王海云，戰(zhàn)玉清

（青島易邦生物工程有限公司，山東　青島　266114）

獸藥生產(chǎn)過程中壓縮氣體微生物檢測(cè)技術(shù)分析

王海云，戰(zhàn)玉清

（青島易邦生物工程有限公司，山東青島266114）

通過5種檢測(cè)方法，對(duì)獸藥生產(chǎn)過程中壓縮氣體微生物檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行分析，其中隔離取樣法最簡單、經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確。

壓縮氣體；檢測(cè)方法

獸藥GMP要求與獸藥直接接觸的干燥空氣、惰性氣體和壓縮空氣須定期進(jìn)行檢查，壓縮氣體在獸藥生產(chǎn)過程中直接接觸半成品或成品。因此，為減少獸藥污染，企業(yè)應(yīng)結(jié)合各自設(shè)備安裝情況制定壓縮空氣的檢查方法，提供檢測(cè)數(shù)據(jù)，指導(dǎo)并用于生產(chǎn)。

1　采樣與方法

1.1地點(diǎn)及采樣準(zhǔn)備

檢測(cè)地點(diǎn)：選擇生產(chǎn)車間局部百級(jí)灌裝區(qū)，壓縮空氣使用裝置采樣口。

采樣準(zhǔn)備：根據(jù)設(shè)定的采樣方法，準(zhǔn)備相應(yīng)的采樣器材、試劑和培養(yǎng)基等。

1.2采樣方法

1.2.1瓊脂平板取樣法：打開壓縮空氣閥門，控制氣體流速穩(wěn)定，適量放氣一定時(shí)間后，打開采樣平板蓋，采樣過程中旋轉(zhuǎn)平板時(shí)氣體充分接觸，2min后結(jié)束取樣，置培養(yǎng)箱內(nèi)48h后，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)即為2min壓縮氣體含菌量，每個(gè)取樣點(diǎn)測(cè)試2次，同時(shí)需做空白對(duì)照。

1.2.2無菌濾膜取樣法：將濾膜（φ0.22μm）以無菌方式放入高壓過的取樣器中，打開壓縮空氣閥門，控制氣體流速穩(wěn)定后，接上膠管取樣，2min后在超凈工作臺(tái)內(nèi)取下濾膜，置瓊脂培養(yǎng)基平板上恒溫培養(yǎng)，48h進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)即為2min壓縮氣體含菌量，同時(shí)需做空白對(duì)照。

1.2.3營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基取樣法：廣口瓶（500mL）內(nèi)裝營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（300mL），瓶口橡皮塞上需連接兩根耐高溫的橡膠管，一根膠管上端作為氣體入口下端連接一根玻璃管并深入液面下，另一根膠管作為排氣口，將以上裝置高壓滅菌后進(jìn)行取樣，2min后結(jié)束取樣夾緊進(jìn)氣口，置培養(yǎng)箱內(nèi)通過觀察培養(yǎng)基變混濁的時(shí)間來判定壓縮空氣的污染程度。

1.2.4水吸收取樣法即為改良的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基取樣法：取樣裝置同1.2.3，將營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基換成生理鹽水（0.85%），壓縮空氣進(jìn)入取樣瓶內(nèi)，氣體中的微生物在氣流的動(dòng)力下，被洗滌于生理鹽水中，2min后結(jié)束取樣，用止血鉗夾緊進(jìn)氣口，在超凈工作臺(tái)內(nèi)將采樣水通過濾膜（φ0.22μm），將濾膜進(jìn)行培養(yǎng)、計(jì)數(shù)，方法同1.2.2。

1.2.5隔離取樣法：用無紡布自制梯形的布袋，將窄的一端捆綁固定在取樣口，寬的一端用于取樣和操作，這樣起到與外界環(huán)境隔離的作用；將取樣口滅菌后，用滅菌后的取樣布袋窄的一端套住取樣口并捆綁固定；控制氣體流速穩(wěn)定后，一只手在布袋外打開里面的平板蓋，另一只手在布袋內(nèi)旋轉(zhuǎn)平板，2min后結(jié)束取樣，置培養(yǎng)箱內(nèi)48h后，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)即為2min壓縮氣體含菌量，每個(gè)取樣點(diǎn)測(cè)試2次，同時(shí)需做空白對(duì)照。

2　結(jié)果與分析

通過以上5種取樣方法，菌數(shù)檢測(cè)結(jié)果匯總分析詳見下表：

3　討論與結(jié)論

3.1瓊脂平板取樣法

檢測(cè)操作方便、簡單易行，結(jié)果細(xì)菌總數(shù)最多；檢測(cè)結(jié)果容易受到外部各種環(huán)境的干擾除環(huán)境空氣無菌外會(huì)造成各項(xiàng)微生物指標(biāo)大大偏離實(shí)際，不建議使用此方法。

3.2無菌濾膜取樣法

檢測(cè)細(xì)菌總數(shù)最少；取樣過程中，雖然不受環(huán)境空氣影響，但與采樣時(shí)間長短和采樣裝置設(shè)計(jì)與檢測(cè)結(jié)果有一定的相關(guān)性，容易出現(xiàn)采集到的微生物因培養(yǎng)的不及時(shí)性而死亡，或者隨氣體的排出而帶走，以上兩種情況均會(huì)出現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果比實(shí)際低，同樣不建議獸藥生產(chǎn)企業(yè)采用此方法。

3.3營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基取樣法

不能定量計(jì)數(shù)，只要壓縮氣體流速一定，采樣時(shí)間一定，也能快速的判斷壓縮氣體是否污染及污染程度；建議沒有真空抽濾設(shè)備的廠家可采用也可以指導(dǎo)生產(chǎn)。

3.4水吸收取樣法

檢測(cè)可以定量的檢測(cè)細(xì)菌總數(shù)但相對(duì)量少；檢測(cè)結(jié)果與氣流速度、穩(wěn)定性相關(guān)，同時(shí)與微生物滯留在采集用生理鹽水中數(shù)量有關(guān)，從而會(huì)出現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果偏低現(xiàn)象，如果將以上影響因素通過一系列實(shí)驗(yàn)設(shè)定最有效值，是可以用于指導(dǎo)生產(chǎn)的，但是前期準(zhǔn)備工作繁多，需要大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)摸索最佳的壓縮氣體流速，后期還需要對(duì)濾膜培養(yǎng)，長期使用比較浪費(fèi)。

3.5隔離取樣法

檢測(cè)細(xì)菌總數(shù)相對(duì)準(zhǔn)確；檢測(cè)過程中使用自制的梯形布袋暫時(shí)與外界環(huán)境隔離，能夠簡單便捷的使壓縮氣體中微生物直接沉降在平板上，免受外部環(huán)境的干擾，能定量的判定細(xì)菌總數(shù)。同其它4種取樣方法相比，節(jié)省前期的培養(yǎng)基準(zhǔn)備、生理鹽水的配制和高壓滅菌的過程，同時(shí)也節(jié)省了生理鹽水配制和高壓滅菌過程，同時(shí)也節(jié)省了濾膜的費(fèi)用，可以準(zhǔn)確的對(duì)壓縮氣體進(jìn)行定量檢測(cè)，是一種較理想的壓縮氣體檢測(cè)方法。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．12.016

王海云（1977～），山東省人，本科，助理獸醫(yī)師。研究方向：生物技術(shù)