王 新，周 昱，廉奇鑫

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院腫瘤科，黑龍江 佳木斯 154003)

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FBXW7與KLF5在乳腺癌中的表達及臨床意義

王 新，周 昱，廉奇鑫

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院腫瘤科，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：研究FBXW7與KLF5在乳腺癌病變組織中的表達程度及兩個因子同臨床相應病理學特征之間的聯(lián)系以及兩者內在聯(lián)系，并闡明其在人類乳腺癌形成過程中的作用機制。方法：選取經佳木斯大學附屬第一醫(yī)院確診為乳腺癌并行手術治療的患者病理蠟塊，且再次由資深病理科醫(yī)生證實，通過采用ElivisionTM Plus/HRP免疫組化方法，分別檢測45例乳腺癌組織標本中FBXW7和KLF5兩個與癌癥相關基因的表達狀況，同時在應用軟件SPSS17.0的幫助下，采用傳統(tǒng)的統(tǒng)計學計算方法分析上述兩因子同臨床相應的病理學特點間的關系，最后探討FBXW7和KLF5是否存在相關的臨床指導意義。結果：乳腺癌中KLF5陽性表達率為82.22%，高于正常乳腺的17.78%；乳腺癌中FBXW7蛋白陽性表達為53.33%，低于正常乳腺中的100.00%；二組間差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論：KLF5在乳腺癌中表達明顯增強，F(xiàn)BXW7在乳腺癌中表達明顯降低，提示在乳腺癌發(fā)生中KLF5和FBXW7發(fā)揮一定作用，對KLF5、FBXW7的檢測可作為重要生物學指標。

乳腺癌； FBXW7；KLF5；表達

乳腺癌是最常見的人類惡性腫瘤之一，發(fā)病部位多見乳腺外上象限，腫塊多呈卵圓形或橄欖形，腫瘤通常平滑且邊界清楚，同乳房周圍組織無黏連，腫塊在乳腺內可以無阻推動，通常無自發(fā)痛和觸痛現(xiàn)象。根據最近世界衛(wèi)生組織對乳腺癌患者人數遞增人數調查發(fā)現(xiàn)，在一些發(fā)達地區(qū)由于人群醫(yī)療保障制度建設的合理，在一些常規(guī)檢查中就及時發(fā)現(xiàn)乳腺疾病。乳腺疾病發(fā)現(xiàn)的越早治療效果越好。

FBXW7也叫F框/WD-40域蛋白(F-box/WD repeat-containing protein 7，F(xiàn)BXW7)它還是是F-box蛋白家族成員[1]，又有學著給它其為CDC4、FBW7(F-盒和含蛋白7的WD重復結構域)、hCDC4、AGO、SEL-10，是泛素SCF連接酶的靶蛋白識別組分[2]。最近幾年研究表明，F(xiàn)BXW7是一種抑癌因子，在宮頸癌、胃癌、直腸癌中都發(fā)現(xiàn)了FBXW7的缺失和突變。目前發(fā)現(xiàn)FBXW7的靶蛋白包括CyclinE，c-myc，c-jun，Notch 1 and Notch 4等多種癌蛋白，F(xiàn)BXW7可以介導這些癌蛋白并發(fā)生降解。當發(fā)生細胞突變不但影響FBXW7蛋白的表達，而且還會使CyclinE，c-myc，c-jun，Notch 1 and Notch 4等信號通路異常，并導致細胞的分裂、細胞生長、凋亡以及細胞分化等進程紊亂。

近幾年發(fā)現(xiàn)一種新的轉錄因子人類 Kruppel 樣因子 5(KLF5)，它主要起調控基因的轉錄水平，更進一步影響了細胞的增殖及分化[3]，從而控制細胞的發(fā)生與發(fā)展，許多學者研究KLF5參與了多種腫瘤轉錄、已經有學者證明KLF5在胃癌組織其表達的高低與胃癌的惡性程度及預后顯著相關[3]。本課題研究通過免疫組化方法測驗45例乳腺癌、45例癌旁正常組織中FBXW7、KLF5兩因子的表達情況，并探索其臨床意義和FBXW7與KLF5在乳腺中是否有關系。

1.1 資料與方法

選取經佳木斯大學附屬第一醫(yī)院確診為乳腺癌并行手術治療的患者病理蠟塊，且再次由資深病理科醫(yī)生證實，病例選自佳木大學附屬醫(yī)院2012-08～2014-08的手術標本,全部病例均經病理診斷證實。臨床診斷和病理分類依據WHO標準。其中正常乳腺組45例，年齡23～57歲，平均(45.1±4.1)歲，乳腺癌組45例，年齡26～65歲，平均(47.4±4.9)歲，兩組患者年齡無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。研究對象術前均未進行選擇的對象均無放療、化療及激素替代治療史。

1.2 主要試劑

FBXW7兔抗單克隆抗體KLF5兔抗單克隆抗體都由北京博奧森生物技術有限公司產品生產，通用Elivision法試劑盒以及DAB顯色試劑都是從北京中衫金橋生物技術有限公司買入。

1.3 免疫組化

通過采用ElivisionTM Plus/HRP免疫組化方法，探討FBXW7、KLF5在乳腺癌及正常癌旁組織中的表達情況。

1.4 結果判定

FBXW7和KLF5評分標準:陽性細胞的百分率標準為：0分為0%；1分為1%～25%；2分為26%～50%；3分為51%～75%；4分為76%～100%；細胞的染色強度標準為：0分為無色；1分為淡黃色；2分為黃色；3分為棕黃色，以二者乘積為最終判定標準，1分以上為陽性。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS19.0軟件包處理。用卡方檢驗，兩因子與各因素相關性采用秩相關；均以α=0.05作為檢驗水準，P<0.05差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

乳腺癌中KLF5陽性表達率為82.22%，高于正常乳腺的17.78%；組間差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。KLF5的表達與癌組織大小、瘤體組織分化程度、病變淋巴轉移以及腫瘤TNM分期有關(P<0.05)；與患者的性別、發(fā)病年齡、病理學類型無關(P>0.05)。見表2。

表1 乳腺癌及正常乳腺中KLF5表達情況(n=45)

表2 KLF5的表達與乳腺癌臨床病理參數的關系

KLF5的表達與組織學分級、淋巴結轉移、腫塊大小和臨床分期均有相關性，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

乳腺癌中FBXW7蛋白陽性表達為53.33%，低于正常乳腺中的100.00%；組間差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。FBXW7的表達與癌組織的大小、瘤體組織分化程度、病變淋巴轉移以及腫瘤TNM分期有關(均P<0.05)；與患者的性別、發(fā)病年齡、病理學類型無關(P>0.05)。見表4。

表3 乳腺癌及正常乳腺中FBXW7表達情況(n=45)

表4 FBXW7表達與乳腺癌臨床病理參數的關系

FBXW7的表達與組織學分級、淋巴結轉移、腫塊大小和臨床分期均有相關性，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

3 討論

FBXW7(F框/WD-40域蛋白7)是一種近年來新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，很多學著在乳癌、卵巢癌、胰腺癌、直腸癌中都發(fā)現(xiàn)FBXW7的突變。并發(fā)現(xiàn)FBXW7通過介導泛素蛋白酶體途徑降解cyclinE蛋白、c-myc、c-jun、Notch、MCL1、KLF5和c-myb等多種癌蛋白[4～8]，在癌細胞的發(fā)展、轉移以及規(guī)律性變化的過程中能夠起到一定的控制作用。他在很多腫瘤細胞內里表達幾乎都是上升的，這是癌細胞以及潛在的癌細胞的共同結果。FBWX7與泛素連接酶E3結合作用在乳腺癌中，并且發(fā)揮生物學功能。FBWX7、SKP1/CUL1和RBX1形成SCF復合物后能夠形成泛素連接酶，并且發(fā)揮生物學功能。Mutsuko Ibusuki等[9]等人在研究FBXW7基因及其蛋白在187例乳腺癌患者中的表達水平時發(fā)現(xiàn)，在組織學分化高、ER(-)、PgP(-)的患者中，F(xiàn)BXW7mRNA的表達明顯受到抑制，這也支持FBXW7mRNA影響腫瘤細胞的細胞周期的觀點，按形態(tài)學對腫瘤細胞胞質進行評價時，組織學分級可以反映DNA的合成和有絲分裂[10]。在激素受體陰性的亞組中,FBXW7mRNA低表達。另外,FBXW7mRNA低表達還與Ki-67有這密切的關系。Yu等認為FBXW7第二內含子中的純和單核苷酸多態(tài)性與ER(-)和臨床分期較高的乳腺癌患者相關[2，11]。雖然現(xiàn)在還沒有更多的有關FBXW7和激素受體之間關系的報道,但在高分化類型乳腺癌患者中,有可能基因異常有增強癌細胞侵襲能力，在激素受體陰性的患者里。雖然FBXW7蛋白與mRNA的表達水平正相關,并能明確的反應患者預后,但它的臨床意義還是受到一定的束縛。為進一步了解FBXW7蛋白水平表達情況，本研究選擇了乳腺正常組織、乳腺癌組織，采用免疫組化的方法進行檢測，并結合臨床特征進行分析，結果回報：乳腺正常組織中FBXW7高表達，乳腺癌組織中FBXW7低表達，而且與乳腺癌分化程度、淋巴結轉移、臨床分期有關。FBXW7與患者歲數、病理類型無關。由此推測出癌組織的惡性程度、轉移情況都與FBXW7有這密切相關，有可能成為新的乳腺癌患者判定預后的新標準。

KLF 家族實質上可以說是蛋白質家族，它的家族中的因子基本結構域差不多，每個結構域的主要作用幾乎都是調節(jié)因子轉錄的，它們含有特定的鋅結構，鋅結構在表達過程中起了承上啟下作用，KLF家族共同特點作用在加入與調控生物內主要的細胞的生長及病理生理過程。國內外學者研究KLF家族與很多腫瘤都存在著一定關系，并且KLF5還在許多腫瘤(結腸、前列腺、胰腺、肺、乳腺等)的發(fā)生進展過程中都發(fā)揮了重要作用。大量研究結果表明，KLF5參加激活了PKC、MAPK通路等很多細胞增殖信號，并調節(jié)了許多細胞周期蛋白的表達，例如上調細胞周期正調節(jié)本周蛋白 D1,下調細胞周期 P21、P15 并加速了細胞分裂增殖以及細胞周期進程。KLF5也主動參加LPS介導的腸道腺上皮細胞炎癥病理反應[12]。在胃癌、結腸癌、直腸癌等[13]胃腸道腫瘤等其他腫瘤組織中，均可檢測到 KLF5 表達水平增高。然而在乳腺浸潤性導管癌中KLF5 的表達尚不十分清楚。因此對 KLF5在乳腺癌等其他相關腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及治療、預測預后等方面的研究逐漸廣泛[3]。

本研究結果顯示，正常乳腺全部表達為陽性，而45例乳腺癌中有24例FBXW7蛋白的表達為陽性，考慮可能為FBXW7基因突變或缺失所致，或FBXW7蛋白合成減少或分解旺盛所致。而KLF5蛋白在乳腺癌中陽性表達率為82.22%，明顯高于正常組的17.78%，說明KLF5蛋白參與乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展。KLF5在乳腺癌中表達明顯增強，F(xiàn)BXW7在乳腺癌中表達明顯降低，提示在乳腺癌發(fā)生中KLF5和FBXW7發(fā)揮一定作用，對FBXW7、KLF5的檢測可作為重要生物學指標。乳腺癌在產生時是取決癌細胞的增長和細胞死亡之間的平衡性喪失導致的。因此當乳腺癌組織出現(xiàn)細胞生長和死亡失去控制的時候，或者細胞出現(xiàn)突變等，則表示細胞生存狀態(tài)高于細胞的死亡率，則表明癌細胞有所發(fā)展?？梢愿鶕﨔BXW7、KLF5的檢測判斷腫瘤惡性程度情況。

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1.黑龍江省青年基金項目，編號：QC2013C013；2.佳木斯大學青年基金項目，編號：sq2013-013。

王新(1962～)男，黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫(yī)師，碩士研究生導師。

周昱(1969～)男，黑龍江集賢人，學士，副主任醫(yī)師，碩士研究生導師。E-mail:zhouyu731@126.com。

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1008-0104(2016)06-0049-03

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