劉偉偉，張 亮，張 麗，孫響波，張法榮

1山東中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250014；2山東中醫(yī)藥大學(xué)；3山東省中醫(yī)院

黑地黃丸改善5/6腎切除大鼠腎衰模型腎功能的研究*

劉偉偉1，張 亮1，張 麗2，孫響波2，張法榮3△

1山東中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250014；2山東中醫(yī)藥大學(xué)；3山東省中醫(yī)院

目的:通過(guò)觀察黑地黃丸對(duì)5/6腎切除腎衰大鼠(CRF大鼠)的血清尿素氮（BU N）、肌酐(Scr)水平的影響，探討黑地黃丸對(duì)CRF大鼠腎功能的影響，并尋求最佳劑量。方法:將70只W i st ar大鼠隨機(jī)分為空白組，模型組，黑地黃丸高、中、低劑量組，尿毒清組，洛丁新組，共7組，除空白組外其他各組大鼠均行5/6腎切除術(shù)，建立CRF大鼠模型，連續(xù)給藥12周后，采用酶偶聯(lián)速率法測(cè)定血清尿素及采用堿性苦味酸法測(cè)定血清肌酐動(dòng)脈含量。結(jié)果:與模型組比較，黑地黃丸高、中、低劑量組血清BU N、Scr顯著降低(P＜0.01)。與黑地黃丸低劑量組比較，黑地黃丸高劑量組、尿毒清組血清BU N降低(P＜0.05)；與黑地黃丸低劑量組比較，黑地黃丸高劑量組、尿毒清組血清Scr顯著降低(P＜0.01)。結(jié)論:黑地黃丸可以明顯降低腎衰大鼠的血清BU N、Scr，從而改善腎功能，延緩CRF進(jìn)程，其中尤以黑地黃丸高劑量組效果最佳。

黑地黃丸；5/6腎切除大鼠腎衰模型；血清尿素氮；肌酐

慢性腎衰竭是臨床常見(jiàn)的疑難病癥，其病死率居高不下，嚴(yán)重危害人類的生命健康。張法榮等［1］在應(yīng)用黑地黃丸治療慢性腎衰竭的臨床觀察中發(fā)現(xiàn)，黑地黃丸治療慢性腎衰竭總有效率為80.56%。本研究通過(guò)建立5/6腎切除大鼠腎衰模型，觀察黑地黃丸對(duì)腎衰大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)的影響，旨在進(jìn)一步探討黑地黃丸對(duì)腎功能的影響，并尋求最佳劑量。

1 材料與方法

1.1 藥材 黑地黃丸(以熟地黃12 g，蒼術(shù)12 g，干姜6 g，大棗6 g)為原料用泛制法制作水丸(300丸/瓶)，由本院藥劑科自制；尿毒清(廣州康臣藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，5 g/袋，批號(hào): 20100314)；鹽酸貝那普利片(商品名:洛丁新，北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，10mg/片，批號(hào):x0264)。

1.2 儀器與試劑 EL340i型全自動(dòng)酶標(biāo)儀(賽默飛世爾儀器有限公司提供)；GL20A全自動(dòng)高速冷凍離心機(jī)(湖南儀器儀表總廠離心機(jī)廠提供)；SSW型電熱恒溫水浴箱(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司提供)；水合氯醛(山東大學(xué)齊魯醫(yī)院，批號(hào):20120702)；肌酐(批號(hào):3454)、尿素氮(批號(hào):0758)試劑盒，均由北京利德曼公司提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)健康雄性Wistar大鼠［實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào):SCXK(魯)20090001］，體質(zhì)量(200±20)g，由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.4 方法

1.4.1 分組 造模前試飼養(yǎng)1周，實(shí)驗(yàn)前1天大鼠稱重，根據(jù)平均體質(zhì)量將大鼠分為模型組，黑地黃丸高、中、低劑量組，尿毒清組，洛丁新組，與正常組共7組，每組大鼠10只。

1.4.2 造模 參照文獻(xiàn)［2］，實(shí)驗(yàn)第1天除正常組外，其余各組大鼠均腹腔注射10%水合氯醛麻醉，在肋脊角左下1 cm處向左下做一3 cm左右切口，充分暴露左側(cè)腎臟，用眼科手術(shù)剪分別剪除左腎上、下各1/3左右皮質(zhì)，吸收性明膠海綿壓迫止血3分鐘，開止血夾，觀察有無(wú)明顯出血，復(fù)位殘腎，1周后行第二次手術(shù)，結(jié)扎腎蒂，切除右腎，分別于手術(shù)結(jié)束后第3、6周末取血測(cè)定各造模組大鼠血清BUN、Scr水平，以Scr水平顯著高于正常組

為造模成功，建立CRF大鼠模型。造模前后各組大鼠Scr水平，見(jiàn)圖1。

圖1 造模前后各組大鼠Scr水平

1.4.3 給藥 黑地黃丸高、中、低劑量組分別給予黑地黃丸［0.00648、0.00324、0.00162 g/(g·d)］，尿毒清組給予尿毒清顆粒［0.00225/(g·d)］，洛丁新組灌胃給予洛丁新［0.0009 mg/(g·d)］，于造模成功后溫水溶解灌胃給藥(0.01 mL/g)，正常組與模型組給予等體積生理鹽水灌胃，1次/d，共12周。

1.4.4 取材與檢測(cè)方法

1.4.4.1 取材 各組大鼠術(shù)后第3周末、第6周末均在采血前禁食12小時(shí)，斷尾取血2 mL送檢；實(shí)驗(yàn)最后1天用10%水合氯醛麻醉(0.35 mg/g體質(zhì)量)，開腹，暴露腹主動(dòng)脈，采用無(wú)菌采血器和7號(hào)針頭進(jìn)行腹主動(dòng)脈采血，采集1 mL左右的動(dòng)脈血送檢血常規(guī)，4 mL左右的動(dòng)脈血，3 000 r/min，離心15分鐘分離血清，送生化室檢測(cè)生化指標(biāo)，檢測(cè)BUN、Scr等。

1.4.4.2 檢測(cè)方法 BUN、Scr采用日本OLYMPUS公司全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)，Scr用酶偶聯(lián)速率法，BUN使用堿性苦味酸法。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以(s)表示，采用 One-way ANOVA、LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

與模型組比較，黑地黃丸高、中、低劑量組血清BUN、Scr顯著降低(P＜0.01)。與黑地黃丸低劑量組比較，黑地黃丸高劑量組、尿毒清組血清BUN降低(P＜0.05)；與黑地黃丸低劑量組比較，黑地黃丸高劑量組、尿毒清組血清Scr顯著降低(P＜0.01)。見(jiàn)表1。

表1 黑地黃丸對(duì)5/6腎切除大鼠腎衰模型血清BU N、Scr的影響(s)

表1 黑地黃丸對(duì)5/6腎切除大鼠腎衰模型血清BU N、Scr的影響(s)

注:*表示與正常組比較，P＜0.01；△表示與模型組比較，P＜0.01；▲表示與黑地黃丸低劑量組比較，P＜0.05 (血清尿素組)；▲表示與黑地黃丸低劑量組比較，P＜0.01 (血清肌酐組)。

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3 討論

黑地黃丸出自《素問(wèn)·病機(jī)氣宜保命集》。全方由蒼術(shù)一斤(米泔浸)，熟地黃一斤，川姜冬一兩、夏五錢、春七錢組成。方中蒼術(shù)芳香溫燥，能健脾和胃，燥化濕濁；熟地黃具有滋陰養(yǎng)血，填精益髓之功，二藥合用補(bǔ)瀉兼施、標(biāo)本兼顧、剛?cè)嵯酀?jì)。佐以干姜，溫運(yùn)中焦，健壯脾氣，大棗補(bǔ)中益氣，扶脾安胃。熟地黃、大棗得蒼術(shù)、干姜滋陰養(yǎng)血不礙濕；蒼術(shù)、干姜得熟地黃、大棗溫通發(fā)散不助濕。4藥相合，滋而不膩，溫而不燥，共呈甘苦合用，剛?cè)峄?jì)的配伍特點(diǎn)，構(gòu)成滋水燥濕，滋液沁脾之良方。研究發(fā)現(xiàn)CRF營(yíng)養(yǎng)不良與患者持續(xù)存在的微炎癥狀態(tài)有密切關(guān)系，二者可能是互為因果關(guān)系［3］。有關(guān)學(xué)者［4］認(rèn)為黑地黃丸治療慢性腎衰竭的藥理機(jī)制主要在于改善CRF營(yíng)養(yǎng)不良和微炎癥狀態(tài)。現(xiàn)代研究熟地黃對(duì)獼猴細(xì)胞免疫功能和紅細(xì)胞穩(wěn)定性有明顯的增強(qiáng)作用［5］，有效成分地黃多糖b在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中能明顯促進(jìn)白細(xì)胞介素-2 (IL-2)的分泌，顯示了免疫調(diào)節(jié)活性［6］，且地黃具有止血和促進(jìn)血細(xì)胞增殖的藥理活性，同時(shí)可以通過(guò)影響白血球和血小板來(lái)抗炎［7］。蒼術(shù)根莖甲醇提取物的水提部分含有多糖成分，有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用［8］，其還含有多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是蒼術(shù)保健作用的重要物質(zhì)基礎(chǔ)［9］，且蒼術(shù)中提取分離出的蒼術(shù)內(nèi)酯甲具有抗炎作用［10］。大棗多糖顯著提高氣血兩虛模型動(dòng)物的血象及血清粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子水平，具有良好的補(bǔ)血作用［11］，且大棗中的黃酮類化合物具有抗過(guò)敏、抗炎作用［12］。干姜的醚提物、水提物都有抗炎作用［13］，其抗炎作用可能是通過(guò)調(diào)節(jié)腎上腺皮質(zhì)的功能而發(fā)揮的［14］。可見(jiàn)在治療CRF方面黑地黃丸具有提高機(jī)體免疫力、改善造血功能、抗炎等作用，從而糾正腎性貧血、防治腎間質(zhì)纖維化、改善CRF患者腎功能。通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀察，與模型組比較，黑地黃丸高、中、低劑量組血清BUN顯著降低(P＜0.01)，與黑地黃丸低劑量組比較，黑地黃丸高劑量組、尿毒清組血清BUN降低(P＜0.05)，可以看出各治療組干預(yù)第12周時(shí)黑地黃丸高、中、低劑量組、尿毒清組、洛丁新組均能降低血清肌酐水平，以黑地黃丸高劑量組和尿毒清組效果最好。與模型組比較，黑地黃丸高、中、低劑量組、尿毒清組血清Scr顯著降低(P＜0.01)，與黑地黃丸低劑量組比較，黑地黃丸高劑量組、尿毒清組血清Scr顯著降低(P＜0.01)，可以看出各治療組干預(yù)第12周時(shí)黑地黃丸高、中、低劑量組、尿毒清組、洛丁新組均能降低血清肌酐水平，以黑地黃丸高劑量組和尿毒清組效果最好。由此可見(jiàn)，黑地黃丸可以明顯降低腎衰大鼠的血清BUN、Scr，從而改善腎功能，延緩CRF進(jìn)程，其中尤以黑地黃丸高劑量組效果最佳。

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Study on Black DiHuang Pills in Improving Renal Function of the Rats with Renal Failure Undergoing 5/6 Nephrectomy

LIU Weiwei1,ZHANG Liang1,ZHANG Li2,SUN Xiangbo2,ZHANG Farong3△
1 The First Clinical Medical College of Shandong University of Chinese Medicine,Jinan 250014,China;
2 Shandong University of Chinese Medicine;3 Shandong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

Objective:To survey the effects of black DiHuang pills on renal function of the rats with chronic renal failure(CRF),find out the optimal dosage by observing its effects on the levels of serum urea and creatinine of CRF rats undergoing 5/6 nephrectomy.Methods：Seventy Wistar rats were divided into seven groups randomly,the blank group,the model group,and high,middle and low dosages groups of black DiHuang pills,NiaoDuQing group and Lotensin group.The rats received 5/6 nephrectomy except the ones in the blank group to establish CRF rat models,the contents of serum urea were detected by the method of enzyme coupling ratio and the contents of serum creatinine detected by basic picric acid method after the rats were medicating for 12 weeks.Results：Compared with the model group,the levels of serum BUN and Scr decreased in high,middle and low dosages groups of black DiHuang pills significantly(P＜0.01).Compared with low dosages group of black DiHuang pills,the levels of serum BUN of high dosage group of black DiHuang pills and NiaoDuQing group lowered (P＜0.05).Compared with low dosages group of black DiHuang pills,the level of serum Scr in high dosages group of black DiHuang pills and NiaoDuQing group decreased significantly(P＜0.01).Conclusion：Black DiHuang pills can decrease the levels of serum BUN and Scr of the rats with renal failure obviously,therefore to improve renal function and delay the progress of CRF,especially high dosage of black DiHuang pills.

black DiHuang pills;5/6 nephrectomized rats with renal failure;BUN;Scr

R285.5

A

1004-6852(2016)10-0017-03

2016-04-13

山東省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)2010G 0020214)。

劉偉偉(1990—)，女，在讀博士研究生。研究方向:中醫(yī)藥治療腎病的臨床與實(shí)驗(yàn)研究。

△通訊作者:張法榮(1965—)，男，博士研究生導(dǎo)師，教授，主任醫(yī)師。研究方向:中醫(yī)藥治療腎病的臨床與實(shí)驗(yàn)研究。