成永明 崔小敏 雷 琨 石會麗 王文驪 劉軍鋒

陜西省渭南市食品藥品檢驗所(渭南 714000)

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·方藥縱橫·

正交試驗法優(yōu)選清肺健中顆粒的提取工藝

成永明 崔小敏△雷 琨△石會麗△王文驪▲劉軍鋒△

陜西省渭南市食品藥品檢驗所(渭南 714000)

目的：優(yōu)選清肺健中顆粒的水提取工藝。方法：通過正交試驗考察加水量、提取時間和提取次數(shù)對清肺健中顆粒提取工藝的影響。以黃芩苷含量和干膏率考察指標，綜合評分法優(yōu)選最佳工藝條件，采用HPLC測定黃芩苷的含量，流動相甲醇-0.4%磷酸水溶液(47∶53)，檢測波長280nm。結果：最佳提取工藝為加8倍量水，煎煮3次，每次1.5h。結論：優(yōu)選的提取工藝穩(wěn)定、簡便可行，可用于清肺健中顆粒的提取生產(chǎn)。

概述清肺健中顆粒是由黃芩、太子參、桔梗、陳皮等10余味藥材組成的復方制劑，具有宣肺平喘、清肺化痰、理中健脾的功效，臨床用于慢性阻塞性肺病、支氣管擴張、支氣管哮喘、肺纖維化合并感染及肺癌等見上述癥狀者。方中黃芩為君藥，具有清熱燥濕，瀉火解毒的功效，用于治療肺熱咳嗽、胃腸濕熱等癥[1]。黃芩苷是黃芩的主要藥效成分，含量高達黃芩藥材的9%以上，具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗過敏等多種藥理作用[2]。本文采用正交試驗法[3-4]，以黃芩苷含量和干膏率為評價指標，采用綜合評分法[5-7]來優(yōu)選影響水煎提取工藝的最佳因素指標，以保證臨床用藥的有效性。

1 儀器與試藥 高效液相色譜儀(島津LC-2010A型)，紫外-可見檢測器(UV-VIS)，化學工作站(LC-Solution)，昆山市超聲儀器有限公司的超聲波清洗機(KQ-100型)、北京賽多利斯天平有限公司的電子分析天平(BT25S,d=0.01mg；BS210Sd=0.1mg)。乙腈為色譜純試劑，水為重蒸水，其它試劑均為分析純。試驗用藥材購自于西安盛興中藥飲片有限責任公司(符合 《中國藥典》2015版)。黃芩苷購自中國藥品生物制品檢定所(供含量測定用，批號：110715-201318，純度93.30%)，使用前置干燥器中干燥至恒重。

2 方法與結果 2.1以預試驗為基礎，進行正交試驗設計，考察因素為加水量、提取次數(shù)、提取時間，因素水平見表1。

2.2 干浸膏得率的測定方法 每個試驗號的樣品溶液，精密量取100ml，于已干燥至恒重的150ml蒸發(fā)皿中，蒸干，105℃干燥3h，置干燥器中冷卻至室溫，迅速稱重，計算干浸膏得率，結果見表2。

表1 試驗因素水平表

2.3 測定黃芩苷含量 2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；色譜柱：Akasil-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；以甲醇-0.4%磷酸溶液(47∶53)為流動相；檢測波長為280nm；柱溫為30℃流速為每分鐘1.0ml。理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算應不低于4000。

2.3.2 制備對照品溶液：精密稱取黃芩苷對照品11.96mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶液稀釋制成含黃芩苷0.5579mg/ml的對照品儲備液。精密吸取對照品儲備液5ml，置于50ml量瓶中，用甲醇稀釋制成含黃芩苷 0.0558mg/ml的對照品溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備：對各正交樣品濾液精密量取1ml，于10ml量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過，取其續(xù)濾液為供試品。

2.3.4 陰性對照溶液的制備：按擬定制劑工藝，制得黃芩陰性對照樣品，按照“2.3.3”項制備法制得陰性對照溶液。

2.3.5 測定法:分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，見圖1。按外標法以峰面積計算含量，結果見表2。

2.3.6 方法學考察：分別精密吸取濃度為0.0558mg/ml黃芩苷對照品溶液2μl、4μl、8μl、12μl、16μl、20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積，以進樣對照品溶液的濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得方程Y=3414580×-37645，r=0.9999。線性范圍0.1116～1.1160μg。精密度試驗以黃芩苷峰面積值計算的RSD為 0.23%，表明儀器精密度良好；穩(wěn)定性試驗 以0～12h內黃芩苷峰面積值計算的RSD為0.87%，表明供試品溶液在12h內穩(wěn)定性較好；重復性試驗測得黃芩苷含量的RSD為 0.62%，表明本方法重復性較好；加樣回收率平均值為 100.61%，RSD為0.98%，回收率良好。

圖1 對照品溶液(A)、供試品溶液(B)與陰性對照溶液(C)高效液相色譜圖(1黃芩苷)

2.4 提取工藝優(yōu)選 選黃芩苷含量及干膏率的綜合評分為指標，權重系數(shù)分別為50%，50%。綜合評分=黃芩苷含量/黃芩苷含量最大值×50%+干膏率/干膏率最大值×50%，對水提條件進行優(yōu)選。試驗安排及結果見表2，方差分析見表3。固本清顆粒金水提取工藝過程中，不同的工藝參數(shù)會影響提取效果。以綜合評分考察指標，A2>A3>A1，B3>B2>B1，C3>C2>C1，C因素(提取次數(shù))影響最大，A因素(加水量)次之，B因素(煎煮時間)影響最小。方差分析結果見表8，結果表明，因素C有顯著影響(P<0.05)，因素A和B對試驗結果均無顯著性影響(P>0.05)，兼顧能源的節(jié)約，以A2B2C3為佳，即最佳提取工藝為加水8倍量、煎煮3次、每次1.5h。

表2 固本清金顆粒水提L9(34)正交試驗結果

表3 方差分析結果

2.5 驗證試驗 稱取處方量藥材按優(yōu)選的提取工藝進行試驗，平行操作3份，分別測定黃芩苷含量和干膏率。計算結果接近或高于正交表中最優(yōu)值，黃芩苷和干膏率基本穩(wěn)定，黃芩苷含量分別為 6.670，6.816，6.725mg/g，干膏率分別26.03%，26.76%，26.37%，RSD分別為1.10% 和1.38%(n=3)，說明該工藝穩(wěn)定、可行。

3 討 論 試驗結果表明，甲醇和乙醇作為提取溶劑時黃芩苷的峰面積差異不大，因此最終選擇安全低毒的乙醇作為樣品的提取溶劑。

黃芩苷含量測定色譜條件參考2015年版《中國藥典》[1]黃芩項下相關條件，最終采用甲醇-0.4%磷酸(47∶53)為流動相時，黃芩苷分離度良好，峰形對稱，陰性對照表明黃芩苷色譜峰不受其他成分干擾，方法專屬性良好。

清肺健中顆粒在臨床應用中多用湯劑，依據(jù)本處方劑量大，結合顆粒劑的特點，將其設計為顆粒制劑，對其水煎提取工藝，采用正交設計法進行優(yōu)化，選擇黃芩苷含量和干膏率進行綜合評價，依據(jù)各工藝參數(shù)對制劑提取結果的影響，優(yōu)選出的最佳參數(shù)，保證工藝穩(wěn)定可行，可為清肺健中顆粒的生產(chǎn)奠定實驗基礎。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 [S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

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(收稿2016-07-25；修回2016-08-17)

黃芩苷 工藝學 色譜法,高壓液相 @清肺健中顆粒

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Adoi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.11.048

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