張培華 程 琳

(南陽理工學(xué)院張仲景國醫(yī)學(xué)院，河南 南陽 473004)

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Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)老年癡呆大鼠模型

張培華 程 琳

(南陽理工學(xué)院張仲景國醫(yī)學(xué)院，河南 南陽 473004)

目的 建立Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)老年癡呆(AD)中大鼠模型。方法 120只大鼠平均分為觀察組，實施Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)AD，不實施Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)AD為對照組，針對兩組大鼠的記憶水平等指標進行觀察比較。結(jié)果 兩組定位航行試驗中，潛伏期4 d及后2 d差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組學(xué)習(xí)記憶能力中象限百分比、20%、40%區(qū)域有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。觀察組空間探索學(xué)習(xí)記憶中象限百分比、20%、40%區(qū)域、穿過原平臺的次數(shù)與對照組有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。結(jié)論 Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)AD模型，與傳統(tǒng)的模擬AD模型可以更好地AD的發(fā)病特征，可以將其作為AD治療中的新模型。

Aβ25～35；鵝膏蕈氨酸；老年癡呆

老年性癡呆(AD)是一種中樞神經(jīng)減退性病癥，主要的臨床癥狀為進行性精神狀態(tài)衰變，利用記憶力減退，情緒的改變、行為的失常等〔1～4〕。本文研究Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)AD大鼠模型的建立。

1 資料與方法

1.1 一般資料 Wistar雄性大鼠120只均來自湖北省實驗動物研究中心，合格證號：0038006，15月齡。平均分為觀察組和對照組，實施Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)AD為觀察組，不實施Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)AD為對照組。

1.2 方法 使用的試劑有Aβ25～35(Sigma公司)、鵝膏蕈氨酸，主要儀器迷宮自動實驗記錄儀(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院)、腦立體定位儀(美國TPI公司)。將Aβ25～35 1 mg溶于100 μl滅菌生理水中，保證濃度為10 μg/μl，并將其封口，使用封口膜封好之后，放置在37℃的環(huán)境中進行孵育，使得Aβ25～35聚集、老化。將1 mg的鵝膏蕈氨酸溶入100 μl的滅菌蒸餾水中，濃度控制在10 μg/μl。將已經(jīng)處理好的Aβ25～35、鵝膏蕈氨酸的溶液，注射給觀察組。先使用戊巴比妥鈉進行腹腔麻醉注射，之后將大鼠固定在定位儀上，將Aβ25～35、鵝膏蕈氨酸溶液注射到大鼠大腦局部軟組織，并進行皮膚的縫合。對照組不進行任何的處理。兩組大鼠放在制作的迷宮中，對其學(xué)習(xí)記憶能力進行評價。第一，定位航行試驗。將大鼠放置四個象限的水池中，對其2 min內(nèi)其找到平臺出口的時間(對潛伏期的逃避)進行記錄。第二，空間探索試驗。將實驗水池中的平臺撤除，將大鼠放入實驗水池中，并記錄其2 min內(nèi)跨越原平臺位置的次數(shù)，并針對兩次記錄的結(jié)果進行分析。記錄平臺象限游泳距離占總距離的百分比、池壁20%和40%區(qū)域有用距離百分比?？梢試@著空間線索找到平臺位置，運動軌跡最多的為正常；基本上可以圍繞著池壁游泳，也會沿著4個象限平臺對其左右兩側(cè)的象限進行尋找，偶爾可以找到平臺，或者是極少找到平臺，則為不正常。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 定位航行試驗結(jié)果 兩組定位航行試驗中，潛伏期4 d及訓(xùn)練末后2 d差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組學(xué)習(xí)記憶能力中象限百分比、20%、40%區(qū)域差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2 空間探索試驗結(jié)果 觀察組空間探索學(xué)習(xí)記憶中象限百分比、20%區(qū)域、40%區(qū)域、穿過原平臺的次數(shù)與對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 兩組定位航行試驗中大鼠的潛伏期和學(xué)習(xí)記憶結(jié)果對比±s,n=60)

表2 兩組空間探索試驗學(xué)習(xí)記憶結(jié)果±s,n=60)

3 討 論

Aβ25～35是β淀粉樣蛋白其是神經(jīng)病學(xué)的老年斑的核心成分，其在老年癡呆大鼠模型中，可以誘導(dǎo)大鼠學(xué)習(xí)記憶功能下降，尤其是工作記憶能力〔5～10〕。鵝膏蕈氨酸是一種含有異惡唑環(huán)的氨基酸，其是強烈的神經(jīng)毒素，可以對大腦造成嚴重的損傷。對大鼠的大腦神經(jīng)元產(chǎn)生較大的毒性作用，導(dǎo)致大腦內(nèi)老年斑的沉積，延緩動物的行動，降低其學(xué)習(xí)記憶能力〔11〕。

Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸對大鼠的大腦組織產(chǎn)生的影響較大，其對大鼠的學(xué)習(xí)能力、記憶能力等產(chǎn)生較大的損傷，Aβ25～35促進大鼠衰老，鵝膏蕈氨酸影響大鼠的神經(jīng)元系統(tǒng)，降低大鼠的工作學(xué)習(xí)記憶能力，Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸可應(yīng)用于大鼠，誘導(dǎo)AD大鼠模型的建立。

為了更好地治療AD，研制更多治療藥物，需要進行相關(guān)的模擬實驗，而不能從人體上進行活體實驗，只能從動物實驗中獲取相關(guān)的數(shù)據(jù)，進行AD治療藥物的研制〔12〕。

1 Bihel F，Quelever G，Lelouard H.Synthesis of new 3-alkoxy-7-amino-4-chloro-isocoumarin derivatives as new beta-amyloid peptide production inhibitors and their activities on various classes of protease〔J〕.Bioorganic Med Chem Lett，2011；(14)：3141-52.

2 趙 波，張新宇，付學(xué)鋒，等.阿爾茲海默病動物模型的研究進展〔J〕.神經(jīng)解剖學(xué)雜志，2012；28(1)：102-4.

3 吳 林，王清碧，畢信亞，等.老年性癡呆動物模型研究進展〔J〕.廣西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2012；15(4)：68-71.

4 Huang FL，Huang KP，Wu JF.Environmental enrichment enhances neurogranin expression and hippocampal learning and memory but fails to rescue the impairments of neurogranin null mutant mice〔J〕.J Neurosci，2006；(23)：6230-7.

5 Liu L，Lu Y，Kong H.Aquaporin-4 deficiency exacerbates brain oxidative damage and memory deficits induced by long-term ovarian hormone deprivation and D-galactose injection〔J〕.Ira J Neuropsychopharmacol，2011；15(1)：1-14.

6 孔明望，王 平，田代志，等.Aβ25～35合并鵝膏蕈氨酸誘導(dǎo)老年癡呆大鼠模型的建立及評價〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2008；28(10)：945-7.

7 Wu YY,Wang X,Tan L,etal.Lithium attenuates scopolamine-induced memory deficits with inhibition of gsk-3β and preservation of postsynaptic components〔J〕.J Alzheimer Dis，2013；(3)：515-27.

8 Janelsins MC，Mastrangelo MA,Oddo S,etal.Early correlation of microglial activation with enhanced tumor necrosis factor-alpha and monocyte chemoattractant protein-1 expression specifically within the entorhinal cortex of triple transgenic Alzheimer′ s disease mice〔J〕.J Neuroinflamm，2005：23-35.

9 胡勇博，任汝靜，王 剛，等.阿爾茨海默病動物模型構(gòu)建的現(xiàn)狀與反思〔J〕.中華神經(jīng)科雜志，2015；48(8)：725-8.

10 Prakash A,Medhi B,Chopra K.Granulocyte colony stimulating factor (GCSF)improves memory and neurobehavior in an amyloid-beta induced experimental model of Alzheimer′s diease〔J〕.Pharmacol Biochem Behav，2013；(5)：46-57.

11 黃忠仕，焦 楊，張士軍，等.龍眼參多糖對老年癡呆模型SAMP8小鼠學(xué)習(xí)記憶的改善作用〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2008；28(21)：2086-8.

12 齊 鵬，楊曉慶，杜志敏，等.阿爾茲海默癥動物模型的研究現(xiàn)狀〔J〕.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2013；30(10)：838-41.

〔2015-02-19修回〕

(編輯 苑云杰)

2015年河南省科技攻關(guān)項目(No.152102310025)

張培華(1978-)，女，碩士，講師，主要從事老年癡呆研究。

R332

A

1005-9202(2016)22-5525-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.22.014