劉壬通，陳惠文，潘雪刁，楊智承

（1．廣東省惠東縣婦幼保健院，廣東 惠州 516300； 2．廣東藥學(xué)院，廣東 廣州 510006）

硝苯地平緩釋片含量測(cè)定及體外釋藥機(jī)理研究

劉壬通1，陳惠文1，潘雪刁2，楊智承2

（1．廣東省惠東縣婦幼保健院，廣東 惠州 516300； 2．廣東藥學(xué)院，廣東 廣州 510006）

目的 建立測(cè)定硝苯地平緩釋片中硝苯地平含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 色譜柱為Diamonsil C18柱（250 mm×4．6mm，5 m），流動(dòng)相為甲醇－水（60∶40），檢測(cè)波長(zhǎng)為237 nm，流速為 1 m L／min，柱溫為 30℃。結(jié)果 硝苯地平對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度在4．83～43．55 g／m L（r＝0．999 9）范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，精密度、重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果的 RSD分別為0．91%和1．46%(n＝6)，平均回收率為99．94%，RSD為0．74%(n＝9)。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏、重復(fù)性好，可用于硝苯地平緩釋片的質(zhì)量控制。

硝苯地平；緩釋片；高效液相色譜法；含量測(cè)定；釋放度

硝苯地平是第1代鈣拮抗劑，是目前公認(rèn)的安全有效的一線降壓藥物[1]。但治療高血壓的藥物必須作用持久、效果穩(wěn)定，而硝苯地平的持續(xù)作用時(shí)間較短，半衰期為4～5 h，一般常用量為每日2～3次[2－3]，且血藥濃度波動(dòng)大，會(huì)產(chǎn)生峰谷現(xiàn)象，引起較多不良反應(yīng)。為減少用藥次數(shù)，使用藥更安全，可通過(guò)改變工藝，采用親水凝膠骨架材料，根據(jù)水分透過(guò)骨架微孔進(jìn)而緩慢釋放藥物的原理[4]，研制出硝苯地平緩釋劑型，使藥物平緩釋放，達(dá)到理想效果。但2010年版《中國(guó)藥典（二部）》并未對(duì)該緩釋劑型含量的檢測(cè)進(jìn)行規(guī)定。為更好地控制和評(píng)價(jià)該劑型的質(zhì)量，本研究中采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定硝苯地平緩釋片中硝苯地平的含量，并考察其體外釋放行為，方法準(zhǔn)確、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

儀器：Agilent1100 Series型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）；UV－2450型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司）；80－2型離心沉淀機(jī)（上海手術(shù)器械廠）；AB265－S型分析天平（梅特勒托利多公司）。

試藥：硝苯地平對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100338－200502）；硝苯地平緩釋片（廣東環(huán)球制藥有限公司，批號(hào)為 111003－2，120815－2，121010－1，規(guī)格為每片5mg）；甲醇（廣州化學(xué)試劑廠，色譜純），水為超純水（美國(guó)Milipore公司），其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 含量測(cè)定

2．1．1 色譜條件[5]

色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇－水（60∶40）；檢測(cè)波長(zhǎng)：237 nm；流速：1m L／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL。

2．1．2 溶液制備

對(duì)照品溶液：避光操作。精密稱(chēng)取硝苯地平對(duì)照品適量，置50m L棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度制成每1mL含20μg的溶液，搖勻，即得。

供試品溶液：避光操作，取本品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于硝苯地平10mg），置50mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使硝苯地平溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5m L，置50m L容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

陰性對(duì)照品溶液：按硝苯地平緩釋片處方取處方中除硝苯地平外的其他輔料，按制備工藝制成陰性供試品，并依法制得。

2．1．3 方法學(xué)考察

檢測(cè)波長(zhǎng)選擇：精密稱(chēng)取硝苯地平對(duì)照品適量，加適量甲醇溶解配制成20μg／mL的溶液，在210～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，紫外掃描圖譜見(jiàn)圖1。結(jié)果在237 nm和233 nm波長(zhǎng)處均有吸收峰，為提高檢測(cè)靈敏度，最終選擇 237 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 硝苯地平紫外吸收光譜圖

專(zhuān)屬性試驗(yàn)：分別取2.1.2項(xiàng)下硝苯地平對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液適量，按擬訂色譜條件進(jìn)樣20μL，記錄色譜圖，見(jiàn)圖2。結(jié)果，在供試品溶液相同色譜峰處，陰性對(duì)照品溶液無(wú)吸收峰，表明硝苯地平對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)干擾，方法專(zhuān)屬性強(qiáng)。

圖2 高效液相色譜圖

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：避光操作。精密稱(chēng)取硝苯地平對(duì)照品7mg，置25mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取0.4，0.9，1.8，2.7，3.6mL置25m L棕色容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配制成每1mL含硝苯地平4.83，10.89，21.77，32.66，43.55μg的系列溶液。精密量取上述系列溶液各20μL注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以硝苯地平質(zhì)量濃度（C，μg／mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A＝57.522C+22.987，r＝0.999 9(n＝5）。結(jié)果表明，硝苯地平對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度在4．83～43．55μg／m L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液20μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為0．91%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于0，1，2，6，12，24 h時(shí)進(jìn)樣 20μL，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為1．02%(n＝6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品，按2．1．2項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6份，分別進(jìn)樣20μL。結(jié)果的 RSD為1．46%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

回收率試驗(yàn)：稱(chēng)取已知硝苯地平含量的供試品適量（約相當(dāng)于硝苯地平7mg）9份，精密稱(chēng)定，置25m L棕色容量瓶中，分別加入硝苯地平對(duì)照品的量為80%，100%，120%各3份，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，精密吸取2mL置25mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)。按擬訂色譜條件，進(jìn)樣20μL測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 硝苯地平回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2．1．4 樣品含量測(cè)定

分別取3批硝苯地平緩釋片，按2．1．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算樣品含量。結(jié)果批號(hào)為111003－2，120815－2，121010－1的樣品中硝苯地平平均含量分別為101．91%，100．26%，100．06%（n＝3）。

2．2 體外釋藥機(jī)理研究

取本品，照2010年版《中國(guó)藥典（二部）》附錄ⅩD第二法的釋放度測(cè)定法，采用第二法裝置，以水（含1%的十二烷基硫酸鈉）為釋放介質(zhì)，體積為900mL，轉(zhuǎn)速為100 r／min，依法操作，分別于4，8，12，16，24 h時(shí)各取溶液5mL，并及時(shí)補(bǔ)充相同溫度、相同體積的水，用0．45μm的濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算不同時(shí)間的累積釋放率。結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 硝苯地平緩釋片釋放曲線（n＝6）

為更直觀地描述硝苯地平緩釋片的體外釋藥機(jī)理，根據(jù)上述釋放度測(cè)定結(jié)果，分別用不同釋放模型（零級(jí)方程、一級(jí)方程、Higuchi方程、Ritger－Peppas方程、Weibull方程）進(jìn)行線性擬合。結(jié)果見(jiàn)表2?？梢?jiàn)，硝苯地平緩釋片的體外釋藥符合Weibull釋放模型，呈兩相釋藥，前期快速釋藥，后期緩慢釋藥。

3 討論

硝苯地平遇光不穩(wěn)定，易分解成硝基苯吡啶衍生物和亞硝基吡啶衍生物，為避免影響測(cè)定結(jié)果，在整個(gè)操作過(guò)程中需注意避光。

本方法采用甲醇－水（60∶40）為流動(dòng)相，有效地使硝苯地平與上述2種分解產(chǎn)物得到分離，保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。另外，本試驗(yàn)中曾試用不同的柱溫進(jìn)行測(cè)定，主峰保留時(shí)間和與分解產(chǎn)物的分離度基本無(wú)變化，但柱壓變動(dòng)較大，最后發(fā)現(xiàn)柱溫為30℃時(shí)最佳。試驗(yàn)結(jié)果顯示，用HPLC法檢測(cè)硝苯地平緩釋片中硝苯地平的含量，方法回收率高、精密度好、簡(jiǎn)便、穩(wěn)定可靠，可有效控制本品的質(zhì)量，為該劑型確立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了可靠依據(jù)。

本研究的另一目的在于探索硝苯地平緩釋片的體外釋藥規(guī)律，為其體內(nèi)釋藥行為提供一定的理論依據(jù)。由表2可見(jiàn)，Weibull分布擬合的相關(guān)系數(shù)最大，說(shuō)明該方程能很好地描述硝苯地平緩釋片的體外釋藥特征。另外，Ritger－Peppas方程擬合的相關(guān)系數(shù)也較大，Ritger－Peppas方程變換前的形式為 Q＝ktn，其中 n為釋放參數(shù)，是該方程中表征釋放機(jī)制的特征參數(shù)。當(dāng)n＜0.45時(shí)，藥物釋放機(jī)制為Fick′s擴(kuò)散；當(dāng) n＞0.89時(shí)為骨架溶蝕；當(dāng)0.45＜n＜0.89時(shí)，則為擴(kuò)散和溶蝕的協(xié)同作用。比較上述擬合結(jié)果可知，溶出參數(shù) n＝1.199 5，表明主藥以骨架溶蝕方式釋藥。

表2 不同釋藥模型的擬合方程和相關(guān)度

[1]陳光亮，王濱燕，戴小華，等．控釋硝苯地平對(duì)不同證型高血壓病的降壓療效的研究[J]．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23（2）：421－423．

[2]段官平，李 霞，楊成之．硝苯地平對(duì)人體平滑肌的作用研究進(jìn)展[J]．中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2010，48（1）：12－13．

[3]凌 俐，王 東．緩釋與控釋硝苯地平對(duì)高血壓患者的降壓作用比較[J]．中國(guó)藥房，2012，23（12）：1 116－1 117．

[4]唐東霞，陳洪軒，和 平．硝苯地平緩釋片的研究[J]．中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2007，1（4）：21－22．

[5]王志強(qiáng)，吳繼禹，夏錦泉．RP－HPLC法測(cè)定硝苯地平緩釋片中硝苯地平的含量及分解產(chǎn)物[J]．安徽醫(yī)藥，2007，11（2）：132－133．

Content Determ ination and Release M echanism of Nifedipine Sustained Release Tab lets

Liu Rentong1，Chen Huiwen1，Pan Xuediao2，Yang Zhicheng2
（1．Huidong Women and Children Hospital，Huizhouo，Guangdong，China 516300； 2．Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou，Guangdong，China 510006）

Objective To establish a method for the content determination of nifedipine in Nifedipine Sustained Release Tablets by HPLC．M ethods The chromatographic separation condition of determination was as follows：Diamonsil C18column（250 mm×4．6 mm，5μm）．The mobile phase consisted of methanol－water（60∶40）with the flow rate of 1．0 mL／min．The wave length of detection was 237 nm and the column temperature was maintained at 30℃．Resu lts The standard curve of nifedipine was linear within range of 4．83－43．55μg／mL（r＝0．999 9）．RSD of precision and reproducibility were 0．91% and 1．46%(n＝6)，respectively．Average of recovery was 99．94% with RSD of 0．74%（n＝9）．Conclusion The determination method of content by HPLC is simple，quick，sensitive，fine reproducibility，which could be used to control the quality of nifedipine sustained release tablets．

nifedipine；Sustained Release Tablets；HPLC；content determination；dissolution

R969.1；R972+.4

A

1006-4931(2016)06-0055-04

2015－08－13)