá)陰性的患者生存期長，預(yù)后好。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)在 IDCⅠ～Ⅱ級中，AR表達(dá)陽性的患者較 AR表達(dá)陰性的患者生存期長；而在 IDCⅢ級中，AR表達(dá)陽性的患者與 AR表達(dá)陰性的患者生存期無差別。這可能的原因是乳腺 IDCⅢ級分化差、惡性程度高、AR表達(dá)低所致。Peters等[14]認(rèn)為 AR是一個獨(dú)立的預(yù)后因素，低水平的 AR使癌癥相關(guān)死亡的風(fēng)險(xiǎn)增加 4.6倍。這可能機(jī)制是 AR通過結(jié)合部分的 ERE，可以防止激活靶基因介導(dǎo)的17B-雌二醇對乳腺癌細(xì)胞的刺激作用；同時雄激素對乳腺癌細(xì)胞的抑制作用不僅僅是通過雌激素水平及其作用的下降，有研究[15]顯示雄激素可通過 AR直接抑制腫瘤細(xì)胞的生長。因此AR的檢測將有助于細(xì)化乳腺癌的分子分型,并有可能成為新的治療靶點(diǎn)。

總之，目前研究提示乳腺癌 AR陽性表達(dá)通常與患者生存期有關(guān)；與臨床病理特征的關(guān)系有待進(jìn)一步明確。AR在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中的作用尚需深入研究；但 AR的測定對評估乳腺癌的生物學(xué)特性和預(yù)后判斷有重要意義。

[1] Dowsett M,Dunbier AK.Emerging biomarkers and new understanding of traditional markers in personalized therapy for breast cancer[J].Clin Cancer Res,2008,14:8019-8026.

[2] 李瑞亮，周濤，周冰峰，等.原發(fā)性乳腺癌組織中雄激素受體的表達(dá)及臨床病理指標(biāo)的關(guān)系[J].腫瘤防治研究，2012,39(3):292-294.

[3] Wolff A C,Hammond M E,Hicks D G, et al. Recommendations for human epidermal growth factor receptor 2 testing in breast cancer:american society of clinical oncology/college of american pathologists clinical practice guideline update[J].Arch Pathol Lab Med,2014,138(2):241-256.

[4] Hu R，Dawood S，Holmes MD，et al．Androgen receptor expression and breast cancer survival in postmenopausal women[J]．Clin Cancer Res，2011，17( 7):1867-1874．

[5] Yu Q，Niu Y，Liu N，et al．Expression of androgen receptor in breast cancer and its significance as a prognostic factor[J]．Ann Oncol，2011，22(6):1288-1294．

[6] Gasparini P，F(xiàn)assan M，Cascione L，et al． Androgen receptor status is a prognostic marker in non-basal triple negative breast cancers and determines novel therapeutic options[J/OL].PLoS One，2014，9(2):e88525．

[7] Qi JP，Yang YL，Zhu H，et al.Expression of the androgen receptor and its correlation with molecular subtypes in 980 Chinese breast cancer patient[J]．Breast Cancer，2012，6:1-8．

[8] Ogawa Y ,Hai E,Matsumoto K,et al.Androgen receptor expression in breast cancer：relationship with clinicopathological factors and biomarkers[J].Int J Clin Oncol,2008,13:431-435.

[9] Sieri S,Krough V,Bolelli G,et al.Sex hormone levels,breast cancer risk,and cancer receptor status in postmenopausal women;the OR-DET Cohort[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2009,18(1):169-176.

[10] Tsutsumi Y.Apocrine carcinoma as triple-negative breast cancer:novel definition of apocrine-type carcinoma as estrogen/progesterone receptor-negative and androgen receptor-positive invasive ductal carcinoma[J]. Jpn J Clin Oncol，2012，42(5):375-386.

[11] Loibl S，Muller BM，Von-Minckwitz G，et al．Androgen receptor expression in primary breast cancer and its predictive and prognos-tic value in patients treated with neoadjuvant chemotherapy[J].Breast Cancer Res Treat，2011,130(2):477-487．

[12] Castellano I，Allia E，Accortanzo V，et al． Androgen receptor expression is a significant prognostic factor in estrogen receptor positive breast cancers[J].Breast Cancer Res Treat，2010,124(3):607-617．

[13] Chae BJ，Lee A，Bae JS，et al． Expression of nuclear receptor DAX-1 and androgen receptor in human breast cancer[J]．J Surg Oncol，2011，103(8):768-772.

[14] Peters AA, Buchanan G, Ricciardelli C，et al. Androgen receptor inhibits estrogen receptor-alpha activity and is prognostic in breast cancer[J]. Cancer Res，2009,69:6131-6140.

[15] Aube M,Larochelle C,Ayotte P.1-dichloro-2,2-bis(pchlorophenyl)ethylene(p,p'-DDE)disrupts the estrogen-androgen balance regulating the growth of hormone-dependent breast cancer cells[J].Breast Cancer Res,2008,10(1):R16.

Relationship with the clinicopathologic characteristics and prognosis and its expression of androgen receptor in breast invasive ductal carcinoma

ChenQijiu1,DingTintin1,ZhengZheng2,WangGuodong1,LiuQilong1,ZhengHong3.

1.Grade2012CollegeStudentsInnovationTeamofZunyiMedicalCollege.Zunyi563000,Guizhou，China. 2.WestChinaCollegeofStomatology,SichuanUniversity.Chengdu610000,Sichuan,China. 3.DepartmentofPathology,AffiliatedHospitalofZunyiMedicalCollege,Zunyi563000,Guizhou，China.

Objective To investigate the relationship with the clinicopathologic characteristics and prognosis and its expression of androgen receptor in breast invasive ductal carcinoma (IDC).Methods Immunohistochemical staining EnVision and image analysis were used to detect the expression and the average light density of AR in 134 cases of breast IDC tissuemicroarray. Clinicopathologic features and follow-up data were analyzed by Kaplan-Meier method and log-rank test. Results The positive rate of AR was 61.94% (83/134) in IDC. Among the histologic grade Ⅰ, Ⅱ and Ⅲ, the positive expression rate of AR was respectively 100%, 71.76% and 38.10%, and MOD was respectively 0.38, 0.26 and 0.15. The expression of AR was negatively correlated with histologic grade (P<0.05), the higher the AR expression was the lower the histological grade was. But the expression of AR were not correlated with age, tumor size, lymph node and TNM stage (P>0.05). Kaplan-Meier survival curve showed that the overall survival of patients with AR positive breast IDC were longer than that of AR negative breast IDC patients which there were statistical significantly differences (P<0.05). Conclusion The higher the expression of AR is, the lower histological grade is in breast IDC patients. Breast IDC patients with AR positive expression has the better prognosis than that of AR negative expression.

Breast invasive ductal carcinoma； Androgen receptor； Immunohistochemistry； Clinicopathologic characteristics； Prognosis

貴州省科技廳聯(lián)合基金[黔科合 LH字(2015)7455號；貴州省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(2014)10661017

R737.9

A

1000-744X(2016)10-1015-04

2016-05-14)

△通信作者，E-mail:zhenghonghq@hotmail.com