摘要：本試驗(yàn)旨在研究產(chǎn)植酸酶芽孢桿菌對(duì)艾維茵肉雞生產(chǎn)性能、免疫器官指數(shù)和腸道菌群的影響。選取240只1日齡健康艾維茵肉雞，隨機(jī)分4組，每組20只，3個(gè)重復(fù)。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧；試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組在基礎(chǔ)飼糧中分別添加終濃度為1.0×106、1.0×107和1.0×108 CFU/g的產(chǎn)植酸酶芽孢桿菌制劑，試驗(yàn)期為42 d。結(jié)果表明，在1～42日齡時(shí)，試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組的平均日增重顯著高于對(duì)照組（P<0.05），試驗(yàn)Ⅱ組的料重比顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。產(chǎn)植酸酶芽孢桿菌對(duì)肉雞的免疫器官指數(shù)無顯著差異（P>0.05），但試驗(yàn)組與對(duì)照組相比均有提高趨勢(shì)，其中試驗(yàn)Ⅱ組免疫器官指數(shù)最高。21日齡時(shí)，試驗(yàn)Ⅱ組腸道乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量極顯著地高于對(duì)照組（P<0.01），各試驗(yàn)組的大腸桿菌數(shù)量均極顯著地低于對(duì)照組（P<0.01）；42日齡時(shí)，各試驗(yàn)組的乳酸桿菌數(shù)量極顯著地高于對(duì)照組（P<0.01），各試驗(yàn)組的雙歧桿菌數(shù)量顯著高于對(duì)照組（P<0.05），各試驗(yàn)組的大腸桿菌數(shù)量極顯著地低于對(duì)照組（P<0.01）。由此可知，飼料中添加一定量的產(chǎn)植酸酶芽孢桿菌具有提高艾維茵肉雞的生產(chǎn)性能、免疫器官指數(shù)和改善腸道菌群的作用，其中按1×107 CFU/g劑量添加效果最好。

關(guān)鍵詞：芽孢桿菌；植酸酶；艾維茵肉雞；生產(chǎn)性能；免疫器官指數(shù)；腸道菌群

中圖分類號(hào)：S831 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2016）15-3942-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.15.035

Abstract： This experiment was conducted to investigate the effects of phytase producing Bacillus on the production performance，immune organ index and intestinal microbiota in avain broiler. A total of 240 one-day old broiler chicken were randomly divided into 4 groups with 20 chicken per group and， 3 replicates. Control group（Group） were fed the basal diet，the test group（GroupⅠ，Ⅱ，Ⅲ） were fed with the basal diet and different dose of Bacillus（1.0×106 CFU/g，1.0×107 CFU/g，1.0×108 CFU/g） respectively. The experiment lasted for 42 days. The results showed as follow： Compared with the control group， the average daily gain in group Ⅰand Ⅱ were significantly increased（P<0.05），and the feed/weight ratio of broilers in group Ⅱ were significantly decreased（P<0.05） during day 1 to 42. There was an increasing trend in the immune organ index between experimental groups and the control group，and the immune organ index in group Ⅱ was highest，but there were no significant differences in all groups（P>0.05）. On day 21，compared with the control group，the number of Lactobacillus and Bifidobacterium in the intestinal of group Ⅱwere significantly increased（P<0.01），and the number of E. coli in the intestinal of all test groups were significantly decreased（P<0.01）. On day 42，compared with the control group，the number of lactobacillus in the intestinal of all test groups were significantly increased（P<0.01），the number of Bifidobacterium in the intestinal of all test groups were significantly increased（P<0.05），and the number of E. coli in the intestinal of all test groups were significantly decreased（P<0.01）. The results suggest that supplementing a certain amount of phytase producing Bacillus to fodder can increase the production performance and immune organ index，improve the intestinal microbiota， and the optimum added dose was 1.0×107 CFU/g.

Key words： Bacillus； phytase； Avain broiler； production performance； immune organ index； intestinal microbiota

隨著對(duì)健康意識(shí)的不斷增強(qiáng)，人們對(duì)動(dòng)物性食品質(zhì)量愈加關(guān)注?？茖W(xué)研究表明人類的一些健康問題與肉、蛋、奶中的抗生素、激素和其他合成藥物的殘留有關(guān)[1]，所以動(dòng)物性食品中的藥物殘留已成為當(dāng)今最熱門的話題。近年來，為了尋找抗生素的替代品，國(guó)內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了大量研究，其中益生菌作為抗生素替代品已被廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)[2]。芽孢桿菌是最理想的微生物飼料添加劑，它不僅營(yíng)養(yǎng)需求簡(jiǎn)單，易于培養(yǎng)，而且抗逆性較強(qiáng)，還能分泌動(dòng)物所需的蛋白酶、淀粉酶及植酸酶等。動(dòng)物食用后能夠消耗其腸道內(nèi)的氧氣，抑制需氧致病菌的增殖，可以提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能和免疫功能[3]。植酸酶能夠提高飼料中植酸磷的利用率，解除植酸的抗?fàn)I養(yǎng)作用，提高飼料中礦物元素蛋白質(zhì)和氨基酸的利用率，以提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能。因此，本試驗(yàn)以前期分離的產(chǎn)植酸酶芽孢桿菌B.Ld2-C為飼料添加劑飼喂肉雞，通過檢測(cè)生產(chǎn)性能、免疫器官指數(shù)、腸道菌群數(shù)量等指標(biāo)，以評(píng)價(jià)該菌株開發(fā)為微生態(tài)菌種的可能性，并為其作為飼料添加劑替代抗生素在畜牧業(yè)上應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種 產(chǎn)植酸酶紡錘形賴氨酸芽孢桿菌B.Ld2-C制劑（經(jīng)液體發(fā)酵制備，含活菌數(shù)1×1010 CFU/g），由河南科技大學(xué)宏翔生物飼料實(shí)驗(yàn)室分離保存。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物分組與管理 選取1日齡健康艾維茵肉雞240只，隨機(jī)分為4組，每組20只，3個(gè)重復(fù)。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼料；試驗(yàn)組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組在基礎(chǔ)飼料中分別添加終濃度為1.0×106、1.0×107、1.0×108 CFU/g的產(chǎn)植酸酶芽孢桿菌B.Ld2-C制劑。試驗(yàn)期為42 d?；A(chǔ)飼料參照我國(guó)飼料成分及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值表（2014年第25版）肉雞營(yíng)養(yǎng)需求配制。試驗(yàn)期間各組飼養(yǎng)管理?xiàng)l件一致。

1.2 測(cè)定指標(biāo)

1.2.1 生產(chǎn)性能 分別在試驗(yàn)雞1、7、14、21、28、35、42日齡時(shí)空腹稱重，記錄各組雞的體重和耗料量，計(jì)算各組平均日增重、平均日采食量和料重比。

1.2.2 免疫器官指數(shù) 分別在雞只21 d和42 d時(shí)，從各組每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取3只雞稱重并剖殺，取脾臟、法氏囊和胸腺，剔除脂肪后稱重，計(jì)算免疫器官的絕對(duì)質(zhì)量并計(jì)算免疫器官指數(shù)，計(jì)算公式為：免疫器官指數(shù)（g/kg）=免疫器官重（g）/體重（kg）

1.2.3 腸道菌群 在上步剖殺雞的同時(shí)，取中段回腸約3 cm結(jié)扎后送實(shí)驗(yàn)室無菌取樣1 g，加入9 mL生理鹽水，充分混勻，進(jìn)行10梯度稀釋，取合適梯度的稀釋液20 μL分別滴種到乳酸桿菌（MRS培養(yǎng)基）、雙歧桿菌（BBL培養(yǎng)基）、大腸桿菌（伊紅-美蘭培養(yǎng)基）的專性培養(yǎng)基進(jìn)行相應(yīng)的微生物數(shù)量測(cè)定。用1 g腸內(nèi)容物所含細(xì)菌數(shù)量的對(duì)數(shù)[lg（CFU/g）]表示。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用單因素方差分析one-way ANOVA進(jìn)行差異性比較，差異顯著者用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P>0.05表示差異不顯著，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 產(chǎn)植酸酶芽孢桿菌對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響

產(chǎn)植酸酶芽孢桿菌對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響見表1。由表1可知，21日齡內(nèi)，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組的平均日增重均極顯著提高（P<0.01），且極顯著高于Ⅲ組（P<0.01）；試驗(yàn)Ⅱ組的料重比顯著低于其余各組（P<0.05），其余各組間的料重比無明顯差異（P>0.05）。22～42日齡，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組的平均日增重有上升的趨勢(shì)，但兩者間無顯著差異（P>0.05）。在1～42日齡，試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組的平均日增重顯著地高于對(duì)照組（P<0.05），料重比顯著地低于對(duì)照組（P<0.05）。

2.2 產(chǎn)植酸酶芽孢桿菌對(duì)肉雞免疫功能的影響

產(chǎn)植酸酶芽孢桿菌對(duì)肉雞免疫功能的影響見表2。由表2可知，各組間的胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)均無顯著差異（P>0.05），但試驗(yàn)組與對(duì)照組相比均有提高趨勢(shì)，表明添加芽孢桿菌能有效提高肉雞免疫器官指數(shù)?？傮w來講，試驗(yàn)Ⅱ組的免疫器官指數(shù)最高。

2.3 產(chǎn)植酸酶芽孢桿菌對(duì)肉雞主要腸道菌群的影響

從表3中可知，21日齡時(shí)，在乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量方面，試驗(yàn)Ⅱ組極顯著地高于對(duì)照組（P<0.01），試驗(yàn)Ⅰ組顯著高于對(duì)照組（P<0.05），試驗(yàn)Ⅲ組也高于對(duì)照組，但差異不顯著（P>0.05）；各試驗(yàn)組的大腸桿菌數(shù)量與對(duì)照組相比均極顯著地降低（P<0.01），各試驗(yàn)組之間差異不顯著（P>0.05）。42日齡時(shí)，各試驗(yàn)組的乳酸桿菌細(xì)菌數(shù)量極顯著的高于對(duì)照組（P<0.01），而大腸桿菌數(shù)量極顯著的低于對(duì)照組（P<0.01），各試驗(yàn)組的雙歧桿菌數(shù)顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。

3 討論

3.1 產(chǎn)植酸酶芽孢桿菌對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

Li等[4]研究發(fā)現(xiàn)，飼料里添加B. subtilis CGMCC 1.1086明顯促進(jìn)了AA肉雞的日增重和飼料轉(zhuǎn)化率。譚莉等[5]研究發(fā)現(xiàn)地衣芽孢桿菌制劑和枯草芽孢桿菌制劑能顯著提高1～21日齡肉雞平均日采食量和平均日增重，有增加料重比的趨勢(shì)。由此可見，飼料中添加芽孢桿菌對(duì)肉雞的生產(chǎn)性能有一定的促進(jìn)作用。本試驗(yàn)表明，肉雞日糧中添加一定劑量的芽孢桿菌制劑，可顯著提高肉雞的體重并降低料重比。本試驗(yàn)采用在飼料中添加菌粉的方式飼喂肉雞，劑量分別為1.0×106、1.0×107、1.0×108 CFU/g。從整個(gè)喂養(yǎng)過程來看，按照1.0×107 CFU/g劑量添加時(shí)，不管是在增加肉雞的平均體重還是降低料重比上，效果均優(yōu)于1.0×106、1.0×108 CFU/g劑量添加組，表明菌量加的過多或過少都不能明顯增加肉雞的生長(zhǎng)性能，有時(shí)反而會(huì)降低生長(zhǎng)性能。

3.2 產(chǎn)植酸酶芽孢桿菌對(duì)免疫功能的影響

禽類最重要的免疫器官就是胸腺、脾臟和法氏囊，其中胸腺是細(xì)胞免疫的中樞器官，法氏囊是禽類特有的體液免疫器官，脾臟則是禽類最大的外周免疫器官，參與了全身的細(xì)胞免疫和體液免疫。免疫器官指數(shù)是這些免疫器官占活體體重的比例，這個(gè)比例反映了這些器官的相對(duì)發(fā)育程度，也反映了機(jī)體的免疫功能。近年的研究表明，芽孢桿菌能促進(jìn)動(dòng)物免疫器官的發(fā)育，能提高動(dòng)物機(jī)體的T細(xì)胞、B細(xì)胞的數(shù)量，提高動(dòng)物體液和細(xì)胞免疫的水平。林顯華等[6]研究發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌可顯著提高飼喂雛雞的脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)。潘寶海等[7]發(fā)現(xiàn)在肉雞日糧中添加芽孢桿菌能可明顯提高免疫器官指數(shù)和血清中IgG水平。李衛(wèi)芬等[8]研究表明枯草芽孢桿菌可促進(jìn)雛雞盲腸和回腸黏膜中IL-2、IL-4、IL-10和TNF-α的表達(dá)。本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組添加產(chǎn)植酸酶芽孢桿菌B.Ld2-C后其免疫器官指數(shù)高于對(duì)照組，按1×107 CFU/g劑量添加時(shí)，肉雞免疫器官指數(shù)最高，表明在飼料中添加一定量的芽孢桿菌可提高機(jī)體的免疫水平。

3.3 產(chǎn)植酸酶芽孢桿菌對(duì)肉雞腸道菌群的影響

一般來說，健康動(dòng)物腸道中各種細(xì)菌的比例基本是保持不變，動(dòng)物長(zhǎng)期持續(xù)飼喂芽孢桿菌可產(chǎn)生病原菌拮抗物質(zhì)，拮抗腸道病原細(xì)菌，起到維護(hù)和調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡的作用。芽孢桿菌為需氧菌，在生長(zhǎng)過程中需要大量的氧氣，大量吸收了動(dòng)物腸道內(nèi)游離的氧，降低了腸道內(nèi)氧的濃度，有利于乳酸桿菌、雙歧桿菌等厭氧菌的生長(zhǎng)，同時(shí)使腸道中需氧菌的生長(zhǎng)受到抑制，從而提高動(dòng)物機(jī)體的抗病能力。葉玉娥等[9]將芽孢桿菌制劑飼喂肉雞后可顯著降低肉雞盲腸道內(nèi)的大腸桿菌數(shù)。楊家軍等[10]研究表明，在痳雞日糧中添加地衣芽孢桿菌能增加腸乳桿菌和雙歧桿菌數(shù)量，減少腸球菌和葡萄球菌的數(shù)量。本試驗(yàn)中添加植酸酶芽孢桿菌B.Ld2-C肉雞的乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量均上升，大腸桿菌數(shù)量下降，其中1.0×106 CFU/g和1.0×107 CFU/g添加量的作用更明顯，表明產(chǎn)植酸酶芽孢桿菌B.Ld2-C可以優(yōu)化腸道菌群結(jié)構(gòu)，促進(jìn)有益菌的增殖。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加產(chǎn)植酸酶芽孢桿菌B.Ld2-C可顯著提高艾維茵肉雞的生產(chǎn)性能，極顯著地改善腸道菌群，且可提高免疫器官指數(shù)，按1.0×107 CFU/g劑量添加的效果優(yōu)于其他添加劑量。

參考文獻(xiàn)：

[1] 高旭東，黃 鑫，郝寶成，等.動(dòng)物源性食品中性激素殘留的危害及檢測(cè)方法[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2015（21）：274-277.

[2] WANG J H，ZHAO L Q，LIU J F，et al. Effect of potential probiotic Rhodotorula benthica D30 on the growth performance， digestive enzyme activity and immunity in juvenile sea cucumber Apostichopus japonicus[J].Fish Shellfish Immunol，2015， 43（2）：330-336.

[3] LIU X，CAO G，WANG Q，et al. The effect of Bacillus coagulans-fermented and nonfermented Ginkgo biloba on the immunity status of broiler chickens[J]. J Anim Sci，2015，93（7）： 3384-3394.

[4] LI Y，XU Q，HUANG Z，et al. Effect of Bacillus subtilis CGMCC 1.1086 on the growth performance and intestinal microbiota of broilers[J]. J Appl Microbiol，2016，120（1）：195-204.

[5] 譚 莉，袁 棟，張?jiān)票?，?不同類型芽孢桿菌制劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能和排泄物氨逸失的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2012，24（5）： 877-885.

[6] 林顯華，孫合美，谷 巍.枯草芽孢桿菌B7對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能及免疫性能的影響[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2013，40（2）：91-95.

[7] 潘寶海，孫冬巖，王文娟，等.芽孢桿菌對(duì)肉雞免疫機(jī)能的影響[J].飼料研究，2014（21）：46-47.

[8] 李衛(wèi)芬，文 靜，吳紅照，等.枯草芽孢桿菌對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能和腸黏膜抗氧化及免疫功能的影響[J].中國(guó)畜牧雜志，2011，47（9）： 58-61.

[9] 葉玉娥，葉 明，張 蓉，等.芽孢桿菌制劑對(duì)艾維茵肉雞胴體性能和腸道菌群的影響[J].浙江大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版）， 2012，38（3）：305-310.

[10] 楊家軍，錢 坤，章 薇，等.地衣芽孢桿菌對(duì)肉雞腸道菌群和小腸形態(tài)學(xué)的影響研究[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2014，34（4）：664-668.