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        大腸埃希氏菌O157∶H7三種標(biāo)準(zhǔn)中的檢測(cè)方法比較

        2016-12-19 10:21:08陳雨欣蘇粉良臧海竹
        農(nóng)產(chǎn)品加工 2016年21期
        關(guān)鍵詞:增菌埃希氏山梨醇

        周 雯,陳雨欣,蘇粉良,臧海竹,周 斐,朱 榮

        (蘇州出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫綜合技術(shù)中心,蘇州世標(biāo)檢測(cè)技術(shù)有限公司,江蘇蘇州 215104)

        大腸埃希氏菌O157∶H7三種標(biāo)準(zhǔn)中的檢測(cè)方法比較

        周 雯,陳雨欣,蘇粉良,臧海竹,周 斐,朱 榮

        (蘇州出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫綜合技術(shù)中心,蘇州世標(biāo)檢測(cè)技術(shù)有限公司,江蘇蘇州 215104)

        在進(jìn)行大腸埃希氏菌O157∶H7擴(kuò)項(xiàng)過程中,對(duì)國內(nèi)常用3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)中的常規(guī)培養(yǎng)法進(jìn)行比較分析。結(jié)果表明,不同溫度培養(yǎng)的增菌肉湯均渾濁生長(zhǎng)。大腸埃希氏菌O157∶H7顯色培養(yǎng)基選擇性較好,建議在日常檢測(cè)工作中使用大腸埃希氏菌O157∶H7顯色培養(yǎng)基,以提高區(qū)分度及檢出率。同時(shí),應(yīng)用VITEK 2可以快速簡(jiǎn)便地鑒別目標(biāo)菌。

        大腸埃希氏菌O157∶H7;選擇性培養(yǎng);VITEK 2

        0 引言

        微生物引起的食源性疾病是全世界的首要食品安全問題[1]。其中,腸出血性大腸埃希氏菌O157∶H7(大腸埃希氏菌O157∶H7、大腸桿菌O157∶H7)是近年來新發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重危害人類健康的一種食源性致病菌[2],能夠感染豬肉、禽肉、牛肉、牛奶、果汁、蔬菜和飲用水[3],最低10個(gè)活菌的感染就可能致病[4]。輕度感染者會(huì)出現(xiàn)短暫腹瀉、惡心、嘔吐等癥狀;重度感染會(huì)導(dǎo)致劇烈腹痛、出血性結(jié)腸炎、溶血性貧血、血小板減少性紫癜和溶血性尿毒綜合癥,甚至死亡[5]。筆者在新增擴(kuò)項(xiàng)過程中,根據(jù)國內(nèi)常用的3種標(biāo)準(zhǔn),對(duì)大腸埃希氏菌O157∶H7進(jìn)行增菌,選擇性分離鑒定,并對(duì)過程進(jìn)行比較分析,以期為實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)該目標(biāo)菌提供依據(jù)。

        1 材料和方法

        1.1 材料

        1.1.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株

        大腸埃希氏菌O157∶H7 ATCC 43888,大腸埃希氏菌ATCC 25922,上海寶錄生物科技有限公司提供。

        1.1.2 培養(yǎng)基

        改良EC肉湯、山梨醇麥康凱(SMAC)瓊脂、改良山梨醇麥康凱(CT-SMAC)瓊脂、科瑪嘉大腸埃希氏菌O157∶H7顯色瓊脂平板、營養(yǎng)肉湯、營養(yǎng)瓊脂(NA),北京陸橋技術(shù)股份有限公司提供;添加鼠李糖的山梨醇麥康凱(CR-SMAC)瓊脂。

        1.1.3 儀器和設(shè)備

        生化培養(yǎng)箱,上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司產(chǎn)品;手提紫外檢測(cè)燈,上海寶山顧村電光儀器廠產(chǎn)品;VITEK 2型全自動(dòng)微生物鑒定儀,法國生物梅里埃公司產(chǎn)品。

        1.2 試驗(yàn)方法

        GB/T 4789.36—2008食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn),大腸埃希氏菌O157∶H7/NM檢驗(yàn)[6],SN/T 0973—2010進(jìn)出口肉、肉制品及其他食品中腸出血性大腸桿菌O157∶H7檢驗(yàn)方法[7],SB/T 10462—2008肉與肉制品中腸出血性大腸桿菌O157∶H7檢驗(yàn)方法[8]。

        不同標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)流程見表1。

        表1 不同標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)流程

        2 結(jié)果與分析

        2.1 試驗(yàn)結(jié)果

        2.1.1 增菌結(jié)果

        增菌結(jié)果見表2。

        2.1.2 菌落形態(tài)

        2 種菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)見表3。

        2.1.3 生化試驗(yàn)

        表2增菌結(jié)果

        菌 株 培養(yǎng)溫度θ/℃ 培養(yǎng)時(shí)間t/h 生長(zhǎng)情況大腸埃希氏菌O157∶H7 ATCC43888渾濁生長(zhǎng)渾濁生長(zhǎng)大腸埃希氏菌ATCC25922 36 41 24 24 36 41 24 24渾濁生長(zhǎng)渾濁生長(zhǎng)

        表3 2種菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)

        2 種菌株生化鑒定結(jié)果見表4,菌株的VITEK 2鑒定結(jié)果見表5,菌株血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果見表6。

        表4 2種菌株生化鑒定結(jié)果

        表5 菌株的VITEK 2鑒定結(jié)果

        表6 菌株血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果

        2.2 結(jié)果分析

        2.2.1 培養(yǎng)溫度

        大腸埃希氏菌O157∶H7最適生長(zhǎng)溫度為33~42℃。在擴(kuò)項(xiàng)試驗(yàn)中,增菌液培養(yǎng)時(shí)間均為24 h,在36℃和41℃,增菌肉湯均渾濁生長(zhǎng)。

        2.2.2 SMAC瓊脂平板

        典型的大腸埃希氏菌O157∶H7不發(fā)酵山梨醇和鼠李糖,但有個(gè)別變異株可發(fā)酵山梨醇。比較GB/T 4789.36—2008和SN/T 0973—2010可以發(fā)現(xiàn),SMAC和CT-SMAC有效成分一致。大腸埃希氏菌O157∶H7 ATCC 43888在SMAC瓊脂平板上為扁平透明,圓形光滑,中心呈淡褐色;大腸埃希氏菌ATCC 25922在SMAC瓊脂平板上為粉紅色,有膽鹽沉淀環(huán),但SMAC培養(yǎng)基不能區(qū)分不發(fā)酵山梨醇的大腸埃希氏菌;在SMAC基礎(chǔ)上添加鼠李糖制成的CR-SMAC可區(qū)分不發(fā)酵山梨醇,但發(fā)酵鼠李糖的大腸埃希氏菌,同時(shí)可抑制變形桿菌的生長(zhǎng),提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性[2]。建議在日常檢測(cè)工作中,把CRSMAC作為輔助培養(yǎng)基,減少變形桿菌的干擾,更好地區(qū)分大腸埃希氏菌。

        2.2.3 科瑪嘉顯色培養(yǎng)基

        大腸埃希氏菌O157∶H7 ATCC 43888在科瑪嘉顯色培養(yǎng)基上呈粉紫色,邊緣無色;大腸埃希氏菌ATCC 25922呈藍(lán)綠色菌落,有暈圈。科瑪嘉顯色培養(yǎng)基有良好的特異性,可以有效區(qū)分上述2種菌株。所以,在實(shí)際檢測(cè)過程中,以SB/T 10462—2008為檢測(cè)依據(jù),也可以借助科瑪嘉顯色培養(yǎng)基,提高檢測(cè)效率。

        2.2.4 生化鑒定

        典型的大腸埃希氏菌O157∶H7不分解MUG,從而不產(chǎn)熒光??梢韵葘⒌湫突蚩梢删浣臃NMUG-LST培養(yǎng)基,不產(chǎn)熒光者繼續(xù)純化用于后續(xù)生化鑒定,產(chǎn)熒光者直接排除,建議使用GB/T 4789.36—2008檢測(cè)大腸埃希氏菌O157∶H7,先接種MUG-LST培養(yǎng)基,篩選之后如有必要再接種TSI,也可以節(jié)約檢測(cè)成本、減少工作量。GB/T 4789.36—2008和SN/T 0973—2010均可通過VITEK 2型全自動(dòng)微生物生化鑒定儀,快速、簡(jiǎn)便鑒定菌株,結(jié)果見表6。血清凝集試驗(yàn)中大腸埃希氏菌O157∶H7的O157血清和H7血清均凝集,大腸埃希氏菌ATCC 25922均不凝集,但也有某些抗原可能和大腸埃希氏菌O157∶H7具有相同或相似表位,可能發(fā)生凝集反應(yīng)[2],所以血清學(xué)試驗(yàn)可以作為篩選后的進(jìn)一步驗(yàn)證,不能作為單一的檢測(cè)方法。

        3 結(jié)論

        在日常檢測(cè)工作中,不同溫度培養(yǎng)的增菌肉湯均渾濁生長(zhǎng)。大腸埃希氏菌O157∶H7顯色培養(yǎng)基有較好的選擇性,可有效排除非目標(biāo)菌,提高檢測(cè)效率。有條件的實(shí)驗(yàn)室,可以通過VITEK 2型全自動(dòng)微生物生化鑒定儀快速、簡(jiǎn)便的檢測(cè)。在日常檢測(cè)過程中應(yīng)設(shè)置陽性及陰性對(duì)照,確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。

        建立靈敏而特異的大腸埃希氏菌O157∶H7檢測(cè)方法用于食品檢驗(yàn)、中毒爆發(fā)調(diào)查、監(jiān)測(cè)與品質(zhì)控制等領(lǐng)域尤為重要[9],建議繼續(xù)擴(kuò)展快速篩選方法,如GB/T 4789.36—2008中的其他方法。大腸埃希氏菌O157∶H7在食品中的污染量一般較低,且大腸埃希氏菌O157∶H7表型的復(fù)雜性及生化變異株的不斷發(fā)現(xiàn)[10],建議同時(shí)采用2種或3種以上方法進(jìn)行檢驗(yàn),如常規(guī)培養(yǎng)方法結(jié)合免疫層析。本實(shí)驗(yàn)室有分子實(shí)驗(yàn)室,可以繼續(xù)擴(kuò)展應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢測(cè)肉、肉制品及其他各類食品中的大腸埃希氏菌O157∶H7,更好地做好檢測(cè)服務(wù)工作。

        [1]陳君石.我國食品安全問題的特點(diǎn)和應(yīng)對(duì)措施 [C]//中國毒理學(xué)會(huì)第五次全國學(xué)術(shù)大會(huì)論文集.貴陽:中國毒理學(xué)會(huì),2009:46-48.

        [2]宋宏新,李宏,邢佩.食品中大腸桿菌O157∶H7的選擇性培養(yǎng)與檢測(cè)方法研究 [J].山西科技大學(xué)學(xué)報(bào),2008,26(2):64-67.

        [3]山珊,賴衛(wèi)華,陳明慧,等.農(nóng)產(chǎn)品中大腸桿菌O157: H7的來源及分布研究進(jìn)展 [J].食品科學(xué),2014,35(1):289-293.

        [4]Ferens W A,Hovde C J.Escherichia coli O157:H7:animal reservoir and sources of human infection[J].Foodborne Pathogens and Disease,2011,8(4):465-487.

        [5]王愛華,趙德東.食品中大腸埃希氏菌O157:H7的檢驗(yàn)分析 [J].中國保健營養(yǎng),2008(2):1 007-1 009.

        [6]中華人民共和國衛(wèi)生部.GB/T 4789.36—2008食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸埃希氏菌O157:H7/NM檢驗(yàn) [S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008.

        [7]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.SN/T 0973—2010進(jìn)出口肉、肉制品及其他食品中腸出血性大腸桿菌O157:H7檢驗(yàn)方法 [S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2011.

        [8]中華人民共和國商務(wù)部.SB/T 10462—2008肉與肉制品中腸出血性大腸桿菌O157:H7檢驗(yàn)方法 [S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008.

        [9]朱啟.大腸桿菌O157的檢測(cè)及生物學(xué)特性研究 [D].杭州:浙江大學(xué),2011.

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        Comparison of Methods of Three Criterions for Detection of Escherichia coli O157:H7

        ZHOU Wen,CHEN Yuxin,SU Fenliang,ZANG Haizhu,ZHOU Fei,ZHU Rong (Suzhou Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau,Suzhou World Standarcl Testing Co.,Ltd.,Suzhou,Jiangsu 215104,China)

        Conventional culture methods of three criterions commonly used in China are compared in the process of extending Escherichia coli O157∶H7.The results show that the enrichment broth of diferent culture temperatures is turbid.Escherichia coli O157∶H7 chromogenic medium is better.Escherichia coli O157∶H7 chromogenic medium in daily work can increase the detection rate is suggested.At the same time,VITEK 2 can be used to identify target bacteria quickly and easily.

        Escherichia coli O157∶H7;selective culture;VITEK 2

        S851.43

        A

        10.16693/j.cnki.1671-9646(X).2016.11.012

        1671-9646(2016)11a-0040-03

        2016-09-09

        周 雯(1987—),女,碩士,研究方向?yàn)槲⑸餀z測(cè)。

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