張 艷 夏 穎 王 琳

(復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院婦科，上海 200040)

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絕經(jīng)期子宮內(nèi)膜息肉組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-9及環(huán)氧化酶-2的表達及其相關(guān)性

張 艷 夏 穎 王 琳

(復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院婦科，上海 200040)

目的 探討絕經(jīng)期子宮內(nèi)膜息肉(EP)組織中基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9及環(huán)氧化酶(COX)-2表達及兩指標(biāo)的相關(guān)性。方法 選取未使用任何激素類藥物治療的絕經(jīng)前、后EP患者、正常子宮內(nèi)膜(對照組)各30例。采用免疫組化法檢測在絕經(jīng)前后EP及正常子宮內(nèi)膜組織中MMP-9及COX-2蛋白的表達，并分析兩指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果 MMP-9、COX-2在絕經(jīng)前EP組織中表達分別為83.33%(25/30)、57.67%(17/30)，均明顯高于對照組的26.67%(8/30)、20.00%(6/30)(χ2=19.461、8.531，P<0.05)；在絕經(jīng)后EP中表達分別為73.33%(22/30)、47.67%(13/30)，均明顯高于對照組的30.00%(9/30)、16.67%(5/30)(χ2=11.279、5.079，P<0.05)；MMP-2與COX-2在絕經(jīng)前后EP組織中呈正相關(guān)(r=0.383，P=0.037)。結(jié)論 MMP-9和COX-2 在絕經(jīng)期EP組織高表達，且呈正相關(guān)，這兩種蛋白酶可能參與絕經(jīng)期EP的形成。

絕經(jīng)期；MMP-9；COX-2；EP

研究表明，多數(shù)子宮內(nèi)膜息肉(EP)患者發(fā)病年齡在40歲以上，絕經(jīng)期發(fā)病率最高〔1～3〕。EP的發(fā)病機制和病因不明確，有研究發(fā)現(xiàn)基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9和環(huán)氧化酶(COX)-2在人類多種腫瘤組織中均有高表達，且MMP-9和COX-2共同協(xié)同降解細胞外基質(zhì)〔4，5〕。但MMP-9和COX-2對EP形成的作用卻少有報道。本課題分析絕經(jīng)期未使用過任何激素類藥物治療的良性EP患者MMP-9及 COX-2的表達，探究其在EP形成的作用。

1 資料與方法

1.1 資料來源 選取我院2015年1～12月未使用過任何激素類藥物治療的絕經(jīng)前EP患者30例、絕經(jīng)后EP患者30例。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者因絕經(jīng)后出血或B超檢查發(fā)現(xiàn)宮內(nèi)異?；芈暼朐簷z查，經(jīng)宮頸宮腔鏡診斷為EP，行EP切除手術(shù)(息肉長徑為0.5～2.5 cm)。另外選取絕經(jīng)期子宮內(nèi)膜正常者60例，其中絕經(jīng)前、絕經(jīng)后各30例，且均未用過任何激素類藥物治療。本次實驗通過醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)，入選的病患均已簽署知情同意書。

1.2 方法 采用兔抗人COX-2單克隆抗體和兔抗人MMP-9單克隆抗體、即用型二步法免疫組化檢測盒均購自北京中杉生物科技有限公司。COX-2、MMP-9工作濃度均為 1∶100。術(shù)后立即采取活組織，以10%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋。將石蠟塊進行4 μm厚連續(xù)切片，二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，經(jīng)多聚賴氨酸防脫片處理和微波抗原熱修復(fù)預(yù)處理后，采用免疫組化 SP法染色，二氨基聯(lián)苯胺顯色，常規(guī)脫水、透明及封片。具體步驟按說明書操作以磷酸鹽緩沖液代替一抗作空白對照。

1.3 結(jié)果判定 COX-2的陽性信號為細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，在細胞核和細胞膜上無明顯染色。用已知陽性片作陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照。每張切片隨機選擇5個20×10高倍視野，采用半定量方法分析。取5個視野所見的陽性細胞百分比的平均值記分，細胞數(shù)全部為陰性反應(yīng)記為0分；<10%的細胞數(shù)呈陽性反應(yīng)記為1分；10%～50%的細胞數(shù)呈陽性反應(yīng)記為2分；51%～80%的細胞數(shù)呈陽性反應(yīng)記為3分；>80 % 的細胞數(shù)呈陽性反應(yīng)記為4分；染色強度記分，陰性染色記為0分；弱陽性染色記為1分；中度陽性染色記為2分；強陽性染色記為3分。每例組織細胞的評分以這兩項者之積表示，0 分為(-)，1～4 分為(+)，5～8 分為()，9～12分為()。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件。兩樣本率的比較采用χ2檢驗；兩指標(biāo)相關(guān)性分析采用Spearman系數(shù)檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 MMP-9、COX-2在絕經(jīng)前EP和正常子宮內(nèi)膜組織中的表達 MMP-9、COX-2在絕經(jīng)前EP組織中表達分別為83.33%(25/30)、57.67%(17/30)，均明顯高于對照組的26.67%(8/30)、20.00%(6/30)(χ2=19.461、8.531，P<0.05)，見表1。

2.2 MMP-9、COX-2在絕經(jīng)后EP和正常子宮內(nèi)膜組織中的表達 MMP-9、COX-2在絕經(jīng)后EP中表達分別為73.33%(22/30)、47.67%(13/30)，均明顯高于對照組的30.00%(9/30)、16.67%(5/30)(χ2=11.279、5.079，P<0.05)，見表2。

2.3 MMP-9和COX-2蛋白在絕經(jīng)前、后EP組織中的相關(guān)性分析 MMP-2與COX-2在絕經(jīng)前、后EP組織中呈正相關(guān)(r=0.383，P=0.037)，見表3。

表1 MMP-9及COX-2在絕經(jīng)前EP和正常子宮內(nèi)膜組織的表達(n=30，n)

表2 MMP-9及COX-2在絕經(jīng)后EP和正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(n=30，n)

表3 MMP-2與COX-2在絕經(jīng)前、后EP組織表達的相關(guān)性(n)

3 討 論

雌激素與EP有密切的聯(lián)系〔6～8〕，但是進入絕經(jīng)期的婦女，隨著卵巢功能的衰退，女性患者體內(nèi)雌激素水平下降，EP的高發(fā)生率卻持續(xù)保持不變〔9〕。MMPs是一種依賴鋅離子蛋白酶家族，在細胞外基質(zhì)的降解、促進新生血管等生理作用扮演者重要的角色。當(dāng)出現(xiàn)惡性腫瘤浸潤和擴散時，MMP-9也發(fā)揮作用。它作用于Ⅳ型膠原蛋白和纖維結(jié)合素，進一步使上皮下基底膜組織和血管降解。已有研究證明在子宮內(nèi)膜周期性破壞和重建中，MMP-9在子宮內(nèi)膜有表達。COX是一種膜結(jié)合蛋白，可代替COX和過氧化物酶的作用。它一般以COX-1和COX-2這有兩種異構(gòu)體形式存在。其中COX-2有誘性表達的作用，它誘導(dǎo)細胞因子、生長因子、促癌劑等表達〔10〕。COX-2參與細胞增殖，促進細胞凋亡等生理過程。當(dāng)細胞出現(xiàn)損傷或炎癥增生時，COX-2表達上調(diào)，刺激新血管增生。

本研究說明MMP-9和COX-2在正常子宮內(nèi)膜中存在高表達狀態(tài)，預(yù)示MMP-9和COX-2的異常表達可能是EP形成的重要因素。有研究表明雌激素水平的高低可以影響MMP-9和COX-2的表達〔11，12〕。本文發(fā)現(xiàn)MMP-9和COX-2的表達略有降低，推測MMP-9和COX-2在絕經(jīng)期EP組織異常表達可能與激素水平有關(guān)，因此在絕經(jīng)后MMP-9和COX-2的表達作用變?nèi)?。進一步相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，MMP-9和COX-2在EP形成中具有協(xié)同作用，隨著MMP-9水平的升高，COX-2水平逐漸升高?？赡苁且驗樽訉m內(nèi)膜中COX-2增加，促進細胞因子的產(chǎn)生，進而使MMP-9的水平提高，加速腫瘤炎癥細胞的轉(zhuǎn)移和浸潤，使EP增生加重。Chimal-Ramirez等〔13〕研究證實MMP-9和COX-2在腫瘤與細胞間質(zhì)中起到橋梁作用，他們互相協(xié)同為炎癥反應(yīng)提供條件。EP是慢性子宮內(nèi)膜炎的一種，是炎性的未成熟子宮內(nèi)膜〔14，15〕。在EP形成的過程中，由于MMP-9降解細胞外基質(zhì)，因此使腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲的速度加快。此時炎癥COX-2基因出現(xiàn)上調(diào)，細胞為了響應(yīng)可溶性因子以增加膠原降解，使富含腫瘤細胞遷移能力增加，抗細胞凋亡，啟動血管再生因子，局部血管和結(jié)締組織增生。MMP-9和COX-2的協(xié)同作用提高使惡變率，加重EP患者病情。

1 Lasmar BP，Lasmar RB.Endometrial polyp size and polyp hyperplasia〔J〕.Int J Gynaecol Obstet，2013；123(3)：236-9.

2 Elfayomy AK，Soliman BS.Risk factors associated with the malignant changes of symptomatic and asymptomatic endometrial polyps in premenopausal women〔J〕.J Obstet Gynaecol India，2015；65(3)：186-92.

3 唐志堅，周 蓉，鮑冬梅，等.子宮內(nèi)膜息肉惡變42例臨床分析〔J〕.中華婦產(chǎn)科雜志，2014；49(3)：204-7.

4 Lazar L，Loghin A，Bud ES，etal.Cyclooxygenase-2 and matrix metalloproteinase-9 expressions correlate with tissue inflammation degree in periodontal disease〔J〕.Rom J Morphol Embryol，2015；56(4)：1441-6.

5 高 鋒，馮一中.COX-2、MMP-9和CD31在非小細胞肺癌的表達及其意義〔J〕.江蘇醫(yī)藥，2014；40(9)：1067-70.

6 孫雪竹，盧美松，李 萌，等.子宮內(nèi)膜息肉研究進展〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展，2015；15(5)：985-7.

7 Indraccolo U，Di Iorio R，Matteo M，etal.The pathogenesis of endometrial polyps：a systematic semi-quantitative review〔J〕.Eur J Gynaecol Oncol，2013；34(1)：5-22.

8 Bueloni-Dias FN，Spadoto-Dias D，Nahas Neto J，etal.Predictive factors for occurrence of endometrial polyps in postmenopausal women〔J〕.Rev Bras Ginecol Obstet，2014；36(11)：489-96.

9 Seckin B，Ozgu-Erdinc AS，Dogan M，etal.The utility of endometrial thickness measurement in asymptomatic postmenopausal women with endometrial fluid〔J〕.J Obstet Gynaecol，2016;36(2):230-3.

10 Pinheiro A，Antunes A Jr，Andrade L，etal.Expression of hormone receptors，Bcl2，Cox2 and Ki67 in benign endometrial polyps and their association with obesity〔J〕.Mol Med Rep，2014；9(6)：2335-41.

11 張 濤，張詩琳，楊鶴鳴，等.雌激素對結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細胞增殖與凋亡及MMP-9表達的影響〔J〕.中華臨床醫(yī)師雜志(電子版)，2013；7(1)：96-9.

12 陳嶸袆，張金娥，阿彩嶺，等.雌激素化小鼠念珠菌性陰道炎模型中COX-2，TSLP的表達及其意義〔J〕.中國皮膚性病學(xué)雜志，2012；26(7)：584-7，590.

13 Chimal-Ramirez GK，Espinoza-Sanchez NA，Utrera-Barillas D，etal.MMP1，MMP9，and COX2 expressions in promonocytes are induced by breast cancer cells and correlate with collagen degradation，transformation-like morphological changes in MCF-10A acini，and tumor aggressiveness〔J〕.Biomed Res Int，2013；2013：279505.

14 van Hanegem N，Prins MM，Bongers MY，etal.The accuracy of endometrial sampling in women with postmenopausal bleeding：a systematic review and meta-analysis〔J〕.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2015；197：147-55.

15 李紅梅，張 潔，王秀艷.宮腔鏡治療子宮內(nèi)膜息肉切除術(shù)108例臨床分析〔J〕.重慶醫(yī)學(xué)，2013；42(3)：339-41.

〔2015-11-13修回〕

(編輯 袁左鳴)

夏 穎(1971-)，女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事婦科腫瘤方面的研究。

張 艷(1980-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事婦科腫瘤方面的研究。

R711.32

A

1005-9202(2016)22-5700-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.22.096