張江濤，胡 勇，冉建華，孫善全△

(1.遵義醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校人體解剖教研室 563002；2.重慶醫(yī)科大學(xué)神經(jīng)科學(xué)研究所 400016；3.播州區(qū)公安局刑偵大隊(duì) 563100)

?

論著·基礎(chǔ)研究

源于喉上神經(jīng)外支的甲狀腺神經(jīng)對(duì)甲狀腺分泌功能的影響*

張江濤1,2，胡 勇3，冉建華2，孫善全2△

(1.遵義醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校人體解剖教研室 563002；2.重慶醫(yī)科大學(xué)神經(jīng)科學(xué)研究所 400016；3.播州區(qū)公安局刑偵大隊(duì) 563100)

目的 探討源于喉上神經(jīng)外支(ELN)的甲狀腺神經(jīng)對(duì)甲狀腺分泌功能的影響。方法 隨機(jī)將21只中華田園犬，抽取3只作為對(duì)照組，剩余18只按照手術(shù)時(shí)間分組，即術(shù)后第5、7、9天(分別為A、B、C組),每組各6只，再將其分為假手術(shù)組和實(shí)驗(yàn)組兩個(gè)亞組(每亞組各3只)。術(shù)前采集各組動(dòng)物血液樣本，麻醉后將假手術(shù)組的甲狀腺支分離，隨即將傷口縫合；于實(shí)驗(yàn)組，分離并切斷狗的甲狀腺支并縫合。在術(shù)后的第5、7、9天，分別采集各組狗的血液樣本和甲狀腺。檢測(cè)各組血液樣本的促甲狀腺激素(TSH)和甲狀腺素(T4)水平，并將甲狀腺作組織學(xué)切片檢查，然后進(jìn)行各組比較。結(jié)果 正常甲狀腺濾泡由單層立方形上皮或單層扁平形上皮細(xì)胞組成，濾泡內(nèi)存在膠狀質(zhì)。實(shí)驗(yàn)A組可見甲狀腺濾泡大小不等，部分萎縮，腺泡內(nèi)膠狀質(zhì)減少；B組和C組發(fā)現(xiàn)甲狀腺濾泡進(jìn)一步萎縮，排列紊亂，濾泡內(nèi)膠狀質(zhì)也進(jìn)一步減少。同時(shí)實(shí)驗(yàn)A、B、C組生物化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)TSH水平隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，但T4水平卻隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而顯著減少。結(jié)論ELN支配甲狀腺的分支可能通過調(diào)節(jié)甲狀腺血管的舒縮，控制甲狀腺素的分泌。

喉上神經(jīng)外支；甲狀腺；膠狀質(zhì)；促甲狀腺激素；甲狀腺素

喉上神經(jīng)外支(ELN)是喉上神經(jīng)(SLN)的一個(gè)分支，支配環(huán)甲肌、咽下縮肌[1]。然而一系列的研究卻表明，ELN還可能支配甲杓肌、環(huán)甲關(guān)節(jié)、聲門裂以下喉黏膜等結(jié)構(gòu)[2-5]。另外，眾多的研究發(fā)現(xiàn)，ELN除支配上述結(jié)構(gòu)外,還支配甲狀腺，并將源于ELN的支配甲狀腺的神經(jīng)稱之為甲狀腺神經(jīng)[6-10]。迄今為止有關(guān)甲狀腺神經(jīng)對(duì)甲狀腺功能的影響，少見報(bào)道。為此，本課題以中華田園犬為研究對(duì)象，麻醉并切斷實(shí)驗(yàn)犬的甲狀腺神經(jīng)，觀察急性期犬促甲狀腺激素(TSH)和甲狀腺素(T4)的分泌變化，以及不同時(shí)期甲狀腺組織的形態(tài)學(xué)變化，并對(duì)該神經(jīng)在甲狀腺分泌中的作用進(jìn)行研究，以期對(duì)甲狀腺的分泌調(diào)控機(jī)制研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料 21只健康中華田園犬(重慶醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物室提供)，HE切片制作工具1套，Olympus生物顯微鏡1臺(tái)，Siemens公司Advia Centaur XP系統(tǒng)T4、TSH檢測(cè)儀器1套， 標(biāo)記物為吖啶脂，直接化學(xué)發(fā)光法T4 TSH檢測(cè)試劑盒1套。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組 將3只作為對(duì)照組，剩余18只按照手術(shù)時(shí)間分組，即術(shù)后第5、7、9天(分別為A、B、C組),每組各6只，再將其分為假手術(shù)組和實(shí)驗(yàn)組兩個(gè)亞組(每組各3只)。對(duì)所有21只狗均在手術(shù)前、后的食物中喂飼足夠量的碘鹽。

1.2.2 手術(shù)步驟 在不同時(shí)間點(diǎn)上按照1.2 mL/kg體質(zhì)量的劑量注射2.5%巴比妥鈉麻醉動(dòng)物，然后從大隱靜脈抽取血液5 mL，標(biāo)記為d1(1 d)；在嚴(yán)格無菌條件下暴露甲狀腺、喉上神經(jīng)及其分支、頸上神經(jīng)節(jié)和結(jié)狀神經(jīng)節(jié)。于手術(shù)組，仔細(xì)觀察頸交感干和SLN之間存在的交通后，見圖1 。顯露并切斷由ELN發(fā)出的支配甲狀腺上極的分支(甲狀腺支)；于假手術(shù)組，僅作皮膚切口，不作神經(jīng)的離斷。術(shù)后，逐層縫合傷口。在術(shù)后第5、7、9天，分別采集對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組(A、B、C組)動(dòng)物的血液樣本和甲狀腺。

1.2.3 甲狀腺T4和TSH檢測(cè) 用Siemens公司Advia Centaur XP系統(tǒng)T4 TSH檢測(cè)儀器， 應(yīng)用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)T4水平，放射免疫法檢測(cè)TSH水平。

A：ELN分支；B：甲狀腺。

圖1 ELN發(fā)出的支配甲狀腺上極的分支

1.2.4 甲狀腺組織學(xué)觀察 用甲狀腺制作石蠟切片，HE染色，觀察其病理學(xué)變化。

2 結(jié) 果

2.1 3組狗不同的甲狀腺組織學(xué)檢查顯示以下觀察結(jié)果 對(duì)照組和假手術(shù)組甲狀腺濾泡由單層立方上皮或單層扁平上皮細(xì)胞組成，濾泡內(nèi)存在膠狀質(zhì)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組甲狀腺濾泡依次出現(xiàn)大小不等，形態(tài)不規(guī)則，排列紊亂，部分萎縮，腺泡內(nèi)膠狀質(zhì)減少，甚至逐漸消失，見圖2。

A：對(duì)照組;B：假手術(shù)B組；C：實(shí)驗(yàn)B組。

圖2B組甲狀腺神經(jīng)切斷后甲狀腺的組織學(xué)變化(HE，×100)

2.2 3組狗不同時(shí)間的TSH和T4檢測(cè)結(jié)果 第1天所有組的TSH和T4 水平假手術(shù)組與實(shí)驗(yàn)組無明顯變化；但是T4 水平在所有組中均為對(duì)照組高于實(shí)驗(yàn)組；在所有實(shí)驗(yàn)組中隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，其數(shù)值均呈下降趨勢(shì)。TSH水平所有實(shí)驗(yàn)組均高于假手術(shù)組；隨著時(shí)間的延長(zhǎng)所有組中的數(shù)值均逐漸增高，見表1。

表1 3組狗不同時(shí)間的TSH 和T4檢測(cè)結(jié)果比較

*:P<0.05,與對(duì)照組和假手術(shù)組比較。

2.3T4和TSH水平統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 運(yùn)用HSD方法進(jìn)行組間多重比較。甲狀腺神經(jīng)切斷1d后，實(shí)驗(yàn)A組血液中T4水平與其他各組比較，其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；術(shù)后實(shí)驗(yàn)A組與假手術(shù)A組和對(duì)照組比較T4水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而術(shù)后實(shí)驗(yàn)B組、C組與假手術(shù)B、C組和對(duì)照組比較T4水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.400 3、0.033 6)。采用組內(nèi)配對(duì)t檢驗(yàn)，假手術(shù)各組及對(duì)照組之間相比較，其血液中T4水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而在實(shí)驗(yàn)A、B、C組與術(shù)后第1天比較，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-1.72、-1.02、-3.64 ；P=0.047 3、0.022 1、0.010 5)，采用HSD方法組間多重比較。甲狀腺神經(jīng)切斷1d后，實(shí)驗(yàn)A組與其他各組相比較,TSH水平的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而實(shí)驗(yàn)B組和C組和對(duì)照組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P= 0.020 1)；實(shí)驗(yàn)B組和C組和對(duì)照組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.009 3)。采用組內(nèi)配對(duì)t檢驗(yàn)，假手術(shù)A、B、C組TSH水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；實(shí)驗(yàn)A、B、C組血液TSH水平與術(shù)后第1天比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-6.31、-7.42、-7.97，P=0.003 1、0.002 6、0.001 3)。

3 討 論

有關(guān)甲狀腺的神經(jīng)支配，不同的教科書和不同的文獻(xiàn)有著不同的說法。據(jù)格氏解剖學(xué)記載，交感神經(jīng)頸上、中、下神經(jīng)節(jié)支配甲狀腺。Morris人體解剖學(xué)認(rèn)為，促進(jìn)甲狀腺血管收縮和分泌的神經(jīng)來源于交感神經(jīng)頸中、下神經(jīng)節(jié)所發(fā)出的無髓神經(jīng)纖維。1931年Nonidez觀察到,支配甲狀腺的神經(jīng)來源于頸上神經(jīng)節(jié)和ELN的分支，并將其稱之為甲狀腺神經(jīng)，并認(rèn)為其大部分神經(jīng)纖維是交感神經(jīng)纖維。1968年Shornicki等通過對(duì)25只犬和12個(gè)人體標(biāo)本的觀察發(fā)現(xiàn)，ELN均發(fā)出分支支配甲狀腺。1968年Moosam觀察到ELN發(fā)出分支沿甲狀腺上動(dòng)脈的分支，到達(dá)甲狀腺。直到1991年，有研究觀察到：大部分ELN呈袢狀，而并非單干形，并將其稱之為喉上神經(jīng)袢；ELN/ELN袢毫無例外地發(fā)出分支支配甲狀腺，ELN是甲狀腺的神經(jīng)來源之一[9-10]。之后經(jīng)證實(shí)，由ELN/ELN袢發(fā)出的甲狀腺神經(jīng)含交感神經(jīng)節(jié)后纖維[9-11]。然而，迄今為止有關(guān)該神經(jīng)對(duì)甲狀腺分泌功能的影響，少見報(bào)道。研究表明，甲狀腺的分泌受垂體產(chǎn)生的TSH和下丘腦產(chǎn)生的促甲狀腺激素釋放激素(TRH)控制，而交感神經(jīng)支配對(duì)其分泌有何影響，尚未見報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)觀察到，在實(shí)驗(yàn)組， 切斷甲狀腺和ELN分支之間的聯(lián)系后，急性期所有動(dòng)物均出現(xiàn)了與甲狀腺功能減退相一致的病理和生化指標(biāo)的變化，即甲狀腺濾泡萎縮，T4分泌減少。甲狀腺的病理組織學(xué)變化與Shelke等對(duì)水牛甲狀腺的觀察結(jié)果相類似。有研究認(rèn)為，單純性甲狀腺腫的發(fā)生，可能是由于土壤和水中所含碘的濃度過低、懷孕時(shí)需求增加、患者的身體條件及攝取硫脲嘧啶、大豆、甘藍(lán)等可以導(dǎo)致甲狀腺腫的物質(zhì)過多所造成[7]。Maxie等[12]也認(rèn)為，碘量不足是甲狀腺有機(jī)合成下降的主要原因。在本實(shí)驗(yàn)中，動(dòng)物在接受手術(shù)前后均以碘化食物喂養(yǎng)。因此，動(dòng)物不可能由于碘攝入不足，而影響甲狀腺素的合成。因此，在甲狀腺神經(jīng)切斷后，T4分泌減少，其原因是：由于交感神經(jīng)對(duì)甲狀腺素的分泌具有調(diào)控作用，手術(shù)將其切斷后，引起甲狀腺濾泡的萎縮，最終導(dǎo)致甲狀腺素分泌的減少。而甲狀腺素分泌的下降，可反饋性刺激垂體釋放TSH。這就是為什么實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物TSH水平升高的原因。Maxie等[12]認(rèn)為甲狀腺激素的合成減少，會(huì)刺激垂體釋放更多的TSH來增加其產(chǎn)量，這也是導(dǎo)致單純性甲狀腺腫即甲狀腺上皮細(xì)胞增殖、肥大的原因。由于本實(shí)驗(yàn)觀察的時(shí)間有限，所以尚未觀察到實(shí)驗(yàn)組甲狀腺上皮細(xì)胞有否增殖肥大的表現(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，ELN發(fā)出的甲狀腺神經(jīng)對(duì)甲狀腺素的分泌具有調(diào)控作用。課題組前期工作發(fā)現(xiàn)ELN發(fā)出的甲狀腺神經(jīng)含有交感神經(jīng)節(jié)后纖維，而后者可通過調(diào)控甲狀腺血管的收縮狀態(tài)，從而影響甲狀腺的分泌[10-11]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為甲狀腺分泌調(diào)控的機(jī)制研究提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。另一方面，眾所周知，喉上神經(jīng)外支損傷是甲狀腺手術(shù)及頸部其他手術(shù)的嚴(yán)重併發(fā)癥之一。因此，術(shù)中如何保護(hù)該神經(jīng)，國(guó)內(nèi)外基礎(chǔ)及臨床工作者進(jìn)行了大量的研究。本文結(jié)果提示，該神經(jīng)的甲狀腺支切斷后，對(duì)甲狀腺的功能將造成影響。因此，術(shù)中如何保護(hù)該神經(jīng)，以及損傷后如何維持甲狀腺的正常功能是值得深入研究的課題。

[1]KochilasX,BibasA,XenellisJ,etal.Surgicalanatomyoftheexternalbranchofthesuperiorlaryngealnerveanditsclinicalsignificanceinheadandnecksurgery[J].ClinAnat,2008,21(2):99-105.

[2]LangJ,NachbaurS,FischerK,etal.Thesuperiorlaryngealnerveandthesuperiorlaryngealartery:ananatomicalstudy[J].ClinAnat,2002,15(4):271-275.

[3]RomanchishenAF，LevanovichVV，KarpatskiIV.Surgicalanatomyoftheexternalbranchofthesuperiorlaryngealnerve:clinical-anatomicalinvestigation[J].VestnikKhirurgiiImeniGrekova,2008,167(4):67-70.

[4]FurlanJC.Sympatheticfiberoriginofthesuperiorlaryngealnerveanditsbranches:ananatomicalstudy[J].ClinAnat,2002,15(4):271-275.

[5]HwangSB,LeeHY,KimWY,etal.TheanatomyoftheexternalbranchofthesuperiorlaryngealnerveinKoreans[J].AsianJSurg,2013,36(1):13-19.

[6]YalcinB，DeveliS，TubbsRS，etal.Adetailedstudyoftherelationshipbetweentheexternallaryngealnerveandsuperiorthyroidartery,includingitsglandularbranches.[J]ClinAnat,2013,26(7):814-822.

[7]PatnaikU,NilakantanA,ShrivastavaT.Anatomicalvariationsoftheexternalbranchofthesuperiorlaryngealnerveinrelationtotheinferiorconstrictormuscle:cadavericdissectionstudy[J].LaryngolOtol,2012,126(9):907-912.

[8]許士葉，董劍平，孫善全,等．人與狗迷走/交感干的比較解剖及其喉上神經(jīng)外支纖維成分[J]．中國(guó)臨床解剖學(xué)雜志，2012，30(4)：431-434．

[9]HuangHX,SunSQ,RenZH,etal.Superiorlaryngealnerveloop:patternsandsurgicalimplications[J].SurgRadiolAnat,2012,34(10):977-985.

[10]HuangHX,SunSQ,RenZQ,etal.Superiorlaryngealnerveloop:patternsandsurgicalimplications.[J]SurgRadiolAnat，2012，34(10):977-985.

[11]RamnarayanKV,SunSQ,DongJP,etal.Fibercomponentsogtheexternallaryngealnerve.Amorphologicalandhistochemicalanalysis.[J].IndianSciRes,2012,3(1):13-19.

[12]MaxieDV.Jubb,KennedyandPalmer′spathologyofdomesticanimals[M].NewYork，London，AcademicPress:368-396.

Influence of thyroid nerve originated from ELN on thyroid hormone secretion function*

ZhangJiangtao1,2,HuYong3,RanJianhua2,SunShanquan2△

(1.TeachingandResearchingSectionofAnatomy,ZunyiMedicalandPharmaceuticalCollege,Zunyi,Guizhou563002,China;2.InstituteofNeurosciences,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China;3.CriminalInvestigationBrigade,BozhouDistrictPublicSecurityBureau,Zunyi,Guizhou563100,China)

Objective To investigate the influence of the thyroid nerve originated from external laryngeal nerve(ELN) on thyroid hormone secretion function.Methods Three dogs were randomly extracted from 21 Chinese field dogs and the remaining 18 cases were divided into the group A,B and C according to the operation time,i.e.,on postoperative 5,7,9 d,6 cases in each group.Then each group was re-divided into the sham operation subgroup and experimental subgroup.The blood samples were collected before operation.The thyroid nerve branch in the sham operation group was separated after anesthesia and the wound was sutured;whereas the experimental group was performed the thyroid nerve branch separation,cutting off and suture.The blood samples and thyroid in each group were collected on postoperative 5,7,9 d.The levels of thyrotropic hormone(TSH) and T4 were detected.The thyroid was performed the histological section examination.Results The normal thyroid gland follicles consisted of simple cuboidal or simple flattened epithelial cells.The colloid materials existed within the follicles.The group A showed that follicles were unequal in size with partial atrophy and the colloid material in follicles was decreased;the group B and C found that thyroid follicles were further atrophied with arrange in disorder and the colloid material in follicles was further decreased.At the same time,the biochemical detection in the group A,B and C found that the TSH level was increased with time extending,while the T4 level was significantly decreased.Conclusion ELN governing the thyroid nerve branch controls the thyroid hormones secretion possibly by regulating the vasomotion of thyroid artery.

external laryngeal nerve;thyroid gland;gelatinous colloid;thyrotropic hormone;thyroid hormone

10.3969/j.issn.1671-8348.2016.32.007

四川省教委基金項(xiàng)目(川科教1992-51號(hào))；重慶市科委中青年科技專家基金(92-3485)。 作者簡(jiǎn)介：張江濤(1969-)，副教授，本科，主要從事人體解剖學(xué)與組織胚胎學(xué)及法醫(yī)學(xué)研究 ?！?/p>

E-mail:sunsq2151@sohu.com。

R

A

1671-8348(2016)32-4484-03

2016-06-19

2016-08-07)