鄧龍君，甘維熊，曾如奎，張宏偉

( 雅礱江流域水電開發(fā)有限公司，四川 成都 610051 )

雅礱江鱸鯉的人工繁殖、胚胎及卵黃囊仔魚發(fā)育

鄧龍君，甘維熊，曾如奎，張宏偉

( 雅礱江流域水電開發(fā)有限公司，四川 成都 610051 )

采用不同配伍的外源激素對培育成熟的野生鱸鯉進(jìn)行人工催產(chǎn)，并對其胚胎和1-10日齡卵黃囊仔魚的發(fā)育進(jìn)程進(jìn)行詳細(xì)的觀察和描述。注射促黃體素釋放激素類似物A2、地歐酮和絨毛膜促性腺激素的鱸鯉親魚組的催產(chǎn)效果明顯好于注射鯉魚腦垂體和促黃體素釋放激素類似物A2的親魚組，效應(yīng)時(shí)間為58 h，平均受精率和平均孵化率分別為87.33%和90.75%。在水溫(16±2) ℃條件下，鱸鯉胚胎發(fā)育歷時(shí)117.83 h，所需積溫為1855.33 ℃·h，出膜10 d后仔魚開始平游。鱸鯉胚胎發(fā)育分為受精卵、卵裂期、囊胚期、原腸胚期、神經(jīng)胚期、器官形成期和出膜期7個(gè)階段，共26個(gè)時(shí)期。分析發(fā)現(xiàn)，在人工催產(chǎn)配伍激素中添加適量的絨毛膜促性腺激素，有助于鱸鯉親本順利排卵；鱸鯉卵黃囊仔魚在孵化出膜后的前5 d處于內(nèi)營養(yǎng)階段，第6 d起轉(zhuǎn)入混合營養(yǎng)階段，為仔魚培育的第一危險(xiǎn)時(shí)期。

鱸鯉；人工繁殖；胚胎發(fā)育；卵黃囊仔魚發(fā)育

鱸鯉(Percocyprispingi)主要分布于岷江、青衣江、雅礱江、金沙江和烏江等水系[1]，是四川省、重慶市重點(diǎn)保護(hù)魚類之一。鱸鯉也是長江上游特有的兇猛肉食性魚類，具有較高的生態(tài)價(jià)值及經(jīng)濟(jì)價(jià)值。隨著西南水利水電工程的發(fā)展，鱸鯉成為大渡河、雅礱江、金沙江上多個(gè)梯級水電站的增殖放流保護(hù)魚類之一，其發(fā)展前景良好。國內(nèi)學(xué)者對其開展了一系列研究[2-14]，然而卻未見詳細(xì)描述野生鱸鯉的馴化繁育、胚胎及卵黃囊仔魚發(fā)育完整進(jìn)程的報(bào)道。筆者對在流水池培育成熟的野生鱸鯉進(jìn)行人工催產(chǎn)、胚胎及1-10日齡卵黃囊仔魚的發(fā)育特征進(jìn)行詳細(xì)的觀察和描述，旨在為其增殖放流保護(hù)和產(chǎn)業(yè)規(guī)模化發(fā)展提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 親魚收集與馴化

2012年11月，錦屏一級水電站下閘蓄水期間通過網(wǎng)捕收集雅礱江錦屏段的野生鱸鯉成魚，運(yùn)回錦屏·官地水電站魚類增殖放流站專池暫養(yǎng)，調(diào)節(jié)水溫后浸泡消毒，按體質(zhì)量的10%投喂全長5～10 cm的鮮活鯉魚(Cyprinuscarpio)、鯽魚(Carassiusauratus)，定期觀察并重復(fù)消毒處理。暫養(yǎng)適應(yīng)人工養(yǎng)殖條件后，轉(zhuǎn)入仿生態(tài)環(huán)道式親魚池中流水養(yǎng)殖，繼續(xù)投喂鮮活餌料魚，定期補(bǔ)充。2015年3-4月，發(fā)現(xiàn)鱸鯉雌雄親魚性腺發(fā)育良好，可進(jìn)行人工催產(chǎn)，雌魚體質(zhì)量2～4 kg，雄魚體質(zhì)量1.5～3 kg。

1.2 親魚催產(chǎn)、人工授精與孵化

鱸鯉親魚分為兩組，第一組注射鯉魚腦垂體(3 mg/kg)和促黃體素釋放激素類似物A2(12 μg/kg)，第二組注射促黃體素釋放激素類似物A2(16 μg/kg)、地歐酮(7 mg/kg)和絨毛膜促性腺激素(1400 IU/kg)。雌魚采取胸鰭基部一次性注射，注射后放入相同大小的不同催產(chǎn)池中流水刺激促產(chǎn)。雄魚發(fā)育良好，不注射。采用干法人工授精，受精卵置于尤先科孵化器中孵化。養(yǎng)殖用水通過循環(huán)水處理系統(tǒng)進(jìn)行處理，并經(jīng)恒溫控制系統(tǒng)調(diào)節(jié)，水溫始終為(16±2) ℃。

1.3 胚胎發(fā)育和1-10日齡卵黃囊仔魚發(fā)育的觀察

利用顯微鏡、Olympus SZ61解剖鏡對胚胎發(fā)育和1-10日齡卵黃囊仔魚的發(fā)育過程進(jìn)行連續(xù)活體觀察，每次隨機(jī)取受精卵50粒以上、仔魚10尾以上，用Sony數(shù)碼相機(jī)、Olympus拍照系統(tǒng)拍攝記錄各階段的形態(tài)特征及發(fā)育時(shí)間，發(fā)育時(shí)間以50%以上進(jìn)入該發(fā)育階段為準(zhǔn)。早期的受精卵每隔30 min取樣一次，1 d后每隔1 h取樣一次。受精卵卵徑和仔魚全長均使用數(shù)顯游標(biāo)卡尺測量，獲得的照片使用Adobe Photoshop CS4軟件處理。

2 結(jié) 果

2.1 馴化培育與繁殖孵化

野生鱸鯉經(jīng)馴化后可適應(yīng)人工養(yǎng)殖條件并可正常進(jìn)入繁殖期。繁殖期鱸鯉雌雄親魚性征區(qū)別不明顯，主要以泄殖孔的形態(tài)特征區(qū)分。成熟雌魚泄殖孔稍大、紅潤突出，腹部膨大而柔軟，輕壓泄殖孔前部有卵粒流出；成熟雄魚無明顯性征，未見珠星，個(gè)別個(gè)體手感微微粗糙，輕壓腹部有白色精液流出且入水即散。

鱸鯉人工繁殖情況見表1。第二組6尾鱸鯉雌魚一次性全產(chǎn)，而第一組4尾鱸鯉雌魚中2尾一次性全產(chǎn)，另2尾則斷斷續(xù)續(xù)產(chǎn)卵，且效應(yīng)時(shí)間均較第二組的58 h長18 h以上。為減少人工擠卵對鱸鯉雌魚的損傷，對非一次產(chǎn)卵的雌魚擠卵2次后轉(zhuǎn)入產(chǎn)后護(hù)理池護(hù)理。

2.2 胚胎發(fā)育觀察

鱸鯉的卵為沉性卵，外觀呈圓球形，淺黃色，顏色較同一江段生活的短須裂腹魚(Schizothoraxwangchiachii)卵的金黃色淺，卵黃豐富，微黏性，卵徑2.09～2.30 mm，平均卵徑2.20 mm。受精后卵膜開始吸水膨脹，卵徑2.92～3.37 mm，平均卵徑3.19 mm。在水溫(16±2) ℃下，鱸鯉胚胎發(fā)育從受精卵到出膜歷時(shí)117.83 h，所需積溫為1855.33 ℃·h。

根據(jù)鱸鯉胚胎發(fā)育的各階段變化和特征，分為受精卵、卵裂、囊胚、原腸胚、神經(jīng)胚、器官形成和出膜7個(gè)階段，共26個(gè)時(shí)期，每個(gè)發(fā)育時(shí)期的特征和所需時(shí)間見表2。

表1 不同配伍激素誘導(dǎo)鱸鯉產(chǎn)卵的效果

表2 鱸鯉胚胎發(fā)育進(jìn)程

2.3 1-10日齡卵黃囊仔魚的發(fā)育

1-10日齡卵黃囊仔魚各日齡的發(fā)育特征見表3。

表3 1-10日齡卵黃囊仔魚的發(fā)育進(jìn)程

圖1 鱸鯉胚胎發(fā)育注：a.受精卵；b.胚盤隆起；c.2細(xì)胞期；d.4細(xì)胞期；e.8細(xì)胞期；f.16細(xì)胞期；g.32細(xì)胞期；h.64細(xì)胞期；i.多細(xì)胞期；j.囊胚早期；k.囊胚中期；l.囊胚晚期；m.原腸早期；n.原腸中期；o.原腸晚期；p.神經(jīng)胚期；q.胚孔封閉期；r.體節(jié)出現(xiàn)期；s.眼囊出現(xiàn)期；t.聽囊出現(xiàn)期；u.尾芽期；v.肌肉效應(yīng)期；w.耳石出現(xiàn)期；x.心跳期；y.出膜前期；z.正在出膜的仔魚.

3 討 論

3.1 鱸鯉人工繁殖

魚類的生殖行為以生殖內(nèi)分泌機(jī)理調(diào)控為主，但其性腺發(fā)育成熟并要順利產(chǎn)卵尚需適宜的外部環(huán)境條件[15]。本研究通過采取仿生態(tài)專池培育、流水刺激、投喂活魚等措施，充分滿足野生鱸鯉的原有生活習(xí)性需求，繁殖期檢查發(fā)現(xiàn)其性腺發(fā)育良好，同自然環(huán)境中的性腺成熟時(shí)間基本一致。人工催產(chǎn)的原理是通過注射外源激素刺激下丘腦-垂體-性腺軸,以增強(qiáng)促性腺激素釋放激素和促性腺激素持續(xù)對性腺的作用,并抑制促性腺激素釋放抑制因子的作用,以達(dá)到人工繁殖的目的[16]，從而誘導(dǎo)魚類排卵。從催產(chǎn)結(jié)果看，兩組鱸鯉親魚均全部產(chǎn)卵，但注射促黃體素釋放激素類似物A2+地歐酮+絨毛膜促性腺激素(第二組)的催產(chǎn)效果明顯優(yōu)于注射促黃體素釋放激素類似物A2+鯉魚腦垂體(第一組)，雌魚無斷斷續(xù)續(xù)產(chǎn)卵現(xiàn)象，研究結(jié)果表明,在注射催產(chǎn)激素中添加適量的絨毛膜促性腺激素能幫助鱸鯉雌魚順利排卵。分析本研究中兩組催產(chǎn)效果差異顯著的一種可能原因?yàn)?第二組選擇了直接作用于性腺且具有誘導(dǎo)排卵功效的絨毛膜促性腺激素和多巴胺抑制劑地歐酮，且組內(nèi)的促黃體素釋放激素類似物A2作用于垂體并可補(bǔ)償繁殖期低水溫對絨毛膜促性腺激素活性的影響[17]；另一種可能原因?yàn)轺|鯉親魚對鯉魚腦垂體的敏感性不及其他幾種激素。

圖2 1-10日齡鱸鯉卵黃囊仔魚發(fā)育

3.2 鱸鯉受精卵及胚胎發(fā)育

鱸鯉受精卵卵徑較大，比中華倒刺鲃(Spinibarbussinensis)[18]稍大，與白甲魚(Onychostomasima)相近或略大[19]，但比常見的淡水鯉科魚類[20]大得多。卵的大小對鱸鯉早期發(fā)育和成活具有重要的生態(tài)學(xué)意義，大卵在孵化時(shí)有利于度過低溫環(huán)境，豐富的卵黃在仔魚孵化出膜后能延長從內(nèi)源性轉(zhuǎn)向外源性營養(yǎng)的時(shí)間，有利于仔魚建立初次攝食、生長、避敵并提高成活率[21]。適宜的水溫是鱸鯉胚胎良好發(fā)育的重要條件，本研究通過恒溫控制系統(tǒng)穩(wěn)定水溫，以免水溫變化幅度過大對鱸鯉胚胎發(fā)育產(chǎn)生不利影響。相同水溫下，鱸鯉胚胎發(fā)育時(shí)間比同期增殖放流站內(nèi)的短須裂腹魚(Schizothoraxwangchiachii)提前了63.17 h。相比賴見生等[11-12]報(bào)道的鱸鯉胚胎發(fā)育水溫(18±0.5) ℃相對偏低，但孵化出膜時(shí)長卻提前了8.63 h。分析原因可能為循環(huán)水系統(tǒng)中早期裂腹魚受精卵孵化時(shí)所分泌的孵化酶含量較高，導(dǎo)致鱸鯉受精卵孵化出膜提前，具體原因有待進(jìn)一步探明。

3.3 鱸鯉卵黃囊仔魚的生長發(fā)育

鱸鯉初孵仔魚的全長大于中華倒刺鲃[18]和白甲魚[19]，但相比其他研究[8-12]鱸鯉初孵仔魚的全長偏小，究其原因可能與親魚培育有關(guān)。本研究中鱸鯉可見口張合和腸道雛形的時(shí)間分別為出膜后的第5 d、第7 d，晚于中華倒刺鲃的第3 d、第4 d和白甲魚的第3 d、第6 d。鱸鯉仔魚出膜早，但建立初次攝食的時(shí)間晚，這樣其仔魚個(gè)體較大、體質(zhì)強(qiáng)壯，有利于捕食，這也是自然選擇的結(jié)果。研究還發(fā)現(xiàn)，0-10日齡鱸鯉卵黃囊仔魚生長總體呈直線上升趨勢，同何勇鳳等[4]對鱸鯉仔魚(0-60日齡)異速生長模式曲線前段相似。其中0-4日齡卵黃囊仔魚生長迅速，體長每天增加0.49 mm以上，特別是1日齡仔魚較剛孵化出膜時(shí)體長增加了1.04 mm，5日齡后生長勢頭放緩，該過程與卵黃囊吸收程度保持一致。同時(shí)，0-4日齡卵黃囊仔魚的心率逐漸升高，后基本穩(wěn)定。這說明在最初的5 d內(nèi)，內(nèi)源性營養(yǎng)主要用于仔魚快速生長和旺盛的代謝，以后則用于器官的分化和運(yùn)動(dòng)[22]。研究結(jié)果表明，鱸鯉卵黃囊仔魚在出膜后的第6 d起便轉(zhuǎn)入混合營養(yǎng)階段，此階段是鱸鯉仔魚培育的第一危險(xiǎn)時(shí)期，需要適時(shí)投喂開口餌料，否則會造成仔魚大量死亡。

[1] 丁瑞華.四川魚類志[M].成都:四川科學(xué)技術(shù)出版社,1994:319-321.

[2] 劉必生,李正友,李建光,等.鱸鯉馴化養(yǎng)殖技術(shù)初探[J].水產(chǎn)養(yǎng)殖,2013(2):5-7.

[3] 詹會祥,周禮敬,朱永久,等.野生鱸鯉馴化養(yǎng)殖試驗(yàn)[J].河北漁業(yè),2012 (12):22-24.

[4] 何勇鳳,吳興兵,朱永久,等.鱸鯉仔魚的異速生長模式[J].動(dòng)物學(xué)雜志,2013,48(1):8-15.

[5] 韋先超,金燦彪,鄧思紅.鱸鯉養(yǎng)殖技術(shù)的初步研究[G]//中國科學(xué)技術(shù)學(xué)會.提高全民科學(xué)素質(zhì)、建設(shè)創(chuàng)新型國家—2006中國科協(xié)年會論文集.北京:中國科學(xué)技術(shù)協(xié)會,2006：228-232.

[6] 邵加軍,趙瓊英.后背鱸鯉人工繁殖技術(shù)研究[J].中國水產(chǎn),2014(5):66-67.

[7] 劉躍天,吳敬東,李光華,等.后背鱸鯉人工繁殖技術(shù)研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2014(12):263-264.

[8] 申安華,王海龍,符世偉,等.后背鱸鯉胚胎發(fā)育研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2014(11):284-285,288.

[9] 王永明,岳興建.鱸鯉的胚胎發(fā)育[J].四川動(dòng)物,2013,32(4):530-535.

[10] 左翔鵬,李光華,冷云,等.鱸鯉胚胎發(fā)育研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2014(6):272-273,282.

[11] 賴見生,杜軍,何興恒,等.鱸鯉胚胎發(fā)育特征觀察[J].西昌學(xué)院學(xué)報(bào),2013,27(4):9-11,25.

[12] 賴見生,杜軍,趙剛,等.鱸鯉胚胎及胚后發(fā)育[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2014,27(3):1326-1331.

[13] 陳修松,鄧思紅,李雪梅,等.鱸鯉的生物學(xué)特性及養(yǎng)殖技術(shù)[J].河北漁業(yè),2015(2):32-34.

[14] 陳修松,姚玲,鄧思紅,等.鱸鯉繁育與養(yǎng)殖技術(shù)[J].中國水產(chǎn),2015(4):73-75.

[15] 顧志敏,宓國強(qiáng),黃鮮明,等.不同激素配伍和產(chǎn)卵環(huán)境對翹嘴紅鲌產(chǎn)卵效益的影響[J].浙江水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào),2004,23(4):291-294.

[16] 林浩然.激素和人工誘導(dǎo)魚類繁殖[J].生物學(xué)通報(bào),1999,34(8):1-3.

[17] 劉希良,賓石玉,王開卓,等.翹嘴鱖的人工繁殖與胚胎發(fā)育觀察[J].廣西師范大學(xué)學(xué)報(bào),2013,31(2):100-106.

[18] 黃洪貴.中華倒刺鲃胚胎與仔魚發(fā)育的觀察[J].江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2009,31(6):1087-1092.

[19] 李勇,張耀光,謝碧文,等.白甲魚胚胎和胚后發(fā)育的初步觀察[J].西南師范大學(xué)學(xué)報(bào),2006,31(5):142-147.

[20] 王瑞霞.組織學(xué)與胚胎學(xué)[M].北京:高等教育出版社,1993:167-183.

[21] 殷名稱.魚類早期生活史研究與其進(jìn)展[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),1991,15(4):348-358.

[22] 區(qū)又君,李加兒.鯔魚胚胎和卵黃囊期仔魚的發(fā)育與營養(yǎng)研究[J].海洋學(xué)報(bào),1997,19(3):102-110.

ArtificialPropagation,andEmbryonicandYolk-sacLarvalDevelopmentinPercocyprispingiinYalongRiver

DENG Longjun, GAN Weixiong, ZENG Rukui, ZHANG Hongwei

( Yalong River Hydraulic Development Company Ltd., Chengdu 610051, China )

The wildPercocyprispingiwas reared to spawn induced by injection of hormone to obtain fertilized eggs in this study. The results showed that females injected with LHRH-A2+DOM+HCG ovulated more fluently, with the response time of 58 h, mean fertilization rate of 87.33% and mean hatching rate of 90.75%. Furthermore,the embryonic and yolk-sac larval development were described in detail. Under the water temperature of (16±2) ℃, fertilized eggs were hatched in 117.83 hours with the accumulative temperature of 1855.33 ℃·h.The embryonic development was divided into 7 stages including 26 subphases： fertilized egg, cleavage stage, blastula stage, gastrula stage, neurula stage, organogenesis stage and hatching stage. The yolk-sac larva grew rapidly and endogenously by in the first five days after hatching, turned into the stage of mixed nutrition, a critical stage, since the sixth day, and started to swim horizontally ten days later.

Percocyprispingi; artificial propagation; embryonic development; yolk-sac larval development

S965.199

A

1003-1111(2016)04-0393-05

10.16378/j.cnki.1003-1111.2016.04.014

2015-07-22；

2015-12-07.

雅礱江流域水電開發(fā)有限公司項(xiàng)目(JPIA-201226).

鄧龍君(1982-)，男，工程師，碩士；研究方向：魚類增殖放流.E-mail：dlgdeng@126.com.通訊作者：甘維熊(1984-)，男，工程師.研究方向：魚類增殖放流.E-mail：ganweixiong@ylhdc.com.cn.