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        琥珀酸索利那新對女性膀胱過度活躍癥患者生長相關(guān)蛋白-43及尿動力學(xué)影響研究

        2016-12-21 11:13:00黃毅劉春曉高虹鄒紅東何江波陳定華
        貴州醫(yī)藥 2016年9期
        關(guān)鍵詞:索利琥珀酸膀胱

        黃毅 劉春曉 高虹 鄒紅東 何江波 陳定華

        (1.貴陽市第四人民醫(yī)院泌尿外科,貴州 貴陽550002;2.南方醫(yī)科大學(xué)附屬珠江醫(yī)院泌尿外科,廣東 廣州 510515)

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        琥珀酸索利那新對女性膀胱過度活躍癥患者生長相關(guān)蛋白-43及尿動力學(xué)影響研究

        黃毅1劉春曉2高虹1鄒紅東1何江波1陳定華1

        (1.貴陽市第四人民醫(yī)院泌尿外科,貴州 貴陽550002;2.南方醫(yī)科大學(xué)附屬珠江醫(yī)院泌尿外科,廣東 廣州 510515)

        目的 探討琥珀酸索利那新對女性膀胱過度活躍癥患者生長相關(guān)蛋白-43及尿動力學(xué)影響效果。方法 選取我科收治的女性膀胱過度活躍癥患者60例,隨機分為兩組。對照組30例,予常規(guī)異搏定80 mg加生理鹽水80 mL配置的無菌溶液進行膀胱灌注,每次保留1 h,并每15 min變換體位,2次/周,1周為1個療程,治療4個療程。實驗組30例,予琥珀酸索利那新5 mg晚睡前口服,1周為1療程,治療4個療程。正常組30例,選取健康女性,不予任何治療手段。治療結(jié)束后,對比各組患者生長相關(guān)蛋白-43及尿動力學(xué)水平變化情況,并通過PCR逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測各組生長相關(guān)蛋白-43基因表達水平。結(jié)果 (1)經(jīng)治療,兩組患者生長相關(guān)蛋白-43及磷酸化生長相關(guān)蛋白水平不同程度降低,實驗組較對照組生長相關(guān)蛋白-43明顯降低(P<0.05);(2)治療后兩組患者尿動力學(xué)均不同程度恢復(fù),實驗組尿量、最大尿流率、殘余尿量、初始尿意容積較對照組明顯改善(P<0.05);(3)治療后,兩組生長相關(guān)蛋白-43及磷酸化蛋白水平均不同程度改善,實驗組PCR、生長相關(guān)蛋白-43、磷酸化蛋白較對照組明顯降低(P<0.05)。結(jié)論 琥珀酸索利那新能夠明顯改善女性患者膀胱過度活躍癥狀,降低生長相關(guān)蛋白-43水平,并抑制相關(guān)蛋白磷酸化程度,從而改善膀胱刺激癥狀,降低膀胱內(nèi)壁敏感性,改善尿動力學(xué)水平。

        琥珀酸索利那新; 女性膀胱過度活躍癥; 生長相關(guān)蛋白-43; 尿動力學(xué)

        膀胱過度活躍癥是一種常見的以尿道—膀胱功能障礙為主要表現(xiàn)的女性泌尿外科疾病[1],尿動力學(xué)檢查為檢測膀胱過度活躍癥的金標(biāo)準(zhǔn)??诜晁崴骼侵委煱螂走^度活躍癥,可明顯降低生長相關(guān)蛋白-43水平,從而減輕膀胱內(nèi)膜神經(jīng)突出異常興奮癥狀,并改善尿動力學(xué),降低殘余尿量及日排尿次數(shù)等。筆者通過觀察對比各組患者生長相關(guān)蛋白-43水平及尿動力學(xué)狀況,并通過PCR逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測各組生長相關(guān)蛋白基因表達水平,旨在探究琥珀酸索利那新對女性膀胱過度活躍癥患者的治療效果,現(xiàn)報告如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 選取2010年1月至2014年1月于我院以膀胱過度活躍癥為診斷住院的女性患者60例,以隨機數(shù)字表法分為實驗組30例,平均病程(5.5±2.1)年,平均年齡(50.2±1.8)歲;對照組30例,平均病程(4.9±2.4)年,平均年齡(52.5±1.4)歲;正常組30例,平均年齡(49.9±1.9)歲。兩組患者的一般資料相仿,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

        1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn):符合《中華醫(yī)學(xué)會泌尿外科分會尿控學(xué)組》[2]的診斷標(biāo)準(zhǔn),尿頻、尿急、急迫性尿失禁等癥侯,可以單獨出現(xiàn),也可以任何復(fù)合形式出現(xiàn);尿動力學(xué)可見膀胱貯尿期出現(xiàn)膀胱逼尿肌不自主收縮,從而引起膀胱內(nèi)壓升高,患者感到尿意,有尿急感覺;也可以為其他形式的尿道-膀胱功能障礙;成人排尿次數(shù)達到24 h 排尿>8 次,夜間排尿>2 次,每次尿量<200 mL?;颊咦栽竻⑴c實驗,并簽署知情同意書。方案獲得我院倫理委員會批準(zhǔn)并全過程跟蹤。排除標(biāo)準(zhǔn):肝、膽嚴(yán)重疾病、惡性腫瘤、神志異?;颊?、尿路結(jié)石、梗阻等造成的膀胱刺激征者。

        1.3 治療方法 對照組參照臨床用藥指南,予常規(guī)鹽酸維拉帕米緩釋片(德國 Abbott GmbH &制藥公司,注冊證號:H20080326,商品名 緩釋異搏定,0.24 g)80 mg加生理鹽水80 mL所配置的無菌溶液進行膀胱灌注,灌注后每15 min變換體位1次,以仰臥、俯臥、左右側(cè)臥為主,每次保留1 h,膀胱容量小者可分段灌注,2次/周,1周為1療程,治療4個療程。實驗組30例,予琥珀酸索利那新片(荷蘭 Astellas Pharma Europe B.V.生物制藥公司,國藥準(zhǔn)字J20090109,商品名 衛(wèi)喜康,5 mg)5mg晚睡前口服,正常組30例,選取健康女性,不予任何治療手段。治療結(jié)束后,對比各組患者生長相關(guān)蛋白-43及尿動力學(xué)水平變化情況,并通過PCR逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測各組生長相關(guān)蛋白-43基因表達水平。注意事項:治療期間禁食生冷等刺激性食物,戒煙酒,保持情緒穩(wěn)定。

        1.4 觀察指標(biāo)及檢測方法 (1)生長相關(guān)蛋白-43水平:治療后,采取各組患者靜脈血5~10 mL,通過生化檢驗儀進行化驗,測量各組患者生長相關(guān)蛋白-43及磷酸化生長相關(guān)蛋白水平,記錄并比對檢驗結(jié)果。(2)尿動力學(xué)狀況:治療前后分別囑患者飲用1 000 mL水,當(dāng)尿意最大時,測量尿動力學(xué)各項參數(shù),包括尿量、最大尿流率,采用0.9%生理鹽水灌注膀胱,檢測患者膀胱充盈感覺,并記錄殘余尿量、初始尿意容積等情況,記錄并比對檢驗結(jié)果。檢測方法:PCR擴增反應(yīng)試驗,采取各組患者靜脈血3 mL,加入PCV擴容劑,通過離心機15 000 r/min離心機中離心15 min,取上清液加入0.1 mol/L pH 7.2的PBS液,后1 000 r/min離心15 min,取上清液3 μL放入PCR儀器中檢測。采用雙巢PCR擴增反應(yīng)方法檢測生長相關(guān)蛋白-43基因表達水平,檢測所用引物由上海英駿生物有限公司合成,上游引物:TTA ATA AGTCCTA GTG TATAACT ATG AAT,下游引物:ACT ACCTGAG CAA TTCCCTG CTC TT;并應(yīng)用GAPDH管家基因作為β內(nèi)參,GAPDH內(nèi)參上游引物:AGA TCCA CAA CGGA TAC ATT,下游引物:TCC CTC AAGA TTGT CAG CAA。提取總蛋白基因并行雙巢PCR反應(yīng),做凝膠電泳及攝影分析。用IBAS圖像分析儀對PCR雜交結(jié)果進行光密度掃描,測得生長相關(guān)蛋白基因條帶與GAPDH條帶的峰面積積分。

        1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析,計數(shù)資料采用χ2方法檢驗,計量資料采用t檢驗方法處理,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié) 果

        2.1 生長相關(guān)蛋白-43水平 治療后兩組患者生長相關(guān)蛋白-43及磷酸化生長相關(guān)蛋白水平均不同程度改善,與對照組比較,實驗組生長相關(guān)蛋白-43及磷酸化生長相關(guān)蛋白水平明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

        表1 兩組生長相關(guān)蛋白-43及磷酸化生長相關(guān)蛋白水平比較情況

        注:治療后,與對照組比較,△P<0.05。

        2.2 兩組尿動力學(xué)情況比較 治療后兩組患者尿量、最大尿流率、殘余尿量、初始尿意容積均不同程度恢復(fù),與對照組比較,實驗組尿量、最大尿流率、殘余尿量、初始尿意容積明顯改善,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

        表2 兩組尿動力學(xué)比較情況

        注:治療后,與對照組比較,△P<0.05。

        2.3 各組生長相關(guān)蛋白基因表達情況及PCR試驗擴增結(jié)果 實驗結(jié)束后,各組均有不同程度的生長相關(guān)蛋白基因表達,與對照組比較,實驗組表達水平明顯低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表3。各組生長相關(guān)蛋白離心產(chǎn)物進行PCR擴增試驗后,試驗樣本均顯示出不同的特異性條帶,于對照組比較,實驗組PCR反應(yīng)結(jié)果與正常組水平接近,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見圖1。

        表3 各組生長相關(guān)蛋白基因表達比較情況

        注:實驗后,與對照組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義P<0.05。

        注:M.試驗β內(nèi)參;1.模型組 1967 bp;2.正常組 261 bp ;3.實驗組 391 bp;4.對照組 1531 bp。圖1 各組PCR反應(yīng)擴增結(jié)果比較

        3 討 論

        膀胱過度活躍癥的病因較為復(fù)雜,并因人體生理構(gòu)造多發(fā)于女性患者,是一種常見的急性尿路綜合征疾病。臨床上可見尿頻、尿急、夜尿增多、膀胱殘余量增加、尿意容積降低等表現(xiàn)為主[3]。經(jīng)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計,全世界尿路疾病患者中有反復(fù)發(fā)作性膀胱過度活躍癥病史的占47.2%,并呈逐年上升趨勢[4]。女性由于其尿道短粗直等特征,有高發(fā)的尿路感染疾病,容易導(dǎo)致膀胱炎癥而造成膀胱內(nèi)壁敏感性增強,膀胱括約肌及逼尿肌緊張度異常,從而導(dǎo)致尿動力學(xué)改變等情況[5]。并且多數(shù)膀胱過度活躍癥患者由膀胱感染等尿路刺激征所引起,臨床治療后復(fù)發(fā)幾率較高,且藥物灌注膀胱治療方法對患者影響較大、痛苦較重,往往療效不理想。目前主要應(yīng)用琥珀酸索利那新口服,其可明顯降低機體生長相關(guān)蛋白-43水平[6]。研究[7]證實,其蛋白為神經(jīng)突出激發(fā)沖動及增殖修復(fù)的主要引物。通過降低相關(guān)蛋白水平,抑制蛋白基因在體內(nèi)的合成及表達,可降低膀胱內(nèi)壁神經(jīng)細(xì)胞及肌細(xì)胞的沖動敏感性,降低貯尿期患者逼尿肌異常收縮,并加強尿路括約肌的收縮力,從而改善膀胱尿動力學(xué)水平[8]。筆者為此做了相關(guān)研究,主要通過觀察對比各組患者生長相關(guān)蛋白-43水平及尿動力學(xué)狀況,并通過PCR逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測各組生長相關(guān)蛋白基因表達水平,來探究琥珀酸索利那新對女性膀胱過度活躍癥患者的治療效果。

        本實驗中:(1)兩組患者生長相關(guān)蛋白-43水平比較:經(jīng)治療,兩組患者生長相關(guān)蛋白-43及磷酸化生長相關(guān)蛋白水平不同程度降低,且實驗組生長相關(guān)蛋白-43、磷酸化生長相關(guān)蛋白較對照組明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),提示琥珀酸索利那新可明顯改善膀胱過度活躍癥而引起的膀胱內(nèi)壁及相關(guān)局部肌細(xì)胞神經(jīng)突出異常增殖、分化,抑制神經(jīng)突出的生長,降低神經(jīng)遞質(zhì)的釋放水平,從而改善膀胱活躍程度;(2)兩組尿動力學(xué)情況比較:治療后兩組患者尿動力學(xué)均不同程度恢復(fù),且實驗組尿量、最大尿流率、殘余尿量、初始尿意容積較對照組尿量明顯改善,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),琥珀酸索利那新可明顯降低膀胱興奮水平,從而改善患者尿頻、尿急、尿緊迫等癥狀,降低逼尿肌緊張度,提高膀胱及尿路括約肌緊張程度,從而增加膀胱容積及初始尿意容積,減少尿量殘留,改善尿動力學(xué)水平;(3)兩組生長相關(guān)蛋白-43及磷酸化蛋白水平比較:治療后,兩組生長相關(guān)蛋白-43及磷酸化蛋白水平均不同程度改善,且實驗組PCR391 bp、生長相關(guān)蛋白-43(0.24±0.17) bp、磷酸化蛋白、較對照組水平明顯降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),PCR產(chǎn)物通過凝膠電泳試驗,可明確顯示機體生長相關(guān)蛋白水平狀況及含量,從而反應(yīng)出膀胱內(nèi)神經(jīng)突出及沖動傳到遞質(zhì)生成分泌水平,并且檢測特異性較高,可更精確的反應(yīng)膀胱尿動力學(xué)水平,PCR的試驗方法快速、敏感、準(zhǔn)確、特異性高,對基因水平表達研究可精確試驗結(jié)果,為臨床研究及應(yīng)用,提供良好基礎(chǔ)。

        [1] 魯芳.膀胱過度活躍癥治療經(jīng)驗介紹[J].中國泌尿?qū)W,2003,35(10):10-11.

        [2] 中華醫(yī)學(xué)會泌尿外科分會尿控學(xué)組. 膀胱過度活躍癥診斷與防治指南[J].中華醫(yī)學(xué)信息,2009,24(1):20-21.

        [3] 張光欣. 膀胱過度活躍癥用藥治療觀察[J].中國泌尿外科學(xué),1993,14(4):161.

        [4] 羅華. 膀胱過度活躍癥的中醫(yī)辨證治療[J].中華中醫(yī)雜志,2002,20(1):17.

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        [6] 黎蘭. 膀胱過度活躍癥治療38例[J].中國泌尿系研究,2005,18(1):39.

        [7] 周黎明.異搏定及琥珀酸索利那新治療膀胱過度活躍癥 100 例療效觀察[J].中國腎臟研究,2005,37(1):36.

        [8] 李維健.琥珀酸索利那新治療膀胱過度活躍癥女性患者的臨床治療觀察[J].臨床醫(yī)藥實踐雜志,2007,16(6):538.

        Research of the effect of solifenacin succinate on growth-associated protein 43 and urodynamics of female patients with overactive bladder

        HuangYi1,LiuChunxiao2,GaoHong1,ZouHongdong1,HeJiangbo1,ChenDinghua1.

        1.DepartmentofUrology,theFourthPeople'sHospitalofGuiyang,Guiyang550002,China. 2.DepartmentofUrology,AffiliatedofZhujiangHospitalofSouthernMedicalUniversity,Guangzhou510515,China.

        Objective To investigate the clinical effect of solifenacin succinate on growth-associated protein 43 (GAP-43) and urodynamics of female overactive bladder. Methods 60 female patients with overactive bladder were chosen and randomly divided into control group (CG) and trial group (TG), each groupn=30. CG received intravesical instillation of sterile solution (verapamil 80 mg and normal saline 80 ml), which retaining one hour in each time and changing posture per 15 minutes in this time, twice per week. TG received oral administration of solifenacin succinate (5 mg,once before bed-time). Treatment lasted for 4 weeks in both groups. 30 healthy women were chosen as normal group (NG) and no treatment was given. Changes of GAP-43 and urodynamics in three groups were compared on the end of treatment, and gene expressions of GAP-43 in three groups were detected by using reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). Results There were differently degree of depression of level of GAP-43 and phosphorylation GAP-43 (p-GAP-43) in both group patients after treatment, and level of GAP-43 in TG was markedly lower than CG, there were statistical significantly differences (P<0.05). Urodynamics in both TG and CG had different degree of recovery on the end of treatment. Urine volume, maximum urinary flow rate, residual urine volume and initial urine volume in TG showed more obviously improved and there were statistical significantly differences (P<0.05). Levels of protein expression of GAP-43 and p-GAP-43 in both groups improved in differently degree, and there were statistical significantly differences (P<0.05). Conclusion Solifenacin succinate can improve the symptoms of female overactive bladder and ameliorates urodynamics by reduced the level of GAP-43 and inhibited the degree of phosphorylation.

        Solifenacin succinate; Femal overactive bladder; Growth-associated protein 43; Urodynamics

        R699.7

        A

        1000-744X(2016)09-0919-03

        2016-05-20)

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