陳健

（重慶市涪陵食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 408000）

高效液相色譜法測(cè)定金錢草片中槲皮素和山柰素含量

陳健

（重慶市涪陵食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 408000）

目的 建立測(cè)定金錢草片中槲皮素和山柰素含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 色譜柱為Agilent C18柱（250 mm×4．6 mm，5 m），流動(dòng)相為甲醇－0．4%磷酸溶液（50∶50），流速為 1．0 m L／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為360 nm，柱溫為30℃。結(jié)果 槲皮素質(zhì)量濃度在1．034～20．68 g／m L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r＝0．999 3），加樣回收率為97．53%，RSD為0．89%（n＝6）；山柰素質(zhì)量濃度在2．061～41．22 g／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r＝0．999 1），加樣回收率為98．11%，RSD為0．76%（n＝6）。結(jié)論該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于金錢草片中槲皮素和山柰素的含量測(cè)定。

高效液相色譜法；槲皮素；山柰素；金錢草片

金錢草片具有清利濕熱、通淋、消腫的功效。方中金錢草的有效成分為槲皮素和山柰素等，原標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)金錢草的含量測(cè)定項(xiàng)[1]。為此，筆者參考文獻(xiàn)[2－4]，采用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)金錢草片中槲皮素和山柰素的含量進(jìn)行測(cè)定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

安捷倫 1260型高效液相色譜儀（安捷倫公司）；Sartorius－ME215S型電子天平。

1．2 試藥

金錢草片（江西博士達(dá)藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)分別為 20140301，20140702，20140901）；槲皮素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為100081－200406，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為96．5%）；山柰素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110861－200808，質(zhì)量分?jǐn)?shù)93．2%）；甲醇為色譜純（經(jīng)0．45μm濾膜過(guò)濾），水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：Agilent C18柱（250mm×4．6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇－0．4%磷酸溶液（50∶50）；流速：1．0mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。

2．2 溶液制備

對(duì)照品溶液：稱取槲皮素對(duì)照品10．72mg、山柰素對(duì)照品22．12 mg，精密稱定，置100 m L容量瓶中，加80%甲醇使溶解，并定容至刻度，作為母液對(duì)照品溶液；再精密量取1m L母液對(duì)照品溶液置10 m L容量瓶中，加80%甲醇使溶解，并定容至刻度，即得對(duì)照品溶液。

供試品溶液：稱取樣品約0．3 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)；精密量取續(xù)濾液25mL，精密加入鹽酸5m L，置90℃水浴中加熱水解1 h，取出，迅速冷卻，移至50 m L容量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

陰性對(duì)照品溶液：按金錢草片制備工藝制備缺金錢草的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：按擬訂色譜條件，取2．2項(xiàng)下3種溶液，依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相同時(shí)間處有一致的色譜峰，而陰性對(duì)照品溶液則無(wú)此色譜峰，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：取2.2項(xiàng)下母液對(duì)照品，分別精密量取1，5，10，15，20mL，加80%甲醇分別定容于100mL容量瓶中，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：槲皮素 Y＝48.524X+8.023 4，r＝0.999 3 (n＝5)，質(zhì)量濃度在1.034～20.68μg／m L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好；山柰素 Y＝51.420X－19.361，r＝0.999 1(n＝5)，質(zhì)量濃度在 2.061～41.22μg／m L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液，進(jìn)樣10μL，連續(xù)測(cè)定6次。結(jié)果槲皮素、山柰素峰面積的 RSD分別為0.54%和0.45%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取批號(hào)為20140301的樣品，依法制備供試品溶液6份，分別進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果槲皮素、山柰素含量的 RSD分別為0.85%和0.72%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h時(shí)進(jìn)樣10μL，記錄峰面積，考察其穩(wěn)定性。結(jié)果槲皮素、山柰素峰面積的 RSD分別為 0.88%和0.82% （n＝6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取批號(hào)為20140301的樣品6份，精密加入槲皮素對(duì)照品（質(zhì)量濃度為0.103 4 g／L）和山柰素對(duì)照品（質(zhì)量濃度為0.206 1 g／L）適量，按擬訂方法制備供試品溶液，并依法進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2．4 樣品含量測(cè)定

按擬訂含量測(cè)定方法測(cè)定3批樣品，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為20140301，20140702，20140901的金錢草片中槲皮素和山柰素的含量分別為1.472mg／g和1.604 mg／g，1.408 mg／g和 1.687 mg／g，1.526 mg／g和1.754mg／g。

3 討論

取槲皮素和山柰素對(duì)照品溶液，在250～450 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果槲皮素和山柰素對(duì)照品均在360 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，參照2010年版《中國(guó)藥典（一部）》金錢草項(xiàng)下的檢測(cè)波長(zhǎng)，將此次試驗(yàn)的檢測(cè)波長(zhǎng)定為360 nm。

試驗(yàn)中考察了水解時(shí)間，于0.5，1.0，2.0，5.0 h水解后測(cè)定槲皮素和山柰素的含量，在水解1.0 h后含量無(wú)明顯增加，故采用水解1.0 h。

[1]WS3－B－1560－93，中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第八冊(cè))[S]．

[2]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：248．

[3]譚忠謀，韋建喬，蒙露露．高效液相色譜法測(cè)定金錢草顆粒中槲皮素含量[J]．中國(guó)藥業(yè)，2012，21（9）：24－25．

[4]梁國(guó)華，梁曉琪．HPLC測(cè)定復(fù)方肝炎顆粒中槲皮素和山奈素的含量[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（24）：90－92．

Content Determ ination of Quercetin and Kaem p feride in Lysim achia Christinae Tab lets by HPLC

Chen Jian
（Fuling Institute for Food and Drug Control，Chongqing，China 408000）

Objective To establish an HPLC method for the content determination of the quercetin and kaempferide in Lysimachia christinae Tablets．M ethods The Agilent C18column（250 mm×4．6 mm，5μm）was used with methanol－0．4% phosphoric acid solution（50∶50）as the mobile phase，the detection wavelength was 360 nm，the flow rate was 1．0 mL／min，the column temperature was 30℃．Results The sample side of quercetin in the range of 1．034－20．68μg／m L showed the good linear relation with the peak area（r＝0．999 3），The average recovery rate was 97．53%，RSD was 0．89%（n＝6）；The sample side of kaempferide in the range of 2．061－41．22μg／mL showed the good linear relation with the peak area（r＝0．999 1），The average recovery rate was 98．11%，RSD was 0．76%（n＝6）．Conclusion The method is simple，accurately and reproducible，it can be used to determine the quercetin and kaempferide in Lysimachia Christinae Tablets．

HPLC；quercetin；Kaempferide；Lysimachia Christinae Tablets

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)06－0062－02

2015－07－28)