張俊龍，羅艷梅

（沈陽(yáng)中化農(nóng)藥化工研發(fā)有限公司，新農(nóng)藥創(chuàng)制與開(kāi)發(fā)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，沈陽(yáng) 110021）

4種殺線蟲(chóng)劑對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的室內(nèi)活性測(cè)定

張俊龍，羅艷梅

（沈陽(yáng)中化農(nóng)藥化工研發(fā)有限公司，新農(nóng)藥創(chuàng)制與開(kāi)發(fā)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，沈陽(yáng) 110021）

通過(guò)藏紅T染色法，確定線蟲(chóng)染色時(shí)間，并測(cè)定4種常規(guī)藥劑對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的室內(nèi)活性。結(jié)果顯示，染色1 h后，線蟲(chóng)的染色率達(dá)到100%。1.8%阿維菌素EC和40%滅線磷EC對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)具有良好的活性，LC50值分別為14.926 3 mg/L和15.306 8 mg/L；40%辛硫磷EC和200 g/L丁硫克百威EC活性較差。

殺線蟲(chóng)劑；根結(jié)線蟲(chóng)；染色；室內(nèi)活性；阿維菌素

根結(jié)線蟲(chóng)是一類非常重要的植物病原線蟲(chóng)，廣泛分布于世界各地，在我國(guó)尤為嚴(yán)重［1］。其主要危害番茄、茄子、芹菜、菜豆、黃瓜、苦瓜、菠菜等［2］。隨著種植業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，蔬菜保護(hù)地栽培面積迅速擴(kuò)大，根結(jié)線蟲(chóng)病的發(fā)生逐年加重，產(chǎn)量損失在30%～50%之間，嚴(yán)重的高達(dá)75%，甚至造成絕產(chǎn)［3］。線蟲(chóng)侵染到土壤中，可以在土壤和寄主中快速繁殖并生存，一旦侵染便難以控制，已然成為危害保護(hù)地作物最為重要的有害生物之一。

現(xiàn)階段生產(chǎn)中防治根結(jié)線蟲(chóng)的主要手段是化學(xué)防治，用于防治根結(jié)線蟲(chóng)的化學(xué)藥劑多為毒性高、殘留期長(zhǎng)、用量大、成本高的品種，不僅對(duì)人和其他非靶標(biāo)生物造成傷害，而且效果也不理想［4］。本文采用染色法，擬對(duì)阿維菌素、滅線磷、辛硫磷和丁硫克百威防治南方根結(jié)線蟲(chóng)的生物活性進(jìn)行研究，為混劑的開(kāi)發(fā)及田間防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

1.8%阿維菌素EC，山東鄒平農(nóng)藥有限公司；200 g/L丁硫克百威EC，陜西省西安西諾農(nóng)化有限責(zé)任公司；40%滅線磷EC，山東省淄博市周村穗豐農(nóng)藥化工有限公司；40%辛硫磷EC，山東埃森化學(xué)有限公司；藏紅T，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 試驗(yàn)對(duì)象

南方根結(jié)線蟲(chóng)（Meloidogyne incognita），2齡幼蟲(chóng)，沈陽(yáng)中化農(nóng)藥化工研發(fā)有限公司農(nóng)藥基地試驗(yàn)田番茄根結(jié)中分離得到，在溫室及試驗(yàn)田中培育和繁殖。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 藥劑配制

將1.8%阿維菌素EC配成1 000 mg/L母液，再用清水稀釋成5個(gè)質(zhì)量濃度梯度50，25，12.5，6.25，3.125 mg/L；同樣方法，將200 g/L丁硫克百威EC用水稀釋為600，300，150，75，37.5 mg/L；將40%辛硫磷EC稀釋成200，100，50，25，12.5 mg/L；將40%滅線磷EC稀釋成100，50，25，12.5，6.25 mg/L。

1.3.2 根結(jié)線蟲(chóng)懸浮液的制備

制作孵化池，取2個(gè)直徑5 cm的塑料培養(yǎng)皿，將底部去掉，中間夾1張100目的紗網(wǎng)，上下粘牢，放入直徑9 cm的培養(yǎng)皿中待用。

孵化池中加入清水，直至剛好沒(méi)過(guò)紗網(wǎng)。取經(jīng)根結(jié)線蟲(chóng)侵染并生長(zhǎng)成熟的番茄根部，用清水洗凈，在顯微鏡下用鑷子挑取卵囊，放于紗網(wǎng)上，每個(gè)紗網(wǎng)放100個(gè)卵囊。線蟲(chóng)孵化后進(jìn)入清水中，形成線蟲(chóng)懸浮液，每2 d收集1次線蟲(chóng)懸浮液。

1.3.3 線蟲(chóng)染色

稱取0.5 g藏紅T染料，用100 mL蒸餾水配成0.5%染色液［4］。

將線蟲(chóng)懸浮液加熱直至線蟲(chóng)全部死亡，取1 mL線蟲(chóng)懸浮液加入到24孔板中，自然沉淀后，將上清液廢棄，并加入同體積染色液，分別于10，20，30 min、1 h和2 h后，用清水清洗線蟲(chóng)，記錄各處理染色率。未經(jīng)加熱處理的線蟲(chóng)懸浮液為對(duì)照。

1.3.4 試驗(yàn)及統(tǒng)計(jì)方法

1.8%阿維菌素EC、200 g/L丁硫克百威EC、40%辛硫磷EC和40%滅線磷EC分別設(shè)計(jì)5個(gè)濃度梯度，設(shè)清水空白對(duì)照。每個(gè)處理重復(fù)3次。取1 mL藥液，分別加入等體積的線蟲(chóng)懸浮液，空白對(duì)照加入等量清水。處理72 h后染色，調(diào)查死亡率和校正死亡率。

根據(jù)死亡率及處理質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，得到毒力回歸方程。并依此計(jì)算LC50、LC90值。

2 結(jié)果與分析

2.1 染色時(shí)間分析

隨著染色時(shí)間的延長(zhǎng)，染色率逐漸增高。染色30 min后，染色率接近100%，而染色1 h后，處理后死亡的線蟲(chóng)全部染色（如圖1）。

圖1 藏紅T對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的染色時(shí)間

染色后的線蟲(chóng)呈較深的紫紅色（如圖2），而未經(jīng)加熱的線蟲(chóng)蟲(chóng)體沒(méi)有被染色，依然呈白色透明狀。

圖2 藏紅T對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)染色效果

2.2 不同藥劑對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的毒力測(cè)定

各藥劑對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的毒力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，4種供試藥劑對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)2齡幼蟲(chóng)的毒力大小依次為：1.8%阿維菌素EC、40%滅線磷EC、40%辛硫磷EC、200 g/L丁硫克百威EC。阿維菌素和滅線磷對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)的活性較高，LC50值分別為14.926 3 mg/L和15.306 8 mg/L；辛硫磷LC50值為34.207 1 mg/L；而丁硫克百威的活性最低，LC50值為75.478 4 mg/L。

表1 不同藥劑對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的毒力

3 討論

室內(nèi)染色試驗(yàn)中，經(jīng)藏紅T染色處理過(guò)的蟲(chóng)體，染色效果理想，染色時(shí)間以1 h為宜。試驗(yàn)中各參試藥劑均對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)表現(xiàn)出一定的活性，其中1.8%阿維菌素EC、40%滅線磷EC對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)均表現(xiàn)出較好的室內(nèi)活性。200 g/L丁硫克百威EC和40%辛硫磷EC表現(xiàn)較差。

目前市場(chǎng)上防治根結(jié)線蟲(chóng)的藥劑主要有有機(jī)磷類和阿維菌素，已登記用于防治根結(jié)線蟲(chóng)的藥劑也較少，并伴有亂用藥的情況。由于開(kāi)發(fā)新殺線蟲(chóng)劑具有成本高，周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)，因此開(kāi)發(fā)混劑是當(dāng)下需解決的問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)為室內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果，可為復(fù)配制劑的研究提供理論參考，如要得到準(zhǔn)確結(jié)果，需進(jìn)一步進(jìn)行田間試驗(yàn)。

［1］劉維志.植物病原線蟲(chóng)學(xué)［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2000，281-304.

［2］趙鴻，彭德良，朱建蘭.根結(jié)線蟲(chóng)的研究現(xiàn)狀［J］.植物保護(hù)，2003，29（6）：6-9.

［3］朱衛(wèi)剛，胡偉群，陳定花.阿維菌素對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的生物活性［J］.現(xiàn)代農(nóng)藥，2008，7（4）：38-39.

［4］萬(wàn)樹(shù)青.殺線蟲(chóng)劑活性測(cè)定中線蟲(chóng)死活鑒別的染色方法［J］.農(nóng)藥，1993（3）：37.

Biological Activity of Four Nematicides on Meloidogyne incognita

ZHANG Jun-long，LUO Yan-mei
（State Key Laboratory of the Discovery and Development of Novel Pesticide，Shenyang Sinochem Agrochemicals Research and Development Co.，Ltd.，Shenyang 110021，China）

Laboratory experiment was conducted with four selected nematicides for Meloidogyne incognita，the dying time and toxic activity were determined by Safranine-T staining method. The results showed that the staining rate of Safranine-T reached 100%. Abamectin 1.8%EC and ethoprophos 40%EC had higher biological activities on Meloidogyne incognita，with LC50values of 14.926 3 mg/L and 15.306 8 mg/L. Phoxim 40%EC and carbosulfan 200 g/L EC had less activities on Meloidogyne incognita.

nematicide；Meloidogyne incognita；stain；biological activity；abamectin

TQ 450.2+1

A

10.3969/j.issn.1671-5284.2016.02.012

2015-11-04；

2016-02-17

張俊龍（1987—），男，沈陽(yáng)市人，助理工程師，主要從事殺蟲(chóng)劑創(chuàng)制與開(kāi)發(fā)及應(yīng)用研究工作。Tel：024-62353364；E-mail：zhangjunlong@sinochem.com

顧林玲）

◆農(nóng)藥應(yīng)用◆