梅 成,趙晶媛，段國(guó)相,章一鳴,鄒天雨

(黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

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音樂(lè)電針頭穴透刺法對(duì)缺血性腦卒中后抑郁大鼠行為學(xué)及腦組織NE、5-HT含量的影響*

梅 成,趙晶媛，段國(guó)相,章一鳴,鄒天雨

(黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

目的：對(duì)比研究音樂(lè)電針頭部透穴針刺法對(duì)缺血性卒中后抑郁(PSD)大鼠腦內(nèi)去甲腎上腺素(NE)及5-羥色胺(5-HT)表達(dá)的影響，為臨床治療卒中后抑郁患者提供診療思路。方法：選取健康大鼠，隨機(jī)分為針刺組、西藥組、模型組和空白組。應(yīng)用線栓法聯(lián)合孤養(yǎng)和慢性應(yīng)激刺激制備復(fù)合型卒中后抑郁大鼠模型。針刺組采用百會(huì)透刺太陽(yáng)連接音樂(lè)電針治療。西藥組采用鹽酸氟西汀溶液灌胃治療。治療3周后處死，進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)，觀察各處理方法對(duì)模型大鼠NE、5-HT的影響。結(jié)果：治療前各PSD模型組大鼠神經(jīng)功能評(píng)價(jià)無(wú)明顯差異。治療后檢測(cè)大鼠腦內(nèi)5-羥色胺、去甲腎上腺素含量均改善明顯，針刺組與模型組對(duì)比具有顯著性差異(P<0.05)，且針刺組與西藥組對(duì)比無(wú)明顯差異(P>0.05)。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)中兩種治療方法均能夠調(diào)節(jié)PSD模型大鼠腦內(nèi)去甲腎上腺素與5-羥色胺之間的平衡,證明音樂(lè)電針頭部透穴針刺療法對(duì)腦卒中后抑郁癥模型大鼠具有確定療效。

缺血性腦卒中;抑郁；音樂(lè)電針；頭穴透刺法

卒中后抑郁癥(Poststrokedepression，PSD)屬于腦血管意外后經(jīng)常出現(xiàn)的癥狀。這種癥狀在腦血管意外后出現(xiàn)率為20%～50%。PSD的發(fā)生可以使神經(jīng)功能恢復(fù)的速度減緩，提高病患的死亡率，嚴(yán)重影響腦卒中患者的生存質(zhì)量。有研究證明，PSD的出現(xiàn)與去甲腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5-HT)兩者之間的平衡失調(diào)有關(guān)[1]。卒中后抑郁動(dòng)物模型的制備技術(shù)逐步完善，為精確研究卒中后認(rèn)知功能損害奠定了基礎(chǔ)。

本研究通過(guò)線栓法聯(lián)合孤養(yǎng)和慢性應(yīng)激刺激制備復(fù)合型卒中后抑郁(PSD)大鼠模型。模型制備成功后對(duì)PSD模型大鼠的行為學(xué)變化以及腦內(nèi)海馬區(qū)NE和5-HT含量變化進(jìn)行觀察。經(jīng)儀器測(cè)出含量變化后，對(duì)比觀察通過(guò)音樂(lè)電針頭穴透刺處理對(duì)于PSD大鼠的作用，為臨床治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選取健康的雄性清潔級(jí)SD大鼠80只，體質(zhì)量(200±20)g，合格證編號(hào)：SCXK(魯)2014-0019。將新購(gòu)進(jìn)的SD大鼠飼養(yǎng)于恒溫飼養(yǎng)室內(nèi)。調(diào)整溫度區(qū)間(18℃～25℃)、濕度區(qū)間(35±2)%。采用自然光，允許大鼠自由食水。觀察飼養(yǎng)7天，各籠大鼠反應(yīng)正常，準(zhǔn)備開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。為提高術(shù)后存活率，各組大鼠于手術(shù)前后12h內(nèi)禁食不禁水。

1.2 模型制備

參照相關(guān)文獻(xiàn)，采用線栓法[2]聯(lián)合孤養(yǎng)和慢性應(yīng)激刺激制備復(fù)合型卒中后抑郁(PSD)大鼠模型。應(yīng)用濃度為10%的水合氯醛(體質(zhì)量10ml/kg)，將麻醉藥物注射于腹腔內(nèi)，麻醉成功后開(kāi)始制備大鼠局灶性腦缺血模型。

復(fù)合模型制備方法：將成功制備的局灶性腦缺血大鼠模型轉(zhuǎn)入小鼠籠內(nèi)，繼續(xù)為期16天的單獨(dú)飼養(yǎng)。在術(shù)后7天內(nèi)相繼給予中度不可預(yù)測(cè)應(yīng)激處理。刺激方法包括：電擊足底，熱、冰刺激，鉗尾，斷食、水，晝夜顛倒，搖擺，以制備腦卒中后抑郁大鼠復(fù)合模型[3]。模型評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：Longa5分法[4]。評(píng)定完畢后，依據(jù)評(píng)分結(jié)果，對(duì)模型動(dòng)物低于2分者進(jìn)行篩選剔除。將符合實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的模型大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組。分為針刺組、西藥組、模型組、空白組，每組各20例。

1.3 實(shí)驗(yàn)材料

安迪牌針灸針：規(guī)格：0.25mm×25mm。音樂(lè)電針儀：ZJ-12H型音樂(lè)電針儀,中國(guó)針灸學(xué)會(huì)，哈爾濱致厚醫(yī)療器械有限公司[5]。鹽酸氟西汀膠囊:百優(yōu)解,國(guó)藥準(zhǔn)字J20080016,禮來(lái)蘇州制藥有限公司分裝。多樣品超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)：寧波新藝超聲設(shè)備有限公司。高效液相色譜儀：Waters510，WATERS公司。電化學(xué)檢測(cè)器測(cè)定儀：Waters464，WATERS公司。

1.4 治療方法

針刺組采用“百會(huì)”穴透刺“太陽(yáng)”穴。穴位選擇根據(jù)《大鼠穴位圖譜》[6]確定，“百會(huì)”穴位于大鼠頂骨中點(diǎn)、“太陽(yáng)”穴位于大鼠眼外眥與耳之間連線近1/3處。將模型大鼠置于固定器中，單手扶住大鼠背部，使大鼠處于安靜、清醒狀態(tài)，不加束縛帶固定[7]。去除大鼠穴位周?chē)w毛，消毒，用毫針由“百會(huì)”穴向“太陽(yáng)”穴方向斜刺5～10mm，完成另外一側(cè)針刺后將兩支針柄通過(guò)導(dǎo)線與音樂(lè)電針儀相連接，選取抗抑郁音樂(lè)處方。刺激強(qiáng)度以針灸針柄微微顫動(dòng)、大鼠不嘶叫、掙扎，保持安靜為度，每日1次，每次20min。

西藥組給予藥物灌胃治療[8]，將鹽酸氟西汀膠囊生理鹽水溶液按2mg/kg·d-1劑量給藥，每日1次；模型組給予等量生理鹽水灌胃，每日1次；空白組不做任何處置[1]。

1.5 療效評(píng)價(jià)

1.5.1 糖水消耗實(shí)驗(yàn) 訓(xùn)練各組大鼠飲用蔗糖水，濃度10g/L，初始48h用10g/L蔗糖水替換自來(lái)水，接著禁食、水20h，繼而予10g/L蔗糖水飲用后計(jì)算24h飲用量。神經(jīng)功能評(píng)價(jià)時(shí)間：腦卒中后第7、14、21天[9]。

1.5.2 敞箱實(shí)驗(yàn) 評(píng)價(jià)各組大鼠在5min中的活動(dòng)情況。評(píng)價(jià)項(xiàng)目選擇：中央格內(nèi)停留的時(shí)間。方格間穿行次數(shù)標(biāo)準(zhǔn)：3足以上踏入鄰格。起立修飾次數(shù)標(biāo)準(zhǔn)：雙前肢離開(kāi)地面1cm以上。評(píng)價(jià)時(shí)間：模型制備成功后第7、14、21天。

1.5.3NE和5-HT的含量測(cè)定 各組大鼠處理3周后用斷頭法處死。冰盤(pán)上迅速分離腦組織，提取左側(cè)海馬[10]，稱(chēng)重后加入0.1mol/LHClO4300μL(4℃預(yù)冷)，應(yīng)用超聲粉碎器在冰浴條件下超聲勻漿30s，轉(zhuǎn)速為11 000轉(zhuǎn)/min，完畢取上清液20μL進(jìn)樣。采用Waters510泵高效液相色譜系統(tǒng)、Waters464電化學(xué)檢測(cè)器測(cè)定NE和5-HT含量。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

模型組大鼠各個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)比，糖水?dāng)z入減少，證明造模成功。西藥組和針刺組與模型組比較，糖水?dāng)z入增多，有差異性(P<0.05)，證明治療方法有效。針刺組與西藥組比較治療效果無(wú)明顯差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠蔗糖水消耗量的變化

模型組大鼠各個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)比，運(yùn)動(dòng)量減少，證明造模成功。西藥組和針刺組與模型組比較，水平、垂直運(yùn)動(dòng)增多，有差異性(P<0.05)，證明治療方法有效。針刺組與西藥組比較治療效果無(wú)明顯差異(P>0.05)。見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠運(yùn)動(dòng)能力評(píng)分的比較

模型組大鼠與空白組對(duì)比，具有差異性(P<0.05)，證明造模成功。西藥組與針刺組與模型組比較，NE含量具有差異(P<0.05)，證明治療方法有效。針刺組與西藥組比較NE含量無(wú)明顯差異(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠腦組織NE含量的比較

模型組大鼠與空白組對(duì)比，具有差異性(P<0.05)，證明造模成功。西藥組與針刺組與模型組比較，5-HT含量具有差異(P<0.05)，證明治療方法有效。針刺組與西藥組比較5-HT含量無(wú)明顯差異(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠腦組織5-HT含量的比較

治療前各PSD模型組大鼠量化分級(jí)評(píng)分無(wú)明顯差異，治療后檢測(cè)去甲腎上腺素、5-羥色胺含量，各治療組大鼠均有明顯改善，針刺組與模型組對(duì)比有顯著性差異(P<0.05)，且針刺組與西藥組對(duì)比無(wú)明顯差異(P>0.05)。

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為大腦神經(jīng)突觸間的遞質(zhì)濃度相對(duì)或絕對(duì)不足，而導(dǎo)致整體精神活動(dòng)和心理功能的全面性低下?tīng)顟B(tài)[11]。本研究通過(guò)對(duì)大鼠經(jīng)過(guò)21天的應(yīng)激刺激后制備出的抑郁癥模型大鼠海馬NE、5-HT的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)其N(xiāo)E、5-HT及代謝產(chǎn)物總量減少。

電針療法以傳統(tǒng)針刺療法為基礎(chǔ)，加入電極刺激?，F(xiàn)在常用的脈沖電針儀能夠形成周期性波形，電刺激機(jī)體，以增強(qiáng)針感。但在臨床治療中后期，患者機(jī)體會(huì)因?qū)﹄娽槾碳ゎl率逐漸適應(yīng)而出現(xiàn)療效衰減。音樂(lè)電針療法通過(guò)將電針治療與音樂(lè)治療結(jié)合起來(lái)，把音樂(lè)的節(jié)律轉(zhuǎn)化為不停變化的頻率和波形。故音樂(lè)電針效果穩(wěn)定，無(wú)療效衰減的現(xiàn)象。而且由音樂(lè)電刺激產(chǎn)生的針感舒適、療效顯著，患者樂(lè)于接受。將音樂(lè)從被動(dòng)欣賞轉(zhuǎn)化為生理效應(yīng)的主動(dòng)治療。通過(guò)音樂(lè)電波激發(fā)穴內(nèi)和經(jīng)上的經(jīng)氣，使之沿經(jīng)而行，配合透刺療法，使氣至病所達(dá)到更佳的治療目的。

本實(shí)驗(yàn)采用音樂(lè)電針結(jié)合頭穴透刺法治療中風(fēng)后抑郁癥，其機(jī)理可能是電流形成的電場(chǎng)、磁場(chǎng)，通過(guò)興奮5-HT能神經(jīng)元上行纖維，激活“邊緣系統(tǒng)-中腦功能環(huán)路”[12]，使該環(huán)路形成一個(gè)良性循環(huán)，使杏仁核、下丘腦、海馬、前額葉皮質(zhì)等與情緒相關(guān)部位的5-HT持續(xù)釋放增加，達(dá)到了改善抑郁狀態(tài)的目的。本研究證實(shí)了音樂(lè)電針透刺療法治療中風(fēng)后抑郁癥模型大鼠具有確定療效，這對(duì)以后臨床治療疾病、提高療效具有重要參考意義。

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黑龍江中醫(yī)藥中青年科技攻關(guān)項(xiàng)目，編號(hào)：ZQG-008(2014年)。

梅成(1970-)，男，主任醫(yī)師，從事神經(jīng)系統(tǒng)疾病康復(fù)研究。

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2016-05-15