張俊龍，羅艷梅

（沈陽中化農(nóng)藥化工研發(fā)有限公司，新農(nóng)藥創(chuàng)制與開發(fā)國家重點實驗室，沈陽 110021）

4種殺線蟲劑對南方根結(jié)線蟲的室內(nèi)活性測定

張俊龍，羅艷梅

（沈陽中化農(nóng)藥化工研發(fā)有限公司，新農(nóng)藥創(chuàng)制與開發(fā)國家重點實驗室，沈陽 110021）

通過藏紅T染色法，確定線蟲染色時間，并測定4種常規(guī)藥劑對南方根結(jié)線蟲的室內(nèi)活性。結(jié)果顯示，染色1 h后，線蟲的染色率達到100%。1.8%阿維菌素EC和40%滅線磷EC對南方根結(jié)線蟲具有良好的活性，LC50值分別為14.926 3 mg/L和15.306 8 mg/L；40%辛硫磷EC和200 g/L丁硫克百威EC活性較差。

殺線蟲劑；根結(jié)線蟲；染色；室內(nèi)活性；阿維菌素

根結(jié)線蟲是一類非常重要的植物病原線蟲，廣泛分布于世界各地，在我國尤為嚴重［1］。其主要危害番茄、茄子、芹菜、菜豆、黃瓜、苦瓜、菠菜等［2］。隨著種植業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，蔬菜保護地栽培面積迅速擴大，根結(jié)線蟲病的發(fā)生逐年加重，產(chǎn)量損失在30%～50%之間，嚴重的高達75%，甚至造成絕產(chǎn)［3］。線蟲侵染到土壤中，可以在土壤和寄主中快速繁殖并生存，一旦侵染便難以控制，已然成為危害保護地作物最為重要的有害生物之一。

現(xiàn)階段生產(chǎn)中防治根結(jié)線蟲的主要手段是化學防治，用于防治根結(jié)線蟲的化學藥劑多為毒性高、殘留期長、用量大、成本高的品種，不僅對人和其他非靶標生物造成傷害，而且效果也不理想［4］。本文采用染色法，擬對阿維菌素、滅線磷、辛硫磷和丁硫克百威防治南方根結(jié)線蟲的生物活性進行研究，為混劑的開發(fā)及田間防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

1.8%阿維菌素EC，山東鄒平農(nóng)藥有限公司；200 g/L丁硫克百威EC，陜西省西安西諾農(nóng)化有限責任公司；40%滅線磷EC，山東省淄博市周村穗豐農(nóng)藥化工有限公司；40%辛硫磷EC，山東埃森化學有限公司；藏紅T，國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 試驗對象

南方根結(jié)線蟲（Meloidogyne incognita），2齡幼蟲，沈陽中化農(nóng)藥化工研發(fā)有限公司農(nóng)藥基地試驗田番茄根結(jié)中分離得到，在溫室及試驗田中培育和繁殖。

1.3 試驗方法

1.3.1 藥劑配制

將1.8%阿維菌素EC配成1 000 mg/L母液，再用清水稀釋成5個質(zhì)量濃度梯度50，25，12.5，6.25，3.125 mg/L；同樣方法，將200 g/L丁硫克百威EC用水稀釋為600，300，150，75，37.5 mg/L；將40%辛硫磷EC稀釋成200，100，50，25，12.5 mg/L；將40%滅線磷EC稀釋成100，50，25，12.5，6.25 mg/L。

1.3.2 根結(jié)線蟲懸浮液的制備

制作孵化池，取2個直徑5 cm的塑料培養(yǎng)皿，將底部去掉，中間夾1張100目的紗網(wǎng)，上下粘牢，放入直徑9 cm的培養(yǎng)皿中待用。

孵化池中加入清水，直至剛好沒過紗網(wǎng)。取經(jīng)根結(jié)線蟲侵染并生長成熟的番茄根部，用清水洗凈，在顯微鏡下用鑷子挑取卵囊，放于紗網(wǎng)上，每個紗網(wǎng)放100個卵囊。線蟲孵化后進入清水中，形成線蟲懸浮液，每2 d收集1次線蟲懸浮液。

1.3.3 線蟲染色

稱取0.5 g藏紅T染料，用100 mL蒸餾水配成0.5%染色液［4］。

將線蟲懸浮液加熱直至線蟲全部死亡，取1 mL線蟲懸浮液加入到24孔板中，自然沉淀后，將上清液廢棄，并加入同體積染色液，分別于10，20，30 min、1 h和2 h后，用清水清洗線蟲，記錄各處理染色率。未經(jīng)加熱處理的線蟲懸浮液為對照。

1.3.4 試驗及統(tǒng)計方法

1.8%阿維菌素EC、200 g/L丁硫克百威EC、40%辛硫磷EC和40%滅線磷EC分別設(shè)計5個濃度梯度，設(shè)清水空白對照。每個處理重復3次。取1 mL藥液，分別加入等體積的線蟲懸浮液，空白對照加入等量清水。處理72 h后染色，調(diào)查死亡率和校正死亡率。

根據(jù)死亡率及處理質(zhì)量濃度進行線性回歸，得到毒力回歸方程。并依此計算LC50、LC90值。

2 結(jié)果與分析

2.1 染色時間分析

隨著染色時間的延長，染色率逐漸增高。染色30 min后，染色率接近100%，而染色1 h后，處理后死亡的線蟲全部染色（如圖1）。

圖1 藏紅T對南方根結(jié)線蟲的染色時間

染色后的線蟲呈較深的紫紅色（如圖2），而未經(jīng)加熱的線蟲蟲體沒有被染色，依然呈白色透明狀。

圖2 藏紅T對南方根結(jié)線蟲染色效果

2.2 不同藥劑對南方根結(jié)線蟲的毒力測定

各藥劑對南方根結(jié)線蟲的毒力測定結(jié)果見表1。由表1可知，4種供試藥劑對南方根結(jié)線蟲2齡幼蟲的毒力大小依次為：1.8%阿維菌素EC、40%滅線磷EC、40%辛硫磷EC、200 g/L丁硫克百威EC。阿維菌素和滅線磷對根結(jié)線蟲的活性較高，LC50值分別為14.926 3 mg/L和15.306 8 mg/L；辛硫磷LC50值為34.207 1 mg/L；而丁硫克百威的活性最低，LC50值為75.478 4 mg/L。

表1 不同藥劑對南方根結(jié)線蟲的毒力

3 討論

室內(nèi)染色試驗中，經(jīng)藏紅T染色處理過的蟲體，染色效果理想，染色時間以1 h為宜。試驗中各參試藥劑均對南方根結(jié)線蟲表現(xiàn)出一定的活性，其中1.8%阿維菌素EC、40%滅線磷EC對南方根結(jié)線蟲均表現(xiàn)出較好的室內(nèi)活性。200 g/L丁硫克百威EC和40%辛硫磷EC表現(xiàn)較差。

目前市場上防治根結(jié)線蟲的藥劑主要有有機磷類和阿維菌素，已登記用于防治根結(jié)線蟲的藥劑也較少，并伴有亂用藥的情況。由于開發(fā)新殺線蟲劑具有成本高，周期長等缺點，因此開發(fā)混劑是當下需解決的問題。本實驗為室內(nèi)試驗結(jié)果，可為復配制劑的研究提供理論參考，如要得到準確結(jié)果，需進一步進行田間試驗。

［1］劉維志.植物病原線蟲學［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2000，281-304.

［2］趙鴻，彭德良，朱建蘭.根結(jié)線蟲的研究現(xiàn)狀［J］.植物保護，2003，29（6）：6-9.

［3］朱衛(wèi)剛，胡偉群，陳定花.阿維菌素對南方根結(jié)線蟲的生物活性［J］.現(xiàn)代農(nóng)藥，2008，7（4）：38-39.

［4］萬樹青.殺線蟲劑活性測定中線蟲死活鑒別的染色方法［J］.農(nóng)藥，1993（3）：37.

Biological Activity of Four Nematicides on Meloidogyne incognita

ZHANG Jun-long，LUO Yan-mei
（State Key Laboratory of the Discovery and Development of Novel Pesticide，Shenyang Sinochem Agrochemicals Research and Development Co.，Ltd.，Shenyang 110021，China）

Laboratory experiment was conducted with four selected nematicides for Meloidogyne incognita，the dying time and toxic activity were determined by Safranine-T staining method. The results showed that the staining rate of Safranine-T reached 100%. Abamectin 1.8%EC and ethoprophos 40%EC had higher biological activities on Meloidogyne incognita，with LC50values of 14.926 3 mg/L and 15.306 8 mg/L. Phoxim 40%EC and carbosulfan 200 g/L EC had less activities on Meloidogyne incognita.

nematicide；Meloidogyne incognita；stain；biological activity；abamectin

TQ 450.2+1

A

10.3969/j.issn.1671-5284.2016.02.012

2015-11-04；

2016-02-17

張俊龍（1987—），男，沈陽市人，助理工程師，主要從事殺蟲劑創(chuàng)制與開發(fā)及應用研究工作。Tel：024-62353364；E-mail：zhangjunlong@sinochem.com

顧林玲）

◆農(nóng)藥應用◆