熊火梅，張紅波，梁劍鋒，余福平

(九江市疾病預(yù)防控制中心，江西九江333000)

2011-2015年九江市職業(yè)暴露人群血清學(xué)和環(huán)境禽流感病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果分析

熊火梅，張紅波，梁劍鋒，余福平

(九江市疾病預(yù)防控制中心，江西九江333000)

目的了解九江市2011年至2015年職業(yè)暴露人群H5N1禽流感病毒抗體水平和環(huán)境中禽流感病毒的感染狀況，以期為九江市人感染高致病性禽流感的防控提供技術(shù)支持。方法馬紅細(xì)胞血凝抑制試驗(yàn)（HI）檢測(cè)禽類養(yǎng)殖人群H5N1血凝素抗體；real-time PCR對(duì)環(huán)境標(biāo)本進(jìn)行A型檢測(cè)，對(duì)A陽性進(jìn)一步檢測(cè)H5、H7和H9亞型；結(jié)果1340份職業(yè)人群血清H5N1血凝素抗體均為陰性；5個(gè)年度中1461份環(huán)境標(biāo)本禽流感病毒核酸檢測(cè)A型陽性率為30.94%，其中H5、H7、H9陽性率分別為10.47%（153/1461）、0.55%（8/1461）、21.77%（318/1461），A未分型陽性率為3.90%（57/1461）。結(jié)論九江市禽類中存在H5、H7、H9亞型感染，存在人感染高致病性禽流感的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)加強(qiáng)禽流感病毒感染監(jiān)測(cè)。

禽流感病毒；外環(huán)境；職業(yè)暴露人群；病原學(xué)監(jiān)測(cè)

禽流感是由A型流感病毒（avian influenza virus，AIV）引起的一種禽類（家禽和野禽）傳染病，其發(fā)生和傳播與自然條件、候鳥遷徙、家禽養(yǎng)殖和活禽交易等密切相關(guān)[1]。近年來，禽流感疫情頻頻發(fā)生，江西省也是禽流感病例報(bào)告發(fā)生比較頻繁的地區(qū)，在過去幾年間報(bào)告過人感染H10N8[2]、H7N9和H5N1等禽流感疫情。九江位于江西的北部，四省通行，部分縣（區(qū)）環(huán)鄱陽湖，人口流動(dòng)大，禽類養(yǎng)殖多，鳥類活動(dòng)頻繁，是著名的候鳥棲息地。根據(jù)《全國(guó)“職業(yè)暴露人群血清學(xué)和環(huán)境高致病性禽流感監(jiān)測(cè)方案”（2011年版）》，我市自2011年開始設(shè)置2個(gè)國(guó)家級(jí)禽流感監(jiān)測(cè)點(diǎn)，2015年根據(jù)《江西省活禽經(jīng)營(yíng)市場(chǎng)人感染禽流感監(jiān)測(cè)方案（2015版）》，又新增加了兩個(gè)省級(jí)禽流感監(jiān)測(cè)點(diǎn)，此次新增監(jiān)測(cè)點(diǎn)屬于候鳥棲息地，在候鳥遷入至遷出期間選擇采集候鳥棲息地環(huán)境標(biāo)本，可為鄱陽湖地區(qū)內(nèi)禽流感發(fā)生與傳播提出預(yù)警?，F(xiàn)就2011－2015年九江市職業(yè)暴露人群血清學(xué)和外環(huán)境禽流感病原學(xué)進(jìn)行分析，為本地區(qū)禽流感防控措施和職業(yè)暴露人群風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工作提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源根據(jù)《全國(guó)職業(yè)暴露人群血清學(xué)和環(huán)境高致病性禽流感監(jiān)測(cè)方案》的要求及九江市禽類養(yǎng)殖業(yè)分布情況確定監(jiān)測(cè)點(diǎn)，以家禽規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）、家禽散養(yǎng)集中地區(qū)和城鄉(xiāng)活禽市場(chǎng)的暴露人群作為監(jiān)測(cè)對(duì)象，采集血液標(biāo)本，離心后收集血清；每年2、3、6、7、10、11月份在各個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)采集籠具表面、禽類糞便、清洗禽類污水、禽類飲水及宰殺禽類案板表面等環(huán)境標(biāo)本。

1.2 試劑環(huán)境標(biāo)本核酸檢測(cè)采用RT-PCR，按照商品化試劑盒操作。血清學(xué)血凝素抗體檢測(cè)由國(guó)家流感中心提供A/Hubei/1/2010、Anhui/1/2005、CM/HK/5052/2007(H5N1)、A/GZ/1/2013(H5N1)滅活抗原和馬紅血球。所有試劑和耗材均在有效期內(nèi)使用。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 血清學(xué)測(cè)定H5N1抗體水平采集被調(diào)查者靜脈血5ml，分離血清，送往江西省疾控中心和國(guó)家流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室采用紅細(xì)胞血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)，人血清對(duì)H5N1抗原的抑制效價(jià)≥1∶80判定為陽性。

1.3.2 核酸檢測(cè)所有外環(huán)境中采集的拭子標(biāo)本提取病毒RNA后，實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行A型流感病毒核酸檢測(cè)，對(duì)A型陽性標(biāo)本再進(jìn)行H5、H7和H9檢測(cè)。其中2011年有25個(gè)A型陽性標(biāo)本未進(jìn)一步分型，其余A陽性均已檢出型別。

1.4 數(shù)據(jù)分析將有關(guān)數(shù)據(jù)錄入Excel2007軟件進(jìn)行整理，通過SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)及Fisher精確概率法，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 職業(yè)暴露人群血清學(xué)監(jiān)測(cè)1340人份職業(yè)暴露人群血清H5N1血凝素抗體檢測(cè)均為陰性。

2.2 環(huán)境標(biāo)本高致病禽流感病原學(xué)監(jiān)測(cè)2011－2015年共檢測(cè)1461份環(huán)境標(biāo)本，檢測(cè)陽性標(biāo)本452份，其中H5陽性標(biāo)本153份，H7陽性標(biāo)本8份，H9陽性標(biāo)本318份，A未分型標(biāo)本57份。陽性率逐年升高，各年總體陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝72.75，P<0.01），2015開始檢出H7亞型，均為H7N9，詳細(xì)見表1。

2.3 不同類型環(huán)境標(biāo)本禽流感病毒核酸檢測(cè)結(jié)果1461份標(biāo)本中，各類型環(huán)境標(biāo)本均有陽性檢出，其他類型、籠具表面擦拭、禽類糞便、禽類飲用水等環(huán)境標(biāo)本陽性率較高。不同標(biāo)本類型檢測(cè)陽性率總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Fisher精確概率法，P< 0.05）見表2。

3 討論

近年來，禽流感病毒跨越種間屏障，由H5、H7、H9亞型感染引起人禽流感病例均有報(bào)道[3-5]，尤其是2013年發(fā)生了新型H7N9禽流感的流行，對(duì)公眾健康造成了嚴(yán)重的損害和巨大的經(jīng)濟(jì)損失[6]。九江市連續(xù)5年對(duì)1340名職業(yè)暴露人群血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，A（H5N1）抗體檢測(cè)均為陰性，與廣州、浙江、贛州等地[7-9]監(jiān)測(cè)結(jié)果一致。環(huán)境標(biāo)本禽流感病原學(xué)監(jiān)測(cè)顯示，九江市禽類相關(guān)外環(huán)境樣本中有禽流感病毒的存在，標(biāo)本陽性檢出率為30.94%，流行強(qiáng)度呈逐漸上升的趨勢(shì)。從監(jiān)測(cè)年份來看，2011年－2012年、2012年－2013年陽性率有明顯的增加，兩兩比較除2014年與2013年和2015年沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外，其余各年陽性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在亞型檢測(cè)中，2011年-2014年檢測(cè)到的主要型別為H5、H9和A未分型禽流感病毒，未檢出H7亞型禽流感病毒，以H9亞型陽性率最高，占總陽性率70.35%（318/452），顯示低致病性的H9禽流感病毒是本地區(qū)的主要流行型別，同Shi W及朱碧柳等調(diào)查的結(jié)果一致[10，11]。高致病性H5亞型檢出率明顯高于H7亞型，且易于和H9混合感染，在活禽交易市場(chǎng)禽類飲水標(biāo)本中檢出1例H5/H7/H9混合感染，不同亞型病毒如果在同一禽類個(gè)體中混合感染，將增加其相互重配進(jìn)而產(chǎn)生新亞型的可能，應(yīng)加強(qiáng)關(guān)注。

表1 2011年－2015年九江市禽流感環(huán)境標(biāo)本核酸檢測(cè)情況

表2 2011年-2015年九江市不同種類標(biāo)本禽流感病毒核酸檢測(cè)情況

標(biāo)本類型病原學(xué)分析顯示，糞便標(biāo)本、禽類飲水、籠具表面擦拭物的陽性率較高，提示人群喂養(yǎng)與接觸活禽市場(chǎng)的籠具時(shí)感染禽流感的危險(xiǎn)較高。2015年在城鄉(xiāng)活禽市場(chǎng)采集的其他型別（禽類羽毛等）標(biāo)本陽性率最高，且3月份在城鄉(xiāng)活禽市場(chǎng)的籠具表面擦拭標(biāo)本中首次檢出H7N9禽流感病毒。同年4月我市在流感常規(guī)監(jiān)測(cè)中檢出首例人感染H7N9禽流感[12]，在患者生活附近活禽交易市場(chǎng)外環(huán)境應(yīng)急監(jiān)測(cè)也檢出H7N9陽性標(biāo)本，為人感染禽流感病例提供了流行病學(xué)證據(jù)。可見H7N9禽流感病毒當(dāng)時(shí)在多個(gè)市場(chǎng)傳播，使活禽市場(chǎng)成為人感染禽流感病毒的主要來源地[13-15]，應(yīng)是今后監(jiān)測(cè)工作的重點(diǎn)。

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Analysis of poultry breeding population serologic features and environmental avian influenza virus surveillance results in Jiujiang city from 2011 to 2015

XIONG Huomei，ZHANG Hongbo，LIANG Jianfeng，YU Fuping.
Jiujiang Center for Diesease Control and Prevention，Jiujiang Jiangxi 333000，China.

ObjectiveTo understand the antibody levels of H5N1 avian influenza virus among poultry breeding population and the virus distribution in Jiujiang city，and provide evidence for the prevention and control of human infection with avian influenza virus.MethodsHemagglutination inhibition(HI)test was used to detect H5N1 hemagglutinin antibody in poultry breeding population.The samples of environment were detected the nucleic acid of avian influenza A with real-time PCR，and the positive samples were further tested for H5，H7 and H9 nucleic acid.ResultsA total of 1340 serum samples from poultry breeding population were negative for H5N1 hemagglutinin antibody.While in 621 environment samples，the positive rate of avian influenza A virus was 30. 94%，including H5 positive rate 10.47%(153/1461），H7 positive rate 0.55%（8/1461），H9 positive rate21.77%(318/1461），untyped A positive rate 3.90%(57/1461）.ConclusionThere were H5，H7 and H9 avian influenza viruses in monitoring areas of Jiujiang city，presenting highpathogenic avian influenza risk to human.So avian influenza virus infection monitoring should be strengthened on poultry breeding population.

Avian influenza virus；Environmental samples；Occupational exposure population；Pathogen monitoring

R446.62，R373.1+3

A

1674-1129(2016)06-0715-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.06.006

2016-09-05；

2016-11-23)

熊火梅，女，1975年12月出生，碩士，主管技師，臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)，研究方向病毒病原學(xué)檢測(cè)，E-mail：xionghuomei@126. com.