張楊 潘璞 重慶市萬(wàn)州區(qū)人民醫(yī)院 （重慶 404000）

Genexpert MTB/RIF 技術(shù)在菌陰肺結(jié)核支氣管灌洗液檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值研究

張楊 潘璞 重慶市萬(wàn)州區(qū)人民醫(yī)院 （重慶 404000）

目的：利用Genexpert MTB/RIF 檢測(cè)菌陰肺結(jié)核患者的支氣管灌洗液中的結(jié)核分枝桿菌（MTB）與利福平（RIF）耐藥基因，探討支氣管灌洗液使用Genexpert MTB/RIF 技術(shù)在菌陰疑似肺結(jié)核診療中的應(yīng)用價(jià)值。方法：收集50例疑似肺結(jié)核菌陰患者的支氣管灌洗液，同時(shí)采用Genexpert MTB/RIF、抗酸染色法進(jìn)行檢測(cè)，將檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，判斷其臨床應(yīng)用價(jià)值與臨床意義。結(jié)果：50例菌陰肺結(jié)核患者的支氣管灌洗液中有35例患者采用Genexpert MTB/RIF 技術(shù)檢測(cè)MTB陽(yáng)性，陽(yáng)性檢出率70%，利福平敏感35例；支氣管灌洗液的抗酸染色中有6例患者檢出MTB陽(yáng)性，兩種方法檢測(cè)結(jié)果利用X2檢驗(yàn)，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：支氣管灌洗液使用Genexpert MTB/RIF 技術(shù)能夠提高疑似菌陰肺結(jié)核患者的結(jié)核分枝桿菌的檢出率，能夠在短時(shí)間（2小時(shí)）內(nèi)幫助明確診斷和判斷利福平是否耐藥，在菌陰肺結(jié)核的患者診療中具有重要的應(yīng)用價(jià)值和臨床意義。

Genexpert MTB/RIF 技術(shù) 纖支鏡灌洗液 結(jié)核病

結(jié)核病是主要通過(guò)空氣傳播的危害人類健康的傳染病之一，其早期診斷更具有臨床意義，以便控制傳染源，預(yù)防結(jié)核病的傳播。在我們國(guó)家，由于基層醫(yī)療條件有限，結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷仍然以快速、準(zhǔn)確而最符合成本效益的痰涂片普通光學(xué)顯微鏡檢為主，但該方法敏感度低，變異度大，且無(wú)法進(jìn)行菌型鑒定及檢測(cè)細(xì)菌的耐藥性[1～2]。查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料，人們往往探討的是痰液在診斷結(jié)核病的相關(guān)報(bào)告，然而在臨床工作中，結(jié)核病感染患者往往不能獲取優(yōu)質(zhì)的痰標(biāo)本而降低了痰涂片陽(yáng)性率；或是由于含菌量少而多次痰涂片結(jié)果為陰性，有礙于結(jié)核病的早期診斷，延誤了治療，不利于傳染源的控制。如何提高菌陰肺結(jié)核患者的結(jié)核桿菌檢出率為臨床提供可靠的病原學(xué)依據(jù)，是結(jié)核病防治的關(guān)鍵。近年來(lái)開(kāi)展的Genexpert MTB/RIF技術(shù)是集結(jié)核病和利福平耐藥基因伽馬突變檢測(cè)于一體的快速、準(zhǔn)確檢測(cè)方法。經(jīng)纖支鏡檢查灌洗標(biāo)本，進(jìn)行結(jié)核桿菌的病原學(xué)及相關(guān)檢測(cè)，為菌陰肺結(jié)核的臨床診斷及治療提供了幫助[3]。在菌陰肺結(jié)核患者中，我們常規(guī)開(kāi)展纖支鏡檢查，將灌洗液分別行Genexpert MTB/RIF技術(shù)和傳統(tǒng)抗酸染色，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Genexpert MTB/RIF技術(shù)比傳統(tǒng)抗酸染色更能提高菌陰肺結(jié)核患者臨床檢出率，有利于結(jié)核病的早期診斷及治療。

1.資料和方法

1.1 臨床資料：收集50例2015年12月至2016年5月在本院就診的臨床疑似肺結(jié)核（有結(jié)核感染高危因素，有相應(yīng)結(jié)核感染中毒癥狀及胸部影像學(xué)改變）且痰涂片陰性的患者的纖支鏡灌洗液標(biāo)本，其中男性35例，女性15例，年齡22～73歲。行常規(guī)纖支鏡檢查且配合好。根據(jù)胸部影像學(xué)資料，在肺相關(guān)葉、段行灌洗，在病變部位注入常溫滅菌注射用水，每次20ml，注入3次，送檢灌洗液標(biāo)本不少于20ml。

1.2 方法：所有標(biāo)本同時(shí)采用Genexpert MTB/RIF檢測(cè)、抗酸染色法檢測(cè)。取纖支鏡灌洗液標(biāo)本20ml行Genexpert MTB/RIF檢測(cè)，約2h后系統(tǒng)自動(dòng)檢測(cè)結(jié)果。纖支鏡灌洗液標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行抗酸染色，操作參照《結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化操作與網(wǎng)絡(luò)建設(shè)》進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

研究數(shù)據(jù)資料均采用SPSS19.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（±s）表示，用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用（%）表示，用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

支氣管灌洗液使用Genexpert MTB/RIF檢測(cè)MTB結(jié)果，50例菌陰疑似肺結(jié)核患者中，有35例患者檢測(cè)MTB陽(yáng)性，陽(yáng)性檢出率為70%，利福平敏感35例（表1）。支氣管灌洗液的抗酸染色MTB陽(yáng)性檢出6例，陽(yáng)性檢出率12%，Genexpert MTB/RIF檢測(cè)MTB結(jié)果比較，χ2檢驗(yàn)，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

比較采用X2檢驗(yàn)，X2=34.77，自由度=1，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

在利福平耐藥基因檢測(cè)方面，由于抗酸染色不能獲取相關(guān)信息，故兩者未行相關(guān)比較。

根據(jù)上述檢測(cè)結(jié)果，給予MTB陽(yáng)性結(jié)果者行抗結(jié)核治療（方案：異煙肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇，頓服），約1周左右患者臨床癥狀（發(fā)熱、納差、乏力等）逐漸減輕，2個(gè)月后復(fù)查胸部影像學(xué)，提示肺部病灶均有吸收減少，治療有效。

3.討論

在我國(guó)大部分地區(qū)，結(jié)核病的早期診斷主要依靠痰涂片抗酸染色，由于涂片對(duì)標(biāo)本含菌量要求高，熒光抗酸染色，40倍鏡下進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)1條以上/300視野報(bào)告陽(yáng)性，全片300個(gè)視野無(wú)抗酸桿菌報(bào)告陰性[4]，導(dǎo)致其針對(duì)結(jié)核病的敏感度低，引起漏診，從而延誤治療；還可能發(fā)生誤診，造成過(guò)度診療，增加了患者醫(yī)療經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。Genexpert MTB/ RIF技術(shù)是將樣品準(zhǔn)備、定量PCR擴(kuò)增和熒光擴(kuò)增檢測(cè)基于一身的核酸擴(kuò)增檢測(cè)分析系統(tǒng)。只需要在獨(dú)立的反應(yīng)孔中加入待檢測(cè)樣品，2h便能快速測(cè)出標(biāo)本中是否有結(jié)核分枝桿菌，以及是否對(duì)利福平耐藥。同時(shí)，該系統(tǒng)具有高度全自動(dòng)化、速度快、生物安全性好等優(yōu)點(diǎn)。WHO已于2010年底批準(zhǔn)其應(yīng)用。截止2012年7月，2/3的結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家、1/2耐多藥結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家均將Genexpert MTB/ RIF的應(yīng)用列入國(guó)家結(jié)核病規(guī)劃指南。2013年7月，Genexpert MTB/RIF通過(guò)美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）的認(rèn)證。在肺內(nèi)相應(yīng)葉、段行纖支鏡灌洗技術(shù)，擴(kuò)大了檢測(cè)范圍，更適用于臨床上疑似肺結(jié)核的患者，提高了結(jié)核分枝桿菌的檢出率。我們所得出的結(jié)論也與李妍等[5]研究結(jié)果：不同類型樣本采用Genexpert MTB/RIF技術(shù)檢測(cè)的陽(yáng)性率依次為灌洗液＞痰樣本＞胸水是一致的。盡管Genexpert MTB/RIF檢測(cè)技術(shù)硬件設(shè)施費(fèi)用較貴，基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)不能自行購(gòu)買，但纖支鏡灌洗技術(shù)成熟且標(biāo)本獲取容易，可將標(biāo)本送往Genexpert MTB/RIF相關(guān)檢測(cè)機(jī)構(gòu)，也能快速獲取檢測(cè)結(jié)果，對(duì)結(jié)核病的早期診斷意義重大。支氣管灌洗液使用Genexpert MTB/RIF技術(shù)對(duì)菌陰疑似肺結(jié)核患者的結(jié)核分枝桿菌檢出率明顯高于抗酸染色法，能夠在短時(shí)間內(nèi)（2小時(shí)）內(nèi)幫助明確診斷和判斷利福平是否耐藥。Genexpert MTB/RIF檢測(cè)的結(jié)核分枝桿菌陽(yáng)性的35

表1. 兩種方法對(duì)纖支鏡灌洗液標(biāo)本陽(yáng)性檢出率比較

例標(biāo)本中，均對(duì)利福平敏感，這與楊慧娟等[6]研究結(jié)果：

Genexpert MTB/RIF檢測(cè)痰標(biāo)本中結(jié)核分枝桿菌敏感率為

76.8 %有差異，可能與樣本量少有關(guān)，后續(xù)會(huì)繼續(xù)觀察研究。總之，纖支鏡下取得的支氣管灌洗液使用Genexpert

MTB/RIF檢測(cè)MTB與利福平耐藥基因，能夠大大提高結(jié)

核桿菌與利福平耐藥基因的檢出率，其敏感性及特異性均

較高于痰液、胸水等標(biāo)本，用于臨床對(duì)結(jié)核病的診斷與治

療具有深遠(yuǎn)意義，而且對(duì)結(jié)核病的流行趨勢(shì)也會(huì)產(chǎn)生控制

作用。

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1006-6586(2016)06-0098-02

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