張文熠 林偉 余樂杰

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DcR3在胰腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

張文熠 林偉 余樂杰

誘捕受體(decoy receptor，DcR)是新近發(fā)現(xiàn)的腫瘤壞死因子受體(tumour necrosis factor receptor，TNFR)超家族成員。已有研究表明，DcR3基因能夠通過多種途徑阻斷T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell，NK)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，從而促進(jìn)惡性腫瘤的免疫逃逸，在肺癌、乳腺癌、肝癌、胃癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中扮演重要角色[1]。DcR家族有DcR1、DcR2、DcR3三個(gè)成員，目前關(guān)于胰腺癌涉及DcR的研究主要集中在DcR1、DcR2，而對(duì)DcR3的研究相對(duì)較少[2]。隨著DcR3單克隆抗體技術(shù)以及小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)技術(shù)的發(fā)展，DcR3在惡性腫瘤的基因診斷及靶向治療方面的應(yīng)用價(jià)值越來(lái)越大[3]。本研究檢測(cè)胰腺癌組織DCR的表達(dá)，探討其對(duì)胰腺癌診斷、治療及預(yù)后判斷的意義。

一、資料與方法

1．研究對(duì)象：選取溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科2010年至2012年收集的資料完整的40例胰腺癌組織、20例匹配的胰腺癌旁組織、20例正常胰腺組織。癌旁組織是指距離病灶<3 cm的胰腺組織，正常胰腺組織來(lái)源于本院外科手術(shù)的患者，均經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為正常胰腺組織。術(shù)前接受過放化療治療的患者、臨床隨訪資料不完整的患者以及標(biāo)本未經(jīng)病理學(xué)證實(shí)的患者均排除在外。出院后每3個(gè)月復(fù)查1次全腹部及胸部CT，檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物，隨訪3年。

2．免疫組化檢查：采用鏈霉親和素-過氧化物酶法檢測(cè)胰腺組織DcR3蛋白表達(dá)。DcR3單克隆抗體購(gòu)自ABCAM公司，工作濃度1∶50；免疫組化SP法試劑盒購(gòu)自北京賽馳生物科技公司，按說(shuō)明書操作。以PBS替代一抗作為陰性對(duì)照。由病理科醫(yī)師盲法讀片。胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色、棕黃色、褐色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)，并根據(jù)著色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分：無(wú)色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，褐色為3分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)<5%為0分、5%～<25%為1分、25%～<50%為2分、50%～<75%為3分、>75%為4分。兩分相乘>4分為陽(yáng)性。

二、結(jié)果

1．臨床資料：胰腺癌組織40例，其中男性22例、女性18例，年齡39～72歲，平均(58±10)歲；根據(jù)WHO2000年制定的腫瘤分期標(biāo)準(zhǔn)，高分化8例、中分化9例、低分化23例；依據(jù)AJCCTNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期4例、Ⅱ期10例、Ⅲ期26例。癌旁組織20例，其中男性11例、女性9例，年齡42～70歲，平均(56±10)歲。正常胰腺組織20例，其中男性10例、女性10例，年齡44～68歲，平均(58±9)歲。3組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2．胰腺組織DcR3蛋白表達(dá)：胰腺癌、癌旁組織、正常胰腺組織DcR3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為77.5%(31/40)、35.0%(7/20)、5.0%(1/20)，胰腺癌組織顯著高于癌旁組織及正常胰腺組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=32.400，P<0.001，圖1)。

3．胰腺癌組織DcR3蛋白表達(dá)與腫瘤臨床病理參數(shù)的相關(guān)性：胰腺癌組織DcR3蛋白表達(dá)與腫瘤TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有顯著的相關(guān)性(P值均<0.05，表1)。

4．胰腺癌組織DcR3蛋白表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系：40例胰腺癌患者隨訪9～34個(gè)月，失訪3例，隨訪率92.5%。到截止日期僅1例DcR3蛋白陰性表達(dá)患者存活。DcR3蛋白陰性表達(dá)的胰腺癌患者中位生存時(shí)間為24.8個(gè)月，顯著高于DcR3蛋白陽(yáng)性表達(dá)胰腺癌患者的17.8個(gè)月(圖2)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.889，P=0.029)。

討論 目前的研究表明，腫瘤的發(fā)生是由于細(xì)胞增殖與凋亡的平衡過程受到破壞所致。DcR3是重要的凋亡抑制蛋白之一，由300個(gè)氨基酸組成，因缺乏跨膜結(jié)構(gòu)，屬于分泌性蛋白，能夠在血清中檢出。DcR3與TNFR具有高度同源性，能夠通過與Fas等介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的蛋白分子配體相結(jié)合，阻斷后者介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程[4]；另外，DcR3還參與T細(xì)胞的免疫凋節(jié)，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能紊亂，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸[6]。已有研究表明，DcR3過表達(dá)與多種惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。蘇傳麗[7]檢測(cè)肝癌、肝硬化、急性感染患者的DcR3水平，證實(shí)肝癌患者DcR3陽(yáng)性率明顯高于其他良性肝病患者，能夠鑒別腫瘤與炎癥性疾病。周健等[8]報(bào)道，與良性腫瘤患者及健康人群比較，胰腺癌患者血清DcR3水平顯著升高，而腫瘤切除后血清DcR3水平明顯下降。本研究結(jié)果也顯示，胰腺癌組織DcR3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于癌旁胰腺組織及正常胰腺組織。DcR3在胰腺癌發(fā)病中的機(jī)制可能為：(1)DcR3能夠與Fas競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合Fas配體(FasL)，形成性質(zhì)穩(wěn)定的DcR3-Fc-FasL復(fù)合物，從而抑制FasL有效發(fā)揮介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用[9]。(2)DcR3能夠與單純皰疹病毒侵入介質(zhì)(herpesvirusentrymediator，HVEM)的受體(LIGHT)相結(jié)合，阻斷LIGHT與淋巴毒素β受體及單純皰疹病毒侵入介質(zhì)相結(jié)合介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡機(jī)制[10]。(3)DcR3基因表達(dá)能夠影響LIGHT與腫瘤壞死因子樣配體1A(TL1A)介導(dǎo)的T細(xì)胞激活機(jī)制[11]，使CD80等多種T淋巴細(xì)胞協(xié)同刺激信號(hào)分子的水平明顯降低，從而降低機(jī)體的細(xì)胞免疫功能。(4)DcR3能夠上調(diào)IL-4的表達(dá)，從而抑制CD4+T淋巴細(xì)胞活性，導(dǎo)致Th1/Th2的失衡[12]。

圖1 癌旁組織(1A)、正常胰腺組織(1B)、胰腺癌組織(1C)DcR3蛋白表達(dá)(SP ×20)

表1 胰腺癌組織DcR3蛋白表達(dá)與腫瘤臨床病理參數(shù)的相關(guān)性

臨床病理參數(shù)陽(yáng)性例數(shù)(%)陰性例數(shù)(%)χ2值P值年齡(歲)0．0180．893 ≥5518(58．1)5(55．6) <5513(41．9)4(44．4)性別0．5230．47 男18(58．1)4(44．4) 女13(41．9)5(55．6)腫瘤直徑(cm)0．0430．845 ≥416(51．6)5(55．6) <415(48．4)4(44．4)TNM分期5．1190．024 Ⅰ+Ⅱ8(25．8)6(66．7) Ⅲ23(74．2)3(33．3)分化程度5．9140．015 高+中10(32．3)7(77．8) 低21(67．7)2(22．2)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移4．2690．039 是12(38．7)7(77．8) 否19(61．3)2(22．2)

圖2 生存函數(shù)圖

Dias-Santos等[13]研究報(bào)道，胰腺癌DcR3表達(dá)與腫瘤組織分化程度顯著呈負(fù)相關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，DcR3陽(yáng)性表達(dá)與胰腺癌TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、生存時(shí)間等密切相關(guān)，這現(xiàn)象可能與DcR3與TL1A能夠促進(jìn)血管新生所致[14]。已有研究表明，DcR3基因表達(dá)能夠影響肝癌患者的腫瘤血管密度[15]，推測(cè)除了抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，DcR3可能還通過影響腫瘤組織的血供和營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)，從而影響腫瘤組織的生長(zhǎng)和侵襲能力。但其具體機(jī)制還有待以后進(jìn)一步研究。

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(本文編輯：屠振興)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2016.06.013

325000 浙江溫州，溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院放化療科(張文熠、林偉)，胃腸外科(余樂杰)

張文熠，Email: zesir_mark@163.com

2016-03-14)