摘要：采用紫外可見分光光度計測定綠原酸含量，通過單因素試驗和正交試驗，優(yōu)化超聲輔助下提取杏（Prunus armeniaca）花中綠原酸的最佳工藝。結果表明，最佳提取條件是料液比1∶25（g∶mL），超聲時間80 min，超聲功率80 W，乙醇體積分數60%，在此條件下，杏花中綠原酸含量為4.452%。杏花中含有豐富的綠原酸，超聲波輔助提取法工藝簡單，操作方便，效率高。

關鍵詞：杏（Prunus armeniaca）花；綠原酸；正交試驗；優(yōu)化

中圖分類號：R284.2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）15-3965-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.15.042

Abstract： The content of chlorogenic acid was determined by an ultraviolet visible spectrophotometric method. The ultrasonic-assisted extraction of chlorogenic acid in apricot（Prunus armeniaca） blossom was optimized by a single factor test and an orthogonal experiment. The results showed that the optimal extraction conditions were ultrasonic irradiation time 80 min，volume fraction of ethanol 60%，ultrasonic power 80 W，liquid and material ratio 1∶25（g∶mL）. Under the extraction conditions，the chlorogenic acid content in apricot blossom was 4.452%. Apricot blossom contains rich chlorogenic acid，ultrasonic assisted extraction process is simple，convenient operation，high efficiency.

Key words： apricot（Prunus armeniaca） blossom；chlorogenlc acid；orthogonal experiment；optimization

杏花是薔薇科杏（Prunus armeniaca）樹的花，味苦、性溫、無毒，主治不孕、肢體痹痛、手足逆冷，可治痤瘡、祛斑，具有中醫(yī)美容的功效[1]。杏花還具有清熱去毒、生津止渴、開胃消食的功效，民間常用杏花治療慢性氣管炎、哮喘以及各種皮膚病。但目前關于杏花的化學成分或藥理作用報道的較少，本試驗通過單因素試驗和正交試驗，優(yōu)化超聲輔助下提取杏花中綠原酸的最佳工藝，為進一步研究杏花的藥理作用和開發(fā)杏花的經濟價值提供理論支撐。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑和儀器

杏花采摘于寧夏師范學院校園，將新鮮的杏花用蒸餾水洗滌后，瀝干，放入恒溫箱中，60 ℃烘至重，陰干，粉碎，過70目篩，備用。綠原酸對照品（上海源葉生物科技有限公司，批號20121117，含量≥98%）；乙醇、乙酸丁酯、甲酸、乙酸、氯化鐵等試劑均為國產分析純。

KQ5200DB型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；SHB-3型循環(huán)水多真空泵（鄭州杜甫儀器廠）；UV-1750型紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司）；FA2204B型電子天平（上海精科天美科學儀器有限公司）；FW200A型高速萬能粉碎機（北京科偉永興儀器有限公司）；DHG-9076A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 杏花中綠原酸的定性鑒別

1）精確稱取110 ℃干燥的綠原酸對照品2 mg于棕色試劑瓶中，用10 mL甲醇溶解，制成濃度為0.2 mg/mL的對照液[2]。

2）稱取0.2 g預處理過的杏花樣品，量取60%的乙醇4 mL將其浸潤30 min，在功率90 W下超聲提取80 min，過濾，在相同條件下提取2次，合并濾液，減壓蒸餾，得到粗提物。將粗提取物用甲醇溶解后作為供試液。

3）取對照液、供試液各10 μL，分別點于同一硅膠薄層板上，用乙酸丁酯-甲酸-水（14∶1∶1）為展開劑，展開，取出晾干，在紫外燈（365 nm）下觀察薄層色譜上對照液和供試液相應位置，顯示相同的斑點，再在薄層色譜上噴2% FeCl3溶液，發(fā)現供試液和對照液在相同位置顯示清晰的亮黃色斑點，證明供試液中含有綠原酸[3-5]。

1.2.2 杏花中綠原酸的提取及含量測定

1）標準曲線的繪制。準確稱取110 ℃干燥的綠原酸對照品1.0 mg，用乙醇溶解，定容至50 mL，配制成20 μg/mL的綠原酸對照品儲備液。取0.5 mL綠原酸對照品儲備液于10 mL容量瓶中，加乙醇定容，搖勻，在250～500 nm波長范圍內掃描，確定綠原酸對照品的最大吸收波長為331 nm。用乙醇將綠原酸對照品配制成質量濃度為2.0、5.0、7.5、10.0和12.5 μg/mL的溶液，在最大吸收波長331 nm處測定其吸光度（A），并以吸光度A為縱坐標、綠原酸質量濃度C（μg/mL）為橫坐標，繪制標準曲線[6]，得到回歸方程A=0.035 7C+0.01，R2=0.999 4，表明綠原酸對照品質量濃度在2～20 μg/mL范圍內具有良好的線性關系。

2）杏花中綠原酸的提取。準確稱取一定量預處理過的杏花樣品，按一定的料液比、乙醇的體積分數，浸潤30 min，超聲，浸提過濾，相同條件下連續(xù)提取2次，將濾液合并在60 ℃下減壓蒸餾，得到綠原酸粗提物。將綠原酸粗提物用體積分數為70%的乙醇溶解，定容至100 mL，得到綠原酸樣品溶液。

3）綠原酸含量的測定。取樣品溶液1.00 mL，用乙醇稀釋定容至100 mL，測定波長331 nm處樣品的吸光度。

綠原酸含量（g）=提取液的體積（mL）×綠原酸粗體液濃度（μg/mL）×稀釋的倍數×10-6

綠原酸提取率=綠原酸的提取量/杏花樣品質量×100%

1.2.3 單因素試驗

1）料液比對杏花中綠原酸提取率的影響。稱取1.00 g預先處理過的杏花樣品5份，用體積分數為70%的乙醇，料液比分別為1∶10、1∶15、1∶20、1∶25和1∶30（g∶mL，下同）浸潤樣品30 min，超聲功率80 W，超聲時間60 min，進行試驗。

2）超聲時間對杏花中綠原酸提取率的影響。稱取1.00 g預先處理過的杏花樣品5份，70%乙醇，將樣品浸潤30 min，料液比1∶25，超聲功率80 W，分別在超聲時間40、60、80、100、120 min進行試驗。

3）超聲功率對杏花中綠原酸提取率的影響。稱取1.00 g預先處理過的杏花樣品5份，用70%乙醇，將樣品浸潤30 min，料液比1∶25，超聲時間80 min，分別在超聲功率60、70、80、90、100 W下進行試驗。

4）乙醇體積分數對杏花中綠原酸提取率的影響。稱取1.00 g預先處理過的杏花樣品5份，超聲功率80 W，超聲時間80 min，料液比1∶25，分別用體積分數50%、60%、70%、80%、90%乙醇將樣品浸潤30 min，進行試驗。

1.2.4 正交試驗 在單因素試驗的基礎上，采用4因素3水平正交試驗對提取過程中料液比（A）、超聲時間（B）、超聲功率（C）和乙醇體積分數（D）進行試驗，正交試驗因素和水平見表1。

2 結果與分析

2.1 單因素試驗結果

2.1.1 料液比對杏花中綠原酸提取率的影響 由圖2可知，杏花中綠原酸提取率開始隨料液比的增大而增大，當料液比大于1∶25時，提取率隨著料液比的增大而降低。因此，確定1∶25為杏花中綠原酸提取最適宜料液比。

2.1.2 超聲時間對杏花中綠原酸提取率的影響 試驗結果（圖3）表明，杏花中綠原酸提取率隨超聲時間的延長而增大，超聲時間為80 min時提取率最大，達到2.249%，之后提取率隨超聲時間的延長而降低。因此，確定80 min為最適宜的超聲時間。

2.1.3 超聲功率對杏花中綠原酸提取率的影響 如圖4所示，杏花中綠原酸的提取率隨超聲功率的增大而增大，超聲功率為80 W時提取率最大，隨后綠原酸的提取率又隨超聲功率的增大而降低。這可能是因為隨著超聲功率的增大，杏花細胞的破碎作用加強，綠原酸的提取率增大，但繼續(xù)增大時隨著細胞破碎作用的增強，溶解的雜質增大，對綠原酸的吸附作用增大，導致綠原酸提取率下降[7]。因此，選擇超聲功率為80 W。

2.1.4 乙醇體積分數對杏花中綠原酸提取率的影響 如圖5所示，乙醇體積分數為60%時杏花中綠原酸提取率最大，故確定乙醇體積分數為60%最適宜提取綠原酸。

2.2 正交試驗結果

表2直觀分析結果表明，影響超聲波輔助提取杏花中綠原酸的主要因素是料液比，影響因素的大小順序依次為料液比>超聲時間>乙醇體積分數>超聲功率，最佳提取條件為A2B2C2D3。

方差分析結果（表3）顯示，料液比和超聲時間這兩個因素對超聲波輔助提取杏花中綠原酸有顯著影響，超聲功率、乙醇體積分數對綠原酸提取率無顯著影響。因此，提取過程中要嚴格控制料液比和超聲時間，超聲功率和溶劑體積分數可適當降低。根據正交試驗結果，綜合考慮單因素試驗結果，杏花中綠原酸最佳提取工藝為料液比為1∶25、超聲時間為80 min，超聲功率80 W，乙醇體積分數60%。

2.3 驗證試驗

取適量粉碎后的杏花，在正交試驗所得優(yōu)化提取工藝條件下進行驗證試驗，得到綠原酸平均含量為4.452%（n=3）。

3 結論

利用超聲波輔助法提取杏花綠原酸，工藝簡單，易于操作，提取效率較高?？紤]單因素試驗、正交試驗結果，杏花中綠原酸最佳提取工藝為料液比1∶25、超聲時間80 min，超聲功率80 W，乙醇體積分數60%。

參考文獻：

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