劉壬通,陳惠文,潘雪刁,楊智承
(1.廣東省惠東縣婦幼保健院,廣東 惠州 516300; 2.廣東藥學(xué)院,廣東 廣州 510006)
硝苯地平緩釋片含量測(cè)定及體外釋藥機(jī)理研究
劉壬通1,陳惠文1,潘雪刁2,楊智承2
(1.廣東省惠東縣婦幼保健院,廣東 惠州 516300; 2.廣東藥學(xué)院,廣東 廣州 510006)
目的 建立測(cè)定硝苯地平緩釋片中硝苯地平含量的高效液相色譜(HPLC)法。方法 色譜柱為Diamonsil C18柱(250 mm×4.6mm,5 m),流動(dòng)相為甲醇-水(60∶40),檢測(cè)波長(zhǎng)為237 nm,流速為 1 m L/min,柱溫為 30℃。結(jié)果 硝苯地平對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度在4.83~43.55 g/m L(r=0.999 9)范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系,精密度、重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果的 RSD分別為0.91%和1.46%(n=6),平均回收率為99.94%,RSD為0.74%(n=9)。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏、重復(fù)性好,可用于硝苯地平緩釋片的質(zhì)量控制。
硝苯地平;緩釋片;高效液相色譜法;含量測(cè)定;釋放度
硝苯地平是第1代鈣拮抗劑,是目前公認(rèn)的安全有效的一線降壓藥物[1]。但治療高血壓的藥物必須作用持久、效果穩(wěn)定,而硝苯地平的持續(xù)作用時(shí)間較短,半衰期為4~5 h,一般常用量為每日2~3次[2-3],且血藥濃度波動(dòng)大,會(huì)產(chǎn)生峰谷現(xiàn)象,引起較多不良反應(yīng)。為減少用藥次數(shù),使用藥更安全,可通過(guò)改變工藝,采用親水凝膠骨架材料,根據(jù)水分透過(guò)骨架微孔進(jìn)而緩慢釋放藥物的原理[4],研制出硝苯地平緩釋劑型,使藥物平緩釋放,達(dá)到理想效果。但2010年版《中國(guó)藥典(二部)》并未對(duì)該緩釋劑型含量的檢測(cè)進(jìn)行規(guī)定。為更好地控制和評(píng)價(jià)該劑型的質(zhì)量,本研究中采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定硝苯地平緩釋片中硝苯地平的含量,并考察其體外釋放行為,方法準(zhǔn)確、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便,現(xiàn)報(bào)道如下。
儀器:Agilent1100 Series型高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司);UV-2450型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津公司);80-2型離心沉淀機(jī)(上海手術(shù)器械廠);AB265-S型分析天平(梅特勒托利多公司)。
試藥:硝苯地平對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)為100338-200502);硝苯地平緩釋片(廣東環(huán)球制藥有限公司,批號(hào)為 111003-2,120815-2,121010-1,規(guī)格為每片5mg);甲醇(廣州化學(xué)試劑廠,色譜純),水為超純水(美國(guó)Milipore公司),其余試劑均為分析純。
2.1 含量測(cè)定
2.1.1 色譜條件[5]
色譜柱:Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流動(dòng)相:甲醇-水(60∶40);檢測(cè)波長(zhǎng):237 nm;流速:1m L/min;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:20μL。
2.1.2 溶液制備
對(duì)照品溶液:避光操作。精密稱取硝苯地平對(duì)照品適量,置50m L棕色容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度制成每1mL含20μg的溶液,搖勻,即得。
供試品溶液:避光操作,取本品20片,精密稱定,研細(xì),精密稱取適量(約相當(dāng)于硝苯地平10mg),置50mL容量瓶中,加甲醇適量,超聲處理使硝苯地平溶解,放冷,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),精密量取續(xù)濾液5m L,置50m L容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。
陰性對(duì)照品溶液:按硝苯地平緩釋片處方取處方中除硝苯地平外的其他輔料,按制備工藝制成陰性供試品,并依法制得。
2.1.3 方法學(xué)考察
檢測(cè)波長(zhǎng)選擇:精密稱取硝苯地平對(duì)照品適量,加適量甲醇溶解配制成20μg/mL的溶液,在210~400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描,紫外掃描圖譜見(jiàn)圖1。結(jié)果在237 nm和233 nm波長(zhǎng)處均有吸收峰,為提高檢測(cè)靈敏度,最終選擇 237 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。
圖1 硝苯地平紫外吸收光譜圖
專(zhuān)屬性試驗(yàn):分別取2.1.2項(xiàng)下硝苯地平對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液適量,按擬訂色譜條件進(jìn)樣20μL,記錄色譜圖,見(jiàn)圖2。結(jié)果,在供試品溶液相同色譜峰處,陰性對(duì)照品溶液無(wú)吸收峰,表明硝苯地平對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)干擾,方法專(zhuān)屬性強(qiáng)。
圖2 高效液相色譜圖
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:避光操作。精密稱取硝苯地平對(duì)照品7mg,置25mL棕色容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,分別精密量取0.4,0.9,1.8,2.7,3.6mL置25m L棕色容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,配制成每1mL含硝苯地平4.83,10.89,21.77,32.66,43.55μg的系列溶液。精密量取上述系列溶液各20μL注入高效液相色譜儀,按擬訂色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定,記錄色譜圖。以硝苯地平質(zhì)量濃度(C,μg/mL)為橫坐標(biāo)、峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程 A=57.522C+22.987,r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明,硝苯地平對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度在4.83~43.55μg/m L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。
精密度試驗(yàn):精密吸取同一對(duì)照品溶液20μL,重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為0.91%(n=6),表明儀器精密度良好。
穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液,分別于0,1,2,6,12,24 h時(shí)進(jìn)樣 20μL,測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為1.02%(n=6),表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。
重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品,按2.1.2項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6份,分別進(jìn)樣20μL。結(jié)果的 RSD為1.46%(n=6),表明方法重復(fù)性良好。
回收率試驗(yàn):稱取已知硝苯地平含量的供試品適量(約相當(dāng)于硝苯地平7mg)9份,精密稱定,置25m L棕色容量瓶中,分別加入硝苯地平對(duì)照品的量為80%,100%,120%各3份,加甲醇適量,超聲處理使溶解,放冷,用甲醇稀釋至刻度,精密吸取2mL置25mL棕色容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò)。按擬訂色譜條件,進(jìn)樣20μL測(cè)定,計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 硝苯地平回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)
2.1.4 樣品含量測(cè)定
分別取3批硝苯地平緩釋片,按2.1.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算樣品含量。結(jié)果批號(hào)為111003-2,120815-2,121010-1的樣品中硝苯地平平均含量分別為101.91%,100.26%,100.06%(n=3)。
2.2 體外釋藥機(jī)理研究
取本品,照2010年版《中國(guó)藥典(二部)》附錄ⅩD第二法的釋放度測(cè)定法,采用第二法裝置,以水(含1%的十二烷基硫酸鈉)為釋放介質(zhì),體積為900mL,轉(zhuǎn)速為100 r/min,依法操作,分別于4,8,12,16,24 h時(shí)各取溶液5mL,并及時(shí)補(bǔ)充相同溫度、相同體積的水,用0.45μm的濾膜濾過(guò),取續(xù)濾液作為供試品溶液,按擬訂色譜條件進(jìn)樣檢測(cè),計(jì)算不同時(shí)間的累積釋放率。結(jié)果見(jiàn)圖3。
圖3 硝苯地平緩釋片釋放曲線(n=6)
為更直觀地描述硝苯地平緩釋片的體外釋藥機(jī)理,根據(jù)上述釋放度測(cè)定結(jié)果,分別用不同釋放模型(零級(jí)方程、一級(jí)方程、Higuchi方程、Ritger-Peppas方程、Weibull方程)進(jìn)行線性擬合。結(jié)果見(jiàn)表2。可見(jiàn),硝苯地平緩釋片的體外釋藥符合Weibull釋放模型,呈兩相釋藥,前期快速釋藥,后期緩慢釋藥。
硝苯地平遇光不穩(wěn)定,易分解成硝基苯吡啶衍生物和亞硝基吡啶衍生物,為避免影響測(cè)定結(jié)果,在整個(gè)操作過(guò)程中需注意避光。
本方法采用甲醇-水(60∶40)為流動(dòng)相,有效地使硝苯地平與上述2種分解產(chǎn)物得到分離,保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。另外,本試驗(yàn)中曾試用不同的柱溫進(jìn)行測(cè)定,主峰保留時(shí)間和與分解產(chǎn)物的分離度基本無(wú)變化,但柱壓變動(dòng)較大,最后發(fā)現(xiàn)柱溫為30℃時(shí)最佳。試驗(yàn)結(jié)果顯示,用HPLC法檢測(cè)硝苯地平緩釋片中硝苯地平的含量,方法回收率高、精密度好、簡(jiǎn)便、穩(wěn)定可靠,可有效控制本品的質(zhì)量,為該劑型確立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了可靠依據(jù)。
本研究的另一目的在于探索硝苯地平緩釋片的體外釋藥規(guī)律,為其體內(nèi)釋藥行為提供一定的理論依據(jù)。由表2可見(jiàn),Weibull分布擬合的相關(guān)系數(shù)最大,說(shuō)明該方程能很好地描述硝苯地平緩釋片的體外釋藥特征。另外,Ritger-Peppas方程擬合的相關(guān)系數(shù)也較大,Ritger-Peppas方程變換前的形式為 Q=ktn,其中 n為釋放參數(shù),是該方程中表征釋放機(jī)制的特征參數(shù)。當(dāng)n<0.45時(shí),藥物釋放機(jī)制為Fick′s擴(kuò)散;當(dāng) n>0.89時(shí)為骨架溶蝕;當(dāng)0.45<n<0.89時(shí),則為擴(kuò)散和溶蝕的協(xié)同作用。比較上述擬合結(jié)果可知,溶出參數(shù) n=1.199 5,表明主藥以骨架溶蝕方式釋藥。
表2 不同釋藥模型的擬合方程和相關(guān)度
[1]陳光亮,王濱燕,戴小華,等.控釋硝苯地平對(duì)不同證型高血壓病的降壓療效的研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2012,23(2):421-423.
[2]段官平,李 霞,楊成之.硝苯地平對(duì)人體平滑肌的作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生,2010,48(1):12-13.
[3]凌 俐,王 東.緩釋與控釋硝苯地平對(duì)高血壓患者的降壓作用比較[J].中國(guó)藥房,2012,23(12):1 116-1 117.
[4]唐東霞,陳洪軒,和 平.硝苯地平緩釋片的研究[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2007,1(4):21-22.
[5]王志強(qiáng),吳繼禹,夏錦泉.RP-HPLC法測(cè)定硝苯地平緩釋片中硝苯地平的含量及分解產(chǎn)物[J].安徽醫(yī)藥,2007,11(2):132-133.
Content Determ ination and Release M echanism of Nifedipine Sustained Release Tab lets
Liu Rentong1,Chen Huiwen1,Pan Xuediao2,Yang Zhicheng2
(1.Huidong Women and Children Hospital,Huizhouo,Guangdong,China 516300; 2.Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou,Guangdong,China 510006)
Objective To establish a method for the content determination of nifedipine in Nifedipine Sustained Release Tablets by HPLC.M ethods The chromatographic separation condition of determination was as follows:Diamonsil C18column(250 mm×4.6 mm,5μm).The mobile phase consisted of methanol-water(60∶40)with the flow rate of 1.0 mL/min.The wave length of detection was 237 nm and the column temperature was maintained at 30℃.Resu lts The standard curve of nifedipine was linear within range of 4.83-43.55μg/mL(r=0.999 9).RSD of precision and reproducibility were 0.91% and 1.46%(n=6),respectively.Average of recovery was 99.94% with RSD of 0.74%(n=9).Conclusion The determination method of content by HPLC is simple,quick,sensitive,fine reproducibility,which could be used to control the quality of nifedipine sustained release tablets.
nifedipine;Sustained Release Tablets;HPLC;content determination;dissolution
R969.1;R972+.4
A
1006-4931(2016)06-0055-04
2015-08-13)