呼梅，宋英，談靜，林智

·炮制制劑·

黃連與不同藥物配伍對生物堿溶出率的影響

呼梅，宋英，談靜，林智

目的：考察糖郁舒顆粒中黃連與不同藥物配伍對生物堿溶出率的影響。方法：將處方中藥材分別與黃連配伍，每組藥材加水煎煮，用高效液相色譜法測定水煎液中小檗堿、表小檗堿、黃連堿和巴馬汀四種生物堿總含量。結(jié)果：黃連單獨提取所測得四種生物堿總含量最高，其它依次是黃連與陳皮；黃連與茯苓；黃連與酸棗仁；黃連與柏子仁；黃連與石菖蒲；黃連與竹茹；黃連與川芎；黃連與甘草；黃連與枳實；黃連與雞血藤；黃連與首烏藤。結(jié)論：處方中其它藥材均對黃連生物堿溶出率都有一定影響，其中藤本類藥材對生物堿溶出率影響最大。

黃連；生物堿；糖郁舒顆粒

糖郁舒顆粒是四川省中醫(yī)院研發(fā)的院內(nèi)制劑，由黃連、枳實、川芎、首烏藤等十二味藥物組成，具有清熱化痰，開竅安神的功效。用于痰熱上擾的抑郁、焦慮、失眠、眩暈等癥及糖尿病并發(fā)上述癥的治療。黃連為方中君藥，主要含小檗堿、表小檗堿、黃連堿、巴馬丁等多種生物堿[1]。預(yù)實驗中按擬訂工藝路線，制成合劑，藥液澄清度差，放置后易產(chǎn)生沉淀，經(jīng)測定指標(biāo)成分四種生物堿總含量較低，約為28 %?？紤]復(fù)方配伍對黃連有效成分的溶出有影響，將方中藥物拆分成12組分，各組分用高效液相色譜法[2～4]測定小檗堿、表小檗堿、黃連堿和巴馬汀四種生物堿總含量進(jìn)行比較研究，為制訂合理的提取工藝及劑型提供參考。

1 儀器與試藥

美國Agilent1100HPLC色譜儀，惠普化學(xué)工作站，DAD檢測器；電子分析天平（SARTΟRIUS Bp211D）；乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純，水為重蒸餾水；鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢驗，純度：86.8 %，批號：110713-200911）。

2 試驗方法

2.1 色譜條件

色譜柱：依利特Hypersil BDS（4.6 mm×150 mm，5 μm），以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為A∶B（93:7） [A為乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（50:50）（每100 mL中加十二烷基硫酸鈉0.4 g，再以磷酸調(diào)節(jié)PH值為4.0）；B為水]；檢測波長345 nm；柱溫：30 ℃；理論板數(shù)鹽酸小檗堿峰計算應(yīng)不低于5000；進(jìn)樣量：5 μL。

2.2 對照品溶液制備

精密稱定鹽酸小檗堿對照品10.74 mg（純度為86.8 %），置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（0.3729 mg．mL-1）。

2.3 藥材供試液的制備

取黃連飲片粉末（過二號篩）約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇（1:100）的混合溶液50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，微孔濾膜濾過（0.45 μm），取續(xù)濾液，即得。

2.4 供試品溶液的制備

按原處方中各味藥的比例，準(zhǔn)確稱取黃連4.00 g（12份）、陳皮8.96 g、枳實9.00 g、川芎9.02 g、石菖蒲9.00 g、柏子仁9.99 g、酸棗仁12.01 g、甘草3.00 g、竹茹9.01 g、茯苓9.97 g、首烏藤15.03 g、雞血藤15.12 g。其中黃連一份單獨煎煮，余下11份分別與剩余11味飲片配對煎煮，每組藥材煎煮2 次，每次加10倍量水，每次1 小時，濾過，合并濾液，濃縮至100 mL，靜置放冷后，觀察產(chǎn)生沉淀現(xiàn)象，并將各組藥液離心，分別取上清液1 mL于10 mL量瓶中，加鹽酸-甲醇（1:100）溶液至刻度，混勻，微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液為供試品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取鹽酸小檗堿對照品溶液（0.7649 mg．mL-1）0.1 mL置20 mL量瓶中，精密量取1 mL、2 mL、5 mL、10 mL分別置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，精密吸取各對照品溶液5 μl進(jìn)樣，以峰面積（Y）對進(jìn)樣量（X）進(jìn)行回歸，得回歸方程：Y=2165.6X-2.8153，r=1.0000。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿在0.01912 ug～3.825 ug范圍內(nèi)，有良好的線性關(guān)系。鹽酸小檗堿HPLC圖，見圖1。

3 試驗結(jié)果

精密吸取各供試品溶液、鹽酸小檗堿對照品溶液各5 ul，注入高效液相色譜儀，測定，記錄峰面積，采用外標(biāo)一點法，以鹽酸小檗堿對照品的峰面積為對照，計算四種生物堿總含量。黃連飲片的四種生物堿總含量為99.58 mg．g-1，12 份樣品經(jīng)測定，四種生物堿溶出率結(jié)果見表1、圖1。

表1 12份混合溶液沉淀現(xiàn)象和四種生物堿總含量測定結(jié)果(n=3)

4 討論

實驗表明，首烏藤、雞血藤、枳實對黃連生物堿的溶出影響較大，僅為單獨水煎液溶出率的6%～7%，參考相關(guān)文獻(xiàn)[5～6]，推測可能是藤本類、果實中鞣質(zhì)等成分與生物堿反應(yīng)，產(chǎn)生沉淀，影響了黃連生物堿的溶出率。本實驗甘草對黃連生物堿的溶出率影響沒有鞣質(zhì)類藥材影響大，與文獻(xiàn)報道[7]甘草的酸性成分對黃連生物堿的溶出影響較大不符，可能是糖郁舒顆粒中甘草用量小，這與臨床實際應(yīng)用情況吻合。該制劑采用黃連單獨水煎，濃縮浸膏與其它藥材提取浸膏混合制顆粒，成品黃連四種生物堿總量的溶出率為69%，高于混合水煎合劑的28%。

本實驗還用鹽酸-甲醇（1:100）溶液作為溶媒，測定了烏藤、雞血藤、枳實與黃連水煎液中沉淀物的生物堿含量，未測得。有文獻(xiàn)報道[8]葛根芩連湯水煎液沉淀物在人工胃液中鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀的含量與上清液的含量相當(dāng)，沉淀物中藥根堿的含量明顯大于上清液。這可能是黃連與不同物質(zhì)形成的生物堿沉淀復(fù)合物的溶解性和可逆性不同，這需要作進(jìn)一步的研究。

[1]高學(xué)敏主編,中藥學(xué)[M].中國中醫(yī)藥出版社,2007:97-99.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:285～286

[3] 王知青,尹華,許叢輝,等. 高效液相色譜法測定三黃散瘀巴布劑中鹽酸小檗堿的含量[J]. 中華中醫(yī)藥雜志,2011,11:2690-2692.

[4] 鄧六勤,鐘鳴. RP-HPLC法測定黃連上清片中鹽酸小檗堿、鹽酸藥根堿和鹽酸巴馬汀的含量[J]. 中國藥房,2011,16:1514-1516.

[5] 徐嘉,楊銘,嚴(yán)蓓華,等.清胃散君藥黃連分煎合煎對鹽酸小璧堿和黃芬昔含量的影響[J]. 中國臨床藥學(xué)雜志, 2012,21(2):112-114

[6] 梁光義,高言明,賀祝英,等.三黃瀉心湯合煎與分煎樣品中鹽酸小檗堿含量比較研究時珍國醫(yī)國藥[J]. 2011,22(4):86-787

[7] 鄭亞玉,梁光義,鐘正靈,等.當(dāng)歸六黃湯分煎樣品與合煎樣品中阿魏酸、鹽酸小檗堿、黃芩苷含量的比較[J].時珍國醫(yī)國藥. 2010, 21(1) : 16.

[8] 郭友立(導(dǎo)師：譚曉梅).葛根芩連湯沉淀物溶出度及鹽酸小檗堿、葛根素配伍腸吸收變化的研究[D].廣州:南方醫(yī)科大學(xué),2010.

（責(zé)任編輯：傅舒）

Impacts of combination of Huanglian with different herbs on alkaloid dissolution rate

HU Mei, SONG Ying, TAN Jing, LIN Zhi// (Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine , Chengdu 610072, Sichuan)

Objective: To study the impacts of combination of Huanglian with different herbs in Tangyushu Granule on alkaloids dissolution rate. Method: The herb in Tangyushu Granule was combined respectively with Huanglian and decocted. Then the total content of berberine, epiberberine, coptisine and palmatine in decoction was measured with high performance liquid chromatography. Result: The total content of four alkaloids was highest in Huanglian decoction, followed by Huanglian with Chenpi, Huanglian with Fuling, Huanglian with Suanzaoren, Huanglian with Boziren, Huanglian with Shichangpu, Huanglian with Zhuru, Huanglian with Chuanxiong, Huanglian with Gancao, Huanglian with Zhishi, Huanglian with Jixueteng, and Huanglian with Shouwuteng. Conclusion: All the other herbs in the prescription affect the alkaloid dissolution rate of Huanglian. Among them, herbs belong to vine plants exert the most influence.

Huanglian; alkaloid; Tangyushu granule

R283.3

A

1674-926X(2016)04-004-02

四川省科技廳支撐計劃項目（2012SZ0188）

成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 成都 610072

呼梅（1969年12月），女，碩士，研究方向為中藥制劑、臨床藥學(xué)。

Tel:18980660650 Email:humei1222@sina.com

2015-10-13