徐 迎陳 沁胡雙綱**

1. 上海大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院（上海 200444）；2. 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科；上海市輔助生殖與優(yōu)生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

·論 著·

雄激素通過(guò)雄激素受體途徑調(diào)控小鼠附睪Fkbp5Fkbp5基因的表達(dá)*

徐 迎1,2陳 沁1**胡雙綱2**

1. 上海大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院（上海 200444）；2. 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科；上海市輔助生殖與優(yōu)生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

目的 初步研究小鼠附睪Fkbp5（FK506 binding protein 5）基因?qū)π奂に氐捻憫?yīng)性以及相關(guān)的分子機(jī)制。方法 建立小鼠去勢(shì)以及雄激素補(bǔ)充模型。采用RT-PCR以及RT-qPCR，檢測(cè)正常小鼠、去勢(shì)小鼠以及去勢(shì)后補(bǔ)充外源雄激素的小鼠附睪中Fkbp5基因的mRNA表達(dá)水平。搜索染色體免疫共沉淀-測(cè)序（chromatin immunoprecipitation-sequencing, ChIP-seq）數(shù)據(jù)建立的小鼠附睪全基因組雄激素受體（androgen receptor, AR）結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)據(jù)庫(kù)，尋找與Fkbp5基因相關(guān)聯(lián)的AR結(jié)合位點(diǎn)。利用AR抗體進(jìn)行染色體免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation, ChIP），采用ChIP-PCR以及ChIP-qPCR的方法，檢測(cè)Fkbp5基因相關(guān)聯(lián)的AR結(jié)合位點(diǎn)在體內(nèi)與AR的結(jié)合情況。結(jié)果 去勢(shì)后，F(xiàn)kbp5基因的表達(dá)顯著降低（P＜0.05）；補(bǔ)加雄激素后，F(xiàn)kbp5基因的表達(dá)又升至正常水平（P＜0.05）。從小鼠附睪AR結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)據(jù)庫(kù)中鑒定到14個(gè)Fkbp5相關(guān)聯(lián)的AR結(jié)合位點(diǎn)。ChIP-PCR結(jié)果顯示，在正常生理狀態(tài)下，這14個(gè)結(jié)合位點(diǎn)均與AR結(jié)合。ChIP-qPCR結(jié)果顯示，去勢(shì)后，這14個(gè)AR結(jié)合位點(diǎn)的富集倍數(shù)均顯著下降（P＜0.05）；而補(bǔ)加雄激素后，這些AR結(jié)合位點(diǎn)的富集倍數(shù)又顯著上升至生理水平（P＜0.05）。結(jié)論 Fkbp5在小鼠附睪內(nèi)的表達(dá)受雄激素的正調(diào)控，并且是AR的一個(gè)直接靶基因。該研究首次證實(shí)了Fkbp5的啟動(dòng)子以及上游增強(qiáng)子區(qū)域存在雄激素響應(yīng)元件，為探究雄激素/AR對(duì)Fkbp5的調(diào)控機(jī)制提供了新的視角。

雄激素; 雄激素受體; Fkbp5基因

附睪是雄激素依賴(lài)器官，其結(jié)構(gòu)維持，功能發(fā)揮以及基因表達(dá)都受到雄激素的調(diào)控[1,2]。1973年，Orgebin-Crist等證實(shí)了雄激素對(duì)附睪內(nèi)精子成熟的決定性作用[3]后，雄激素對(duì)附睪的調(diào)控作用得到深入的研究，從形態(tài)學(xué)水平，到生化水平，再到現(xiàn)在的分子水平[4]。雄激素的作用是由雄激素受體（androgen receptor, AR）介導(dǎo)的。AR是一種轉(zhuǎn)錄因子, 屬于核受體超家族成員,一旦被雄激素激活, 便進(jìn)入靶細(xì)胞的核內(nèi)，以高專(zhuān)一性、高親和力與雄激素應(yīng)答元件（androgen response element, ARE）結(jié)合以調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄[5,6]。因此，尋找和鑒定附睪內(nèi)雄激素的靶基因以及與這些靶基因相關(guān)的AR結(jié)合位點(diǎn)（androgen receptor binding site, ARBS）和ARE，是闡明雄激素調(diào)控精子成熟的機(jī)制所必須的。

Fkbp5是免疫親和素蛋白家族的一個(gè)成員，在免疫調(diào)節(jié)以及蛋白折疊和轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中發(fā)揮重要作用[7]。同時(shí)，有文獻(xiàn)報(bào)道，F(xiàn)kbp5還可以作為分子伴侶（chaperone）蛋白與AR結(jié)合進(jìn)一步增強(qiáng)AR的配體結(jié)合活性以及轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性[8]。Fkbp5也是雄激素的一個(gè)靶基因，在前列腺癌細(xì)胞系以及小鼠前列腺中，F(xiàn)kbp5均受雄激素的正調(diào)控，并且對(duì)雄激素的響應(yīng)性遠(yuǎn)比前列腺特異抗原基因（prostate specific antigen，PSA）快速而劇烈[9,10]，因此也被作為在體靶組織內(nèi)研究雄激素調(diào)控機(jī)制的理想的模式基因。

目前，已經(jīng)在Fkbp5的內(nèi)含子區(qū)域和近端啟動(dòng)子區(qū)域鑒定到眾多AR結(jié)合位點(diǎn)[9,10]，然而目前為止，在Fkbp5上游的遠(yuǎn)端增強(qiáng)子區(qū)域是否含有新的AR結(jié)合位點(diǎn)仍然未知。本研究工作表明，在小鼠附睪組織內(nèi)，F(xiàn)kbp5擁有14個(gè)AR結(jié)合位點(diǎn)，其中有4個(gè)位于上游的遠(yuǎn)端增強(qiáng)子區(qū)域。該研究為闡明AR對(duì)Fkbp5基因表達(dá)的快速調(diào)控機(jī)制提供了新的視角。

材料與方法

一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康10周齡雄性C57BL/6J小鼠購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，實(shí)驗(yàn)前在動(dòng)物房喂養(yǎng),自由進(jìn)食和飲水。

二、主要試劑

Trizol（Invitrogen公司），37%甲醛溶液（Sigma公司），2x PCR Master Mix 及PowerUp? SYBR?Green Master Mix （Thermo scientific公司），熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶及ProtoScript?II First Strand cDNA Synthesis Kit（New England Biolabs公司），兔源AR多克隆抗體，正常兔IgG 以及protein A-agarose beads均購(gòu)自Santa Cruz公司。Aprotinin，PMSF以及糖原均購(gòu)自calbiochem公司。獸用丙酸睪酮注射液購(gòu)自寧波第二激素廠。

三、方法

（一）小鼠去勢(shì)和雄激素補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)

參照文獻(xiàn)[11]，稍作改進(jìn)后如下：總共分為3個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組6只10周齡的雄性C57BL/6J小鼠。第1組，即正常組（normal，簡(jiǎn)稱(chēng)Nor組），手術(shù)當(dāng)天處死取附睪組織。第2組，為補(bǔ)加玉米油組（castration+oil，簡(jiǎn)稱(chēng)oil組），在相同時(shí)間，用同樣的方式注射與第3組相同體積的玉米油，作為平行對(duì)照試驗(yàn)。第3組，為補(bǔ)加雄激素組（castration+TP，簡(jiǎn)稱(chēng)TP組），在去勢(shì)后7 d以及8d分別腹腔注射2.5mg/只劑量的丙酸睪酮。最后一次注射后24h，處死小鼠取附睪組織。在殺死小鼠前，通過(guò)摘眼球取血的方式收集血清。每組各取3只小鼠的附睪用來(lái)做ChIP實(shí)驗(yàn)，另外3只小鼠的附睪組織用于抽提組織RNA。本實(shí)驗(yàn)中，無(wú)小鼠意外死亡。血清中雄激素的含量在復(fù)旦大學(xué)放射性研究所通過(guò)放射免疫測(cè)定法測(cè)定。

（二）RNA提取及RT-PCR/ RT-qPCR

組織總RNA 的制備采用Trizol試劑，按照說(shuō)明書(shū)操作。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)按ProtoScript?II First Strand cDNA Synthesis Kit的操作流程進(jìn)行。以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行RT-PCR或采用PowerUp? SYBR?Green Master Mix進(jìn)行RT-qPCR檢測(cè)目標(biāo)基因mRNA的表達(dá)水平。PCR所用引物見(jiàn)表1。

表1 本文用到的引物序列

（三）染色體免疫共沉淀（C h r o m a t i n immunoprecipitation，ChIP）

主要參照文獻(xiàn)[12]的方法進(jìn)行操作，簡(jiǎn)述如下：小鼠附睪組織于PBS中剪碎，并洗滌除去精子和管腔液。組織碎片經(jīng)1%的甲醛室溫交聯(lián)后轉(zhuǎn)入玻璃勻漿器于冰上勻漿40～50次，制成單細(xì)胞懸液，轉(zhuǎn)入2 mL EP管，離心去上清。以SDS裂解液裂解細(xì)胞并進(jìn)行超聲處理以獲得長(zhǎng)度約為500～1000 bp的染色質(zhì)。超聲裂解液離心后保留上清。取15μL保存作為未經(jīng)免疫沉淀的超聲處理后樣本對(duì)照（input），剩余的上清加入適量稀釋緩沖液均分為兩份，分別加入AR多克隆抗體或者正常兔源IgG，4 ℃孵育過(guò)夜。每個(gè)樣品加入50μL protein A-agarose beads，4 ℃孵育2 h，分別用洗脫緩沖液Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ以及TE緩沖液洗滌兩次后，用洗脫緩沖液洗脫，經(jīng)逆轉(zhuǎn)交聯(lián)及蛋白消化后，以乙醇沉淀的方法純化DNA，最后溶于適量TE緩沖液中。

（四） ChIP-PCR及ChIP-qPCR

ChIP實(shí)驗(yàn)按上述方法進(jìn)行。用Primer primier 5軟件設(shè)計(jì)引物，用來(lái)擴(kuò)增結(jié)合位點(diǎn)中心位置兩側(cè)大約100～150bp的DNA片段。以2μL 100倍稀釋的超聲處理后樣本DNA（Input DNA），AR ChIPed DNA以及IgG ChIPed DNA 作為模板進(jìn)行普通PCR（ChIP-PCR）或者采用PowerUp? SYBR?Green Master Mix進(jìn)行熒光定量PCR（ChIP-qPCR）分析。PCR所用引物見(jiàn)表1。

（五）生物信息學(xué)分析

采用MatInspector軟件（Genomatix Software GmbH, http://www.genomatix.de/），在默認(rèn)設(shè)置的情況下尋找AR結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)潛在的ARE元件。并通過(guò)在線的Weblogo軟件（http://weblogo.berkeley.edu/logo. cgi）構(gòu)建ARE的序列標(biāo)示（sequence logo）。

（六）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有實(shí)驗(yàn)操作重復(fù)3 次，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，使用SPSS 11.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、各組小鼠血清睪酮水平

與正常組比較，去勢(shì)后補(bǔ)加玉米油組小鼠血清睪酮水平顯著降低（P＜0.01），注射外源性睪酮后，去勢(shì)小鼠血清睪酮恢復(fù)到正常水平，見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠血清睪酮水平比較（±s）

表2 各組小鼠血清睪酮水平比較（±s）

與Nor組比較，*為P＜0.01

組別睪酮水平 (ng/mL) Nor組 12.2±1.13 Oil組 0.6±0.14*TP組14.1±1.8

二、雄激素對(duì)小鼠附睪Fkbp5Fkbp5表達(dá)的調(diào)控

我們采用去勢(shì)和外源雄激素補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)研究了Fkbp5基因表達(dá)對(duì)雄激素的響應(yīng)性。RT-PCR以及RT-qPCR結(jié)果表明，F(xiàn)kbp5的表達(dá)與雄激素水平成正相關(guān)性。如圖1A1A和圖1B1B顯示，去勢(shì)后，F(xiàn)kbp5基因的表達(dá)顯著降低（P＜0.05），補(bǔ)充玉米油組的表達(dá)量?jī)H是正常組的0.23±0.06倍；補(bǔ)加雄激素后，F(xiàn)kbp5基因的表達(dá)又顯著升高（P＜0.05），表達(dá)量與正常組基本持平，為正常組的（1.07±0.02）倍。用作陰性對(duì)照的Gapdh在正常組，補(bǔ)加玉米油組和補(bǔ)加雄激素組的表達(dá)均無(wú)顯著變化（圖1）。

圖1 RT-PCR（A）和RT-qPCR（B）檢測(cè)Fkbp5在正常小鼠（Nor組）、去勢(shì)后補(bǔ)加玉米油小鼠（Oil組）和去勢(shì)后補(bǔ)充外源雄激素小鼠（TP組）附睪內(nèi)的表達(dá)情況非雄激素靶基因Gapdh用作陰性對(duì)照；與Nor組比較，*為P＜0.05，與Oil組比較，△為 P＜0.05

三、雄激素通過(guò)雄激素受體途徑調(diào)控小鼠附睪Fkbp5Fkbp5基因的表達(dá)

從前期已經(jīng)報(bào)道的AR ChIP-seq實(shí)驗(yàn)鑒定的小鼠附睪AR結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)據(jù)庫(kù)[12]中找到14個(gè)Fkbp5相關(guān)聯(lián)的AR結(jié)合位點(diǎn)-ARBS1-ARBS14，其中8個(gè)位于內(nèi)含子區(qū)域，2個(gè)位于啟動(dòng)子區(qū)域，4個(gè)位于上游增強(qiáng)子區(qū)域（圖2A2A）。我們采用MatInspector軟件預(yù)測(cè)了這些結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)是否含有雄激素響應(yīng)元件（androgen responsive element，ARE），結(jié)果表明，除了ARBS11外，其余13個(gè)結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)均含有至少一個(gè)潛在的ARE元件（圖2B2B）。將這些潛在ARE的序列進(jìn)行多重比對(duì)，利用Weblogo軟件，將這些序列的保守信息進(jìn)行分析并圖形化顯示（圖2C2C），發(fā)現(xiàn)這些ARE元件的保守序列與MatBase數(shù)據(jù)庫(kù)中儲(chǔ)存的經(jīng)典的ARE序列（AGAACAnnnTGTTCT）極度相似。

圖2 Fkbp5相關(guān)聯(lián)的14個(gè)AR結(jié)合位點(diǎn)的位置，結(jié)合特性及ARE分析A:與Fkbp5關(guān)聯(lián)的14個(gè)AR結(jié)合位點(diǎn)的分布；B:14個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合特性分析；C:14個(gè)AR結(jié)合位點(diǎn)包含的保守的ARE序列。ARBS: 雄激素受體結(jié)合位點(diǎn) AR binding site；TSS: 轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn) transcription start site；ARE: 雄激素響應(yīng)元件 androgen responsive element

我們接下來(lái)用ChIP-PCR驗(yàn)證了這些結(jié)合位點(diǎn)在體內(nèi)與AR的結(jié)合情況。如圖3所示，14個(gè)位點(diǎn)均被AR所結(jié)合，而用作陰性對(duì)照的Gapdh的啟動(dòng)子區(qū)（Gapdh promoter）的序列則沒(méi)有AR的富集。

AR與DNA元件的結(jié)合是雄激素依賴(lài)性的，我們因此檢測(cè)了AR與這些位點(diǎn)的結(jié)合是不是響應(yīng)于雄激素的刺激。如圖4所示，與Nor組相比，全部14個(gè)ARBSs在Oil組中的AR結(jié)合完全消失或顯著降低，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在補(bǔ)加雄激素組（TP），14個(gè)ARBSs的AR結(jié)合比Oil組顯著升高，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），并基本回復(fù)正常水平，表明AR與這些位點(diǎn)的結(jié)合是雄激素依賴(lài)性的。

討 論

附睪作為男性生殖系統(tǒng)中的一個(gè)重要的附屬性器官，不僅是精子運(yùn)行的管道和儲(chǔ)存的場(chǎng)所，也是精子成熟的主要器官。附睪是體內(nèi)AR表達(dá)量最高的器官之一（www.nursa.org/10.1621/datasets.02001），并且附睪幾乎所有的生理過(guò)程都是高度雄激素依賴(lài)性的。因此附睪是研究AR在體內(nèi)生理狀態(tài)下的調(diào)控規(guī)律的理想模型。

Fkbp5由于對(duì)雄激素的快速和完全響應(yīng)而成為研究雄激素和雄激素受體調(diào)控機(jī)制的一個(gè)理想模式基因。我們的結(jié)果（圖1）表明，在小鼠附睪內(nèi)，F(xiàn)kbp5的表達(dá)受到雄激素的完全正調(diào)控，這一結(jié)果與之前報(bào)道的前列腺中的Fkbp5的表達(dá)相一致。通過(guò)搜尋前期ChIP-seq實(shí)驗(yàn)得到的高分辨率的AR基因組結(jié)合位點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)，并加以實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，我們確定了14個(gè)與Fkbp5相關(guān)的AR結(jié)合位點(diǎn)以及眾多潛在的AREs，這表明Fkbp5是AR的一個(gè)直接靶基因。為了進(jìn)一步佐證我們的結(jié)論，我們通過(guò)搜索附睪基因表達(dá)數(shù)據(jù)庫(kù)（http://mrg.genetics.washington.edu/），明確了Fkbp5和AR在附睪不同區(qū)域的表達(dá)變化，結(jié)果如圖5所示，AR基因和Fkbp5基因在附睪頭部和體部表達(dá)量高，而在附睪尾部表達(dá)量低。 Fkbp5和AR在附睪組織內(nèi)的相似的表達(dá)模式，也暗示了它們之間的正相關(guān)性。

圖3 ChIP-PCR驗(yàn)證AR結(jié)合位點(diǎn)（ARBS1-ARBS14）在體內(nèi)與AR的結(jié)合情況非雄激素靶基因Gapdh的promoter 序列用作陰性對(duì)照。IP：未經(jīng)免疫沉淀的超聲處理后樣本DNA；AR：AR抗體免疫沉淀DNA；IgG：正常兔血清免疫沉淀DNA

圖4 ChIP-qPCR驗(yàn)證AR結(jié)合位點(diǎn)（ARBS1- ARBS14）在體內(nèi)與AR的結(jié)合對(duì)雄激素的響應(yīng)性與Nor組比較，*為P＜0.05，與Oil組比較，△為P＜0.05

圖5 Fkbp5和AR在小鼠附睪內(nèi)的表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)性A：Fkbp5和AR在小鼠附睪不同區(qū)域表達(dá)的平均信號(hào)值；B：Fkbp5和AR在小鼠附睪不同區(qū)域表達(dá)的示意圖?；虮磉_(dá)數(shù)據(jù)來(lái)自http://mrg. genetics.washington.edu/

之前已經(jīng)有一些關(guān)于Fkbp5的AR調(diào)控的研究，Magee等在小鼠前列腺中確認(rèn)了一個(gè)位于intron 5的ARE[9]，在小鼠3017.1細(xì)胞系中鑒定到一個(gè)位于intron 1的PRE（progesterone response element）[13]。在我們的研究中，這兩個(gè)位點(diǎn)都被ARBS覆蓋，分別對(duì)應(yīng)于圖2A2A和圖4的ARBS4和 ARBS8，表明它們?cè)谛∈蟾讲G中是真正的AR結(jié)合位點(diǎn)。在小鼠前列腺中并不被AR所結(jié)合的位于intron 5的另外一個(gè)ARBS（圖2A2A和圖4的ARBS5），在小鼠附睪中卻是一個(gè)真正的AR結(jié)合位點(diǎn)，并且對(duì)AR的親和性還很高。這或許反映了AR對(duì)Fkbp5調(diào)控的組織差異性。在我們的工作之前，還沒(méi)有關(guān)于Fkbp5的5’上游遠(yuǎn)端增強(qiáng)子區(qū)域AR結(jié)合位點(diǎn)的報(bào)道。我們的結(jié)果顯示了在小鼠附睪中AR對(duì)Fkbp5基因復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制。

本研究中鑒定的與Fkbp5相關(guān)聯(lián)的AR結(jié)合位點(diǎn)，大部分位于遠(yuǎn)離promoter區(qū)的內(nèi)含子區(qū)域以及上游的遠(yuǎn)端區(qū)域，僅有少數(shù)位于近端啟動(dòng)子區(qū)。這種AR的調(diào)控模式在之前的研究中均已廣泛報(bào)道[14,15]，這或許是AR在體內(nèi)發(fā)揮調(diào)控作用的主要方式。這些遠(yuǎn)端的AR結(jié)合位點(diǎn)或許通過(guò)成環(huán)（looping）的方式作用于目標(biāo)基因的啟動(dòng)子區(qū)從而調(diào)控基因表達(dá)，就如前列腺癌細(xì)胞中AR對(duì)PSA的調(diào)控那樣[16]。AR對(duì)Fkbp5的復(fù)雜調(diào)控機(jī)制為我們闡明AR在小鼠附睪內(nèi)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)提供了新的角度。

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（2016-07-08收稿）

Androgens regulate the expression of Fkbp5 through androgen receptor in mouse epididymis*

Xu Ying1,2, Chen Qin1**, Hu Shuanggang2**
1. School of Life Science, Shanghai University, Shanghai 200444, China; 2. Reproductive Medical Center, RenJi Hospital, School of Medicine, Shanghai Jiao Tong University; Shanghai Key Laboratory for Assisted Reproduction and Reproductive Genetics

Objectivee To investigate the responsiveness of Fkbp5 (FK506 binding protein 5) on androgen manipulation in mouse epididymis and explore its related mechanisms. Metthhooddss The castration and androgen supplementation mouse model was established. The epididymide tissues from normal, castrated and castrated but supplemented with androgen mice were collected, and their total RNA were extracted. The expressions of Fkbp5 in epididymis tissues were detected by RT-PCR and RT-qPCR. AR binding sites associated with Fkbp5 were identifi ed by searching the database of genomewide AR binding sites established by ChIP-seq in mouse epididymis. Chromatin immunoprecipitation (ChIP) using ARantibody was performed, and the in vivo AR occupancies on 14 sites associated with Fkbp5 were determined by ChIPPCR and ChIP-qPCR. Results ults After castration, the expressions of Fkbp5 were signifi cantly decreased (P ＜ 0.05); after use of androgen supplement, the expressions of Fkbp5 were elevated to normal level (P ＜ 0.05). Fourteen AR binding sites associated with Fkbp5 were found in the ChIP-seq database. The ChIP-PCR data showed that the fourteen AR binding sites were occupied by AR in physiological conditions. The ChIP-qPCR data revealed that the enrichment folds of 14 AR binding sites were remarkably decreased after castration, but were signifi cantly increased to normal conditions after use of androgen supplementation. Conclusionusion Fkbp5 was a bona fi de direct target gene of AR in mouse epididymis, and its expression was positively regulated by androgen. This study shed new light on understanding of androgen/AR regulatory network in mouse epididymis.

ords androgen; androgen receptor; Fkbp5 gene

doi:10.3969/j.issn.1008-0848.2016.08.002

Q 492.4

資助：本課題受?chē)?guó)家自然科學(xué)基金（81571435，81200468）資助

**共同通訊作者，胡雙綱，E-mail：shuangganghu@163.com；陳沁，E-mail: chenqincc@staff.shu.edu.cn