蒙明姜，王剛林，楊巧虹，李 麗

（重慶醫(yī)療器械質(zhì)量檢驗(yàn)中心，重慶 401147）

含吲哚美辛硅橡膠宮內(nèi)節(jié)育器中吲哚美辛的載藥量及在模擬宮腔液中的釋放研究*

蒙明姜，王剛林，楊巧虹，李 麗

（重慶醫(yī)療器械質(zhì)量檢驗(yàn)中心，重慶 401147）

目的 測(cè)定含吲哚美辛硅橡膠宮內(nèi)節(jié)育器中吲哚美辛的載藥量及其在模擬宮腔液中的釋放量。方法 采用高效液相色譜（HPLC）法，色譜柱為SB－C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm），流動(dòng)相為0．1 mol／L冰醋酸－乙腈（1∶1），流速為1．0 mL／min，檢測(cè)波長為228 nm，檢測(cè)溫度為37℃。結(jié)果 吲哚美辛載藥量均在標(biāo)示量的±10%范圍內(nèi)；吲哚美辛在模擬宮腔液中的釋放速率起初較快，3～14 d后逐漸遞減，最后基本趨于緩慢、平穩(wěn)釋放，且在同一數(shù)量級(jí)（20～85 μg／d）。結(jié)論 HPLC法用于測(cè)定含吲哚美辛硅橡膠中吲哚美辛的載藥量及其在模擬宮腔液中的釋放量，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可滿足相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量檢測(cè)與控制。

宮內(nèi)節(jié)育器；含吲哚美辛硅橡膠；吲哚美辛；模擬宮腔液；載藥量；釋放量

宮內(nèi)節(jié)育器（IUD）是一種安全、有效、簡便、經(jīng)濟(jì)、可逆的長效避孕工具，僅通過作用于子宮局部而發(fā)揮避孕作用，對(duì)全身干擾較少，已被育齡婦女普遍接受，成為全球特別是亞洲地區(qū)使用最廣泛的避孕方法。我國是使用宮內(nèi)節(jié)育器最多的國家，其使用量約占全球的70%[1]。宮內(nèi)節(jié)育器最先由波蘭醫(yī)生Riehard Richter于1909年設(shè)計(jì)，由蠶腸線構(gòu)成。1974年出現(xiàn)了含銅的宮內(nèi)節(jié)育器，其抗生育效應(yīng)明顯增強(qiáng)[1]。將吲哚美辛添加到硅橡膠中，再放入宮內(nèi)節(jié)育器中或緊密包裹宮內(nèi)節(jié)育器，所制成的含吲哚美辛硅橡膠宮內(nèi)節(jié)育器植入人體子宮后，可長時(shí)間地釋放吲哚美辛，從而達(dá)到減輕放置節(jié)育器初期疼痛和防治經(jīng)量增多的目的[2]。

對(duì)于硅橡膠中吲哚美辛的含量及其釋放量，目前尚無相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)。剛出臺(tái)的推薦性行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中要求，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)對(duì)產(chǎn)品中的吲哚美辛含量和在模擬宮腔液中的釋放量進(jìn)行規(guī)定，但并未細(xì)化每種含吲哚美辛硅橡膠型號(hào)節(jié)育器中吲哚美辛含量和釋放量的具體值。目前，對(duì)節(jié)育器中吲哚美辛釋放量的相關(guān)研究較少[3－5]。為此，筆者選取了3種不同規(guī)格的市售含吲哚美辛硅橡膠宮內(nèi)節(jié)育器，采用高效液相色譜（HPLC）法檢測(cè)其硅橡膠中吲哚美辛的載藥量，并對(duì)其體外（模擬宮腔液中）釋放量進(jìn)行考察，旨在為該類產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；CPA225D型電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器＜北京＞有限公司）。

1．2 試藥與樣品

吲哚美辛標(biāo)準(zhǔn)品（中國食品藥品檢定研究院，編號(hào)為0258－9602）；冰乙酸、乙腈、甲醇為分析純。樣品1：元宮型含銅含吲哚美辛宮內(nèi)節(jié)育器（煙臺(tái)計(jì)生器械有限公司）；樣品2：圓形含銅含吲哚美辛宮內(nèi)節(jié)育器（上海醫(yī)用縫合針廠）；樣品3：γCu含吲哚美辛記憶合金宮內(nèi)節(jié)育器（上海醫(yī)用縫合針廠）。

2 方法與結(jié)果

2．1 硅橡膠中吲哚美辛載藥量測(cè)定

2．1．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)[6]

色譜柱：SB－C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0．1 mol／L冰醋酸－乙腈（1∶1）；流速：1．0 mL／min；檢測(cè)波長：228 nm；檢測(cè)溫度：37℃；進(jìn)樣量：20 μL。在此色譜條件下，吲哚美辛的理論板數(shù)不低于2 000，色譜峰與相鄰峰的分離度大于1．5。色譜圖見圖1。

2．1．2 溶液制備

稱取吲哚美辛標(biāo)準(zhǔn)品25．3 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，以25 mL甲醇溶解，再以甲醇定容至刻度，制成質(zhì)量濃度為253 μg／mL的溶液，即得吲哚美辛標(biāo)準(zhǔn)貯備液。

圖1 吲哚美辛高效液相色譜圖

取含銅含吲哚美辛宮內(nèi)節(jié)育器1只，取出全部含吲哚美辛硅橡膠，仔細(xì)切碎（無損耗），置100 mL圓底燒瓶中，加甲醇25 mL，水浴加熱回流1．5 h，放冷至室溫，將溶液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中；再加甲醇25 mL至圓底燒瓶中，繼續(xù)水浴回流1．5 h，放冷至室溫，將溶液轉(zhuǎn)移至上述100 mL容量瓶中；用甲醇洗滌圓底燒瓶數(shù)次，洗滌液合并入上述100 mL容量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品貯備液。同法不加樣品單獨(dú)制備空白溶液。

2．1．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：按一定梯度精密量取吲哚美辛標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，分別置100 mL容量瓶內(nèi)，用50%甲醇溶液（甲醇－水＝1∶1，V∶V）依次稀釋成質(zhì)量濃度為1．012，2．024，20．240，50．600，101．200，151．800 μg／mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，用HPLC法測(cè)定吸收峰面積，以質(zhì)量濃度(X，μg／mL)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y＝65．564 97 X－1．051 80，r＞0．999 9（n＝6）。結(jié)果表明，吲哚美辛質(zhì)量濃度在 1．012～151．800 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液20 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值。結(jié)果的 RSD為0．71%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品2，依法平行制備供試品溶液6份，精密吸取20 μL注入高效液相色譜儀，計(jì)算載藥量。結(jié)果平均載藥量為51．82%，RSD為1．14%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液（樣品2），分別于0，3，6，9，12，24 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定峰面積。結(jié)果的RSD為0．87%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取樣品2已測(cè)定質(zhì)量濃度的同一份供試品貯備液（測(cè)得質(zhì)量濃度為105．22 μg／mL）2 mL，置10 mL容量瓶中，再精密加入吲哚美辛標(biāo)準(zhǔn)貯備液2 mL，用50%甲醇溶液稀釋至刻度，同法制備同一質(zhì)量濃度的供試品溶液6份，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 吲哚美辛硅橡膠加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2．1．4 樣品含量測(cè)定

平行配置2份供試品貯備液。精密量取一定量的供試品貯備液，置25 mL容量瓶中，用50%甲醇溶液稀釋至刻度，作為供試品溶液，使其質(zhì)量濃度在標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度線性范圍內(nèi)，搖勻，精密量取20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程中，計(jì)算吲哚美辛的含量。取2份供試品溶液含量測(cè)定結(jié)果的平均值，按廠家標(biāo)示含量值計(jì)算節(jié)育器載藥量的 RSD，詳見表2。

表2 3種樣品硅橡膠中吲哚美辛含量測(cè)定結(jié)果

2．2 硅橡膠中吲哚美辛體外釋放量測(cè)定

模擬宮腔液配制：用去離子水分別溶解4．97 g氯化鈉、0．224 g氯化鉀、0．167 g氯化鈣、0．25 g碳酸氫鈉、0．50 g葡萄糖和 0．072 g二水合磷酸二氫鈉，置1 000 mL容量瓶中，再用去離子水稀釋至980 mL，并用1．0 mol／L的稀HCl溶液或1．0 mol／L的稀NaOH溶液將pH調(diào)至7．0±0．1，用去離子水定容，作為模擬宮腔液。

吲哚美辛標(biāo)準(zhǔn)貯備液制備：按2．1．2項(xiàng)下方法制備吲哚美辛標(biāo)準(zhǔn)貯備液，質(zhì)量濃度為297 μg／mL。

線性關(guān)系考察：按2．1．3項(xiàng)下方法試驗(yàn)，結(jié)果見表3。吲哚美辛的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為 Y＝65．838 18X－2．362 71，r＞0．999 9（n＝5），質(zhì)量濃度線性范圍為2．376～178．200 μg／mL。

表3 吲哚美辛測(cè)定方法學(xué)考察結(jié)果（n＝5）

樣品浸提液制備與檢測(cè)：隨機(jī)抽取含銅含吲哚美辛宮內(nèi)節(jié)育器5只，分別置50 mL具塞細(xì)口瓶中，每瓶加入50 mL模擬宮腔液，并使樣品全部浸入介質(zhì)中，將細(xì)口瓶置（37±0．5）℃的恒溫條件下。同時(shí)另取模擬宮腔液，作為空白對(duì)照溶液。浸提樣品時(shí)，第1周內(nèi)前4 d每天換液，第5～14 d換液時(shí)間分別為第7天、第10天和第14天。將更換下來的浸提液按2．1項(xiàng)下方法測(cè)定其吸收峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，計(jì)算浸提液中吲哚美辛日均釋放量。結(jié)果見表4。

表4 3種樣品硅橡膠中吲哚美辛釋放量測(cè)定結(jié)果

3 討論

選取的含吲哚美辛硅橡膠宮內(nèi)節(jié)育器樣品中，吲哚美辛載藥量的 RSD均在標(biāo)示量±10%范圍內(nèi)，載藥量符合推薦性行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)——《含銅宮內(nèi)節(jié)育器用含吲哚美辛硅橡膠技術(shù)要求與試驗(yàn)方法》[6]中載藥量±15%的要求。

硅橡膠中吲哚美辛D的釋放量與硅橡膠條（片）的加工工藝、載藥量、載藥濃度、浸提介質(zhì)、浸提介質(zhì)的pH、浸提溫度等多種因素有關(guān)[6]。與包裹在鋼絲中的硅橡膠相比，直接裸露的硅橡膠中吲哚美辛的初始釋放速率大10倍左右，其釋放過程均符合零級(jí)動(dòng)力學(xué)規(guī)律，起初的釋放速率較快，3～14 d后釋放速率逐漸遞減，基本趨于緩慢平穩(wěn)釋放且在同一數(shù)量級(jí)，但總的有效作用時(shí)間尚無定論，有待進(jìn)一步研究。

節(jié)育器作為我國計(jì)劃生育政策中廣泛應(yīng)用的計(jì)劃生育醫(yī)療器械，使用量大、面廣，雖已投入市場(chǎng)使用超過30年，但是對(duì)于產(chǎn)品的相關(guān)化學(xué)物質(zhì)溶出和生物學(xué)評(píng)價(jià)方面的研究，近幾年才開始得到關(guān)注和重視。本研究是按行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)在模擬宮腔液中進(jìn)行，便于試驗(yàn)操作和具有可重復(fù)性，但模擬宮腔液只能模擬子宮內(nèi)的pH、電解質(zhì)和溫度環(huán)境，無法模擬人體復(fù)雜的生物學(xué)結(jié)構(gòu)，在執(zhí)行行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的同時(shí)，希望可以建立動(dòng)物試驗(yàn)的相關(guān)試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，進(jìn)行進(jìn)一步研究。

含銅宮內(nèi)節(jié)育器用含吲哚美辛硅橡膠的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)將于2017年1月1日起實(shí)施，生產(chǎn)企業(yè)將在產(chǎn)品使用說明書中標(biāo)示產(chǎn)品的載藥量和在模擬宮腔液中的釋放速率，臨床醫(yī)生可根據(jù)使用者的實(shí)際情況選擇不同吲哚美辛載藥量和釋放速率的節(jié)育器，在避孕的同時(shí)能更好地發(fā)揮含吲哚美辛硅橡膠在節(jié)育器中的消炎作用。

[1]范光升 ．宮內(nèi)節(jié)育器歷史回顧[J]．中國計(jì)劃生育學(xué)雜志，2009，17（4）：251－252．

[2]修瑞杰，顧向應(yīng)．含吲哚美辛宮內(nèi)節(jié)育器中吲哚美辛的作用及其機(jī)制[J]．國際生殖健康 ／計(jì)劃生育雜志，2011，30（6）：454－457．

[3]高 潔，李 瑛，劉建平，等．活性元宮型藥銅365宮內(nèi)節(jié)育器體外釋放吲哚美辛的研究[J]．生殖與避孕，2006，26（10）：602－605．

[4]梁金英，李 瑛，劉建平，等．宮內(nèi)節(jié)育器（Cu－IUD）體外釋放Cu2＋以及含藥Cu－IUD體外釋放吲哚美辛的研究[J]．生殖與避孕，2008，28（1）：22－25．

[5]何澤文，牟善松．吲哚美辛載藥量對(duì)宮內(nèi)節(jié)育器基體材料性能及銅離子釋放的影響[J]．暨南大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版，2010，31（4）：378－380．

[6]YY／T 1471－2016，含銅宮內(nèi)節(jié)育器用含吲哚美辛硅橡膠技術(shù)要求與試驗(yàn)方法[S]．

Determination of Indomethacinin in the Intrauterine Device of Indomethacin Containing Silicone Rubber and Its Release in the Uterine Cavity Fluid Simulation Test

Meng Mingjiang，Wang Ganglin，Yang Qiaohong，Li Li
（Chongqing Quality Testing and Inspection Center for Medical Devices，Chongqing，China 401147）

Objective To determine the content of indomethacin in the intrauterine device of indomethacin containing silicone rubber and its release in the uterine cavity fluid simulation test．M ethods HPLC method was used．The chromatographic column was SB－C18column（4．6 mm×150 mm，5 μm），acetonitrile－0．1mol／L glacial acetic acid（1∶1）was used as the mobile phase at rate of 1．0 mL／min．The detection wavelength was 228 nm and the column temperature was 37℃．Results The drug loading of indomethacin in indomethacin rubber used for IUD was in the range of±10% of labelled amount．The initial rate of release in simulated uterine fluid was faster，after 3 to 14 d，the initial rate was gradually decreased，released slowly and steadily in the same order of magnitude（20－85 μg／d）．Conclusion The established method is accurate，reliable，and can satisfy the detection of the most forms of products on the market．

IUD；indomethacin rubber；simulated uterine fluid；drug loading capacity；release capacity

R194．5

A

1006－4931(2016)10－0020－04

蒙明姜（1981－），女，大學(xué)本科，工程師，主要從事無源醫(yī)療器械檢驗(yàn)工作，（電話）023－67786719（電子信箱）mmj－1217＠163．com；王剛林（1975－），男，重慶云陽人，大學(xué)本科，高級(jí)工程師，主要從事醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)及產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)化工作，本文通訊作者，（電話）023－67786713（電子信箱）494382568＠qq．com。

2016－01－10；

2016－02－15)

*全國計(jì)劃生育器械標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)資助課題，項(xiàng)目編號(hào)：N2014066－T－sh。