么世英

（內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020）

高效液相色譜法測(cè)定蒙藥薩布如木病顆粒中苦參堿含量

么世英

（內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020）

目的 建立測(cè)定蒙藥薩布如木病顆粒中苦參堿含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 色譜柱為WatersXbridge C18柱（75mm×4．6mm，2．5 m），柱溫為 30℃，流動(dòng)相為乙腈 －0．1%磷酸溶液－甲醇（76∶19∶5，三乙胺調(diào)節(jié) pH至8．0），流速為1．0 mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm。結(jié)果 苦參堿進(jìn)樣量在0．202～4．040 g范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均加樣回收率97．64%，RSD＝1．69%(n＝6)。結(jié)論 該方法準(zhǔn)確可靠，可用于蒙藥薩布如木病顆粒中苦參堿的含量測(cè)定。

高效液相色譜法；薩布如木病顆粒；含量測(cè)定

薩布如木病顆粒為蒙藥復(fù)方制劑，方中苦參為君藥。為此，以苦參堿作為指標(biāo)成分進(jìn)行含量測(cè)定方法研究，經(jīng)分析驗(yàn)證，所建立的高效液相色譜（HPLC）法重復(fù)性好，專屬性強(qiáng)，其他成分對(duì)苦參的測(cè)定無(wú)干擾，可用于該制劑中苦參堿的質(zhì)量控制?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津2010AHT(日本島津公司)、LabSolutions色譜工作站?？鄥A對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110805－200508，供含量測(cè)定用）；薩布如木病顆粒（內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)院提供，批號(hào)分別為 20150106，20141030，20140816)；乙腈、甲醇為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：Waters Xbridge C18柱（75 mm×4.6 mm，2.5μm）；流動(dòng)相：乙腈－0.1%磷酸溶液－甲醇（76∶19∶5，三乙胺調(diào)節(jié)pH至8.0）[1－3]；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm；進(jìn)樣量：10μL。

2．2 溶液制備

稱取經(jīng)五氧化二磷干燥過(guò)的苦參堿對(duì)照品5.050mg，精密稱定，置25m L容量瓶中，加流動(dòng)相使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；稱取本品約1 g，精密稱定，加5mL氨水、10m L水溶解后，用三氯甲烷（30，30，20，10mL）提取[4－5]，合并提取液，蒸干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相溶解并轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，搖勻，作為供試品溶液。按處方比例以相同工藝制備缺苦參堿的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：取按2.2項(xiàng)下方法制備的供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，陰性對(duì)照品溶液色譜圖中，在與苦參堿對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)保留時(shí)間處未出現(xiàn)色譜峰，表明處方中其他組分對(duì)苦參堿的測(cè)定無(wú)干擾。主峰分離度 R＞1.5，理論板數(shù)大于4 000，色譜圖見(jiàn)圖1。

線性關(guān)系考察：取按2.2項(xiàng)下方法制備的對(duì)照品溶液（含苦參堿0.202 g／L）適量，分別進(jìn)樣1，2，5，10，15，20μL，依法測(cè)定，以峰面積（Y）對(duì)進(jìn)樣量（X）進(jìn)行回歸分析，得回歸方程 Y＝980 728X+11 958.0，r＝0.999 9 (n＝6)。結(jié)果表明，苦參堿進(jìn)樣量在0.202～4.040μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下方法制備的同一對(duì)照品溶液10μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，依法測(cè)定。結(jié)果的 RSD為0.6%（n＝6），表明儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為20150106）樣品，按擬訂方法測(cè)定含量。結(jié)果的 RSD為1．5%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，19，24 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為 0．5%（n＝6），表明供試品溶液在室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的對(duì)照品溶液，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法進(jìn)樣測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 苦參堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2．4 樣品含量測(cè)定

取 3批樣品（批號(hào)分別為 20150106，20141030，20140816），按擬訂方法測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果3批樣品測(cè)定苦參堿平均含量為2．16mg／g，見(jiàn)表2。

3 討論

提取時(shí)氨水加入量[6－7]：在樣品提取時(shí)，分別嘗試加入氨水1，5，10m L進(jìn)行提取。結(jié)果加氨水5m L時(shí)，乳化現(xiàn)象最輕微，分層效果好，提取最完全，回收率達(dá)97%，故提取時(shí)加入氨水的量定為5mL。

表2 樣品中苦參堿含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

提取次數(shù)選擇：分別對(duì)提取3次（30，30，20 m L），4次（30，30，20，10m L），5次（30，30，20，10，10mL）后的溶液進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，4次就已提取完全，故提取次數(shù)定為4次。

流動(dòng)相選擇[8－10]：對(duì)乙腈－0．1%磷酸溶液 －甲醇（76∶19∶5，三乙胺調(diào)節(jié)pH為8．0）和乙腈－水－乙二胺（45∶55∶0．05）2種流動(dòng)相進(jìn)行了對(duì)比，結(jié)果前者的主峰理論板數(shù)高，與各雜質(zhì)峰的分離效果更好，故選擇前者為流動(dòng)相。

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R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)06－0057－02

么世英（1971－），女，主管藥師，主要從事藥品檢驗(yàn)工作，（電子信箱）hhhtzyq＠sina．com。

2015－05－13；

2015－09－01)