趙萬(wàn)晴，戚繼紅

（安徽省淮北市食品藥品檢驗(yàn)中心，安徽 淮北 235000）

高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定止咳片中白花前胡甲素和白花前胡乙素含量

趙萬(wàn)晴，戚繼紅

（安徽省淮北市食品藥品檢驗(yàn)中心，安徽 淮北 235000）

目的 建立同時(shí)測(cè)定止咳片中白花前胡甲素和白花前胡乙素含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 采用Agilent Zorbax SB－C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m)，流動(dòng)相為甲醇－水（77∶23），檢測(cè)波長(zhǎng)為321 nm，流速為1.0 mL／min，進(jìn)樣量為10 L。結(jié)果 白花前胡甲素質(zhì)量濃度在21.98～219.8 mg／L范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好(r＝0.999 5)；白花前胡乙素質(zhì)量濃度在5.895～58.95 mg／L范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好(r＝0.999 9)。白花前胡甲素的平均加樣回收率為100.75%，RSD為1.44%（n＝9）；白花前胡乙素的平均加樣回收率為99.11%，RSD為1.68%(n＝9)。結(jié)論 該方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、穩(wěn)定、靈敏度高，適用于止咳片中白花前胡甲素和白花前胡乙素的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；止咳片；白花前胡甲素；白花前胡乙素

止咳片是由百部、前胡、苦杏仁組方的復(fù)方制劑，具有潤(rùn)肺定喘、祛痰止咳的功效[1]。前胡為主要成分之一，最早產(chǎn)地及歷史上前胡道地產(chǎn)區(qū)在長(zhǎng)江以南的江浙與皖南一帶，歷代均以白花前胡作為前胡的正品[2]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，白花前胡具有祛痰、改善心肌功能、抗菌、抗氧化及抗癌的作用[3－5]，還具有雙重抑制乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶的作用[5－6]，其主要成分為白花前胡甲素、白花前胡乙素[6]。筆者采用高效液相色譜（HPLC）法同時(shí)測(cè)定止咳片中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Thermo U－3000型 HPLC色 譜 儀 （W Thermo DAD－3000檢測(cè)器）；JAC－300N型超聲波處理器（濟(jì)寧奧波超聲電氣有限公司）；Mettler AE－240型電子分析天平（精度為0.1 mg／0.01 mg）。

1.2 試藥

白花前胡甲素對(duì)照品（批號(hào)為111711－200602）、白花前胡乙素對(duì)照品（批號(hào)為111904－201203）均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院，含量以98.0%計(jì)；止咳片（批 號(hào) 分 別 為 20140103，20140114，20140208，20140509，吉林省康福藥業(yè)有限公司）；甲醇為色譜純；水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)[7－8]

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Agilent Zorbax SB－C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇－水（77∶23）；檢測(cè)波長(zhǎng)：321 nm；流速：1.0 mL／min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：25℃。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液

稱取白花前胡甲素對(duì)照品21.98 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為白花前胡甲素對(duì)照品貯備液。

稱取白花前胡乙素對(duì)照品12.03 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為白花前胡乙素對(duì)照品貯備液。

2.2.2 供試品溶液[9－10]

取樣品除去糖衣，研細(xì)，精密稱取2.80 g（約10片重），置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入氯仿25 mL，精密稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷至室溫，再稱定質(zhì)量，用氯仿補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，并轉(zhuǎn)移至10 mL，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：按照止咳片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制備工藝制備不含對(duì)照藥材的陰性對(duì)照樣品，研細(xì)，稱取粉末1.684 5 g，按供試品制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。在擬訂色譜條件下，陰性對(duì)照品溶與對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密量取白花前胡甲素對(duì)照品、白花前胡乙素對(duì)照品貯備液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置同一10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按擬訂色譜條件，精密量取10 μL注入液相色譜儀，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得白花前胡甲素回歸方程為 Y＝0.395 9 X－1.253 8（r＝0.999 5），質(zhì)量濃度在21.98～219.8 mg／L范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好；白花前胡乙素為Y＝0.338 6 X－0.070 8（r＝0.999 9），質(zhì)量濃度在5.895～58.95 mg／L范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：分別精密量取白花前胡甲素對(duì)照品、白花前胡乙素對(duì)照品貯備液2.0 mL，置同一10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。取上述對(duì)照品混合溶液，按擬訂色譜條件，精密量取10 μL注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素的 RSD分別為0.16%和0.26%（n＝6）。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為20140103）樣品，按供試品溶液制備方法制備6份，照擬訂色譜條件測(cè)定。結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素的 RSD分別為1.71%和1.83%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為20140103）供試品溶液，于0，4，8，12，16，20，24 h時(shí)分別進(jìn)樣測(cè)試，記錄色譜峰面積。結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素的RSD分別為0.23%和0.18%(n＝7)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取已知含量樣品（批號(hào)為20140103），共9份，分成3組，置具塞錐形瓶中，每組分別精密加入含白花前胡甲素87.92 mg／L、含白花前胡乙素23.58 mg／L的對(duì)照品貯備液4.0，5.0，6.0 mL，照供試品溶液制備方法制備溶液，精密量取10 μL注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批（批號(hào)分別為20140114，20140208，20140509）樣品，各2份，精密稱取適量，置具塞錐形瓶中，依法制備供試品溶液。精密量取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 白花前胡甲素和白花前胡乙素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

表2 樣品中白花前胡甲素和白花前胡乙素含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 波長(zhǎng)選擇

考察質(zhì)量濃度為0.10 g／L白花前胡甲素和白花前胡乙素對(duì)照品77%的甲醇水溶液，分別進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果均于320 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，參照2010年版《中國(guó)藥典（一部）》前胡藥材檢驗(yàn)項(xiàng)下的波長(zhǎng)為321 nm，故波長(zhǎng)選擇為321 nm。

3.2 提取超聲時(shí)間選擇

考察白花前胡甲素、白花前胡乙素提取時(shí)間，分別處理20，30，40 min[10]后進(jìn)行考察，結(jié)果超聲30 min能達(dá)到滿意的效果。

3.3 流動(dòng)相選擇

前胡甲素含量測(cè)定使用流動(dòng)相大多為甲醇－水或乙腈－水[11－13]，考慮到甲醇毒性比乙腈小，選擇甲醇－水作流動(dòng)相。為了白花前胡甲素、白花前胡乙素及雜質(zhì)組分能完全分離，調(diào)節(jié)甲醇－水的比例，發(fā)現(xiàn)采用甲醇－水（77∶23）為流動(dòng)相時(shí)效果較好。

[1]WS3－B－0700－91，中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第四冊(cè))[S].

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Simultaneous Content Determination of Praeruptorin A and Praeruptorin B in Zhike Tablets by HPLC

Zhao Wanqing,Qi Jihong
(Huaibei Food and Drug Inspection Center,Huaibei,Anhui,China 235000)

Objective To establish an HPLC method for the simultaneous content determination of praeruptorin A and praeruptorin B in Zhike Tablets.Methods Agilent ZORBAX SB C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm)was used.The mobile phase was methanol－water (77∶23).The detection wavelength was 321 nm,the flow rate was 1.0 mL／min and the injection volume was 10 μL.Results The linear range of praeruptorin A was 21.98－219.8 mg／L(r＝0.999 5),and the linear range of praeruptorin B was 5.895－58.95 mg／L (r＝0.999 9).The average recovery rate of praeruptorin A were 100.75%(n＝9),RSD＝1.44%;the average recovery rate of praeruptorin B was 99.11%(n＝9),RSD＝1.68%.Conclusion The method is simple,accurate,stable and high sensitive,which is suitable for the quality control of praeruptorin A and praeruptorin B in Zhike Tablets.

HPLC;Zhike Tablets;praeruptorin A;praeruptorin B

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2016)21－0060－04

2016－07－28)