相聰坤 關(guān)勝江 王巧 安福麗 陳迎春 吳海燕

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·論著·

不同提取方法馬勃中藥材揮發(fā)性成分的GC-MS分析

相聰坤 關(guān)勝江 王巧 安福麗 陳迎春 吳海燕

目的 通過對馬勃中揮發(fā)性成分的比較分析，以期為馬勃類藥材的質(zhì)量控制與資源開發(fā)利用提供科學依據(jù)。方法 利用水蒸氣蒸餾法和超聲提取法提取馬勃中揮發(fā)油類成分；運用GC-MS對馬勃中揮發(fā)油成分進行分析鑒定。結(jié)果 比較水蒸氣蒸餾法和超聲法提取的馬勃揮發(fā)油的成分，水蒸氣蒸餾法所得揮發(fā)油中主要化學成分為2,2'-亞甲基雙-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)和7-Amino-1,4-dimethylpyrimido [4,5-c]pyridazine-3,5-(1H,2H)-dione；乙酸乙酯超聲提取法3種正品馬勃的主要成分為十六烷酸乙酯；乙醚提超聲取法的馬勃揮發(fā)油中共有成分為2,2'-亞甲基雙-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)。結(jié)論 不同品種、不同制備方法馬勃揮發(fā)性成分存在明顯差異。因此，對于馬勃藥材的質(zhì)量控制尚需進一步規(guī)范化和標準化。本文研究結(jié)果為馬勃藥材質(zhì)量控制提供了一定的參考和依據(jù)。

馬勃；GC-MS；揮發(fā)性成分

馬勃(lasiosphaera Calvatia)為灰包科真菌脫皮馬勃(Lasiosphoera fenzlii reich)、大馬勃Calvatia gigantea(Batsch ex pers.)Lloyd或紫色馬勃Calvatia lilacina(Mont.et Berk.)Lloyd的干燥子實體[1]。馬勃性平、味辛，具有清肺利咽、止血的功效，是一種用于解毒、消腫的藥用真菌，更是一種止血良藥[2]。研究表明，馬勃中主要化學成分為萜類化合物、甾體化合物、馬勃多糖、小分子的含氮化合物等[3]。此外，馬勃中尚含有具有較強生理活性的揮發(fā)油類成分，但研究尚不夠深入。馬勃作為傳統(tǒng)的清熱解毒藥，具有抑菌的生物活性[4]，其主要活性物質(zhì)主要為揮發(fā)油類成分。迄今為止，對馬勃的研究主要集中在其非揮發(fā)性成分及其藥理活性研究，而對其揮發(fā)性成分的研究報道較少[5]。本文采用脂溶性溶劑超聲法提取馬勃中的揮發(fā)性成分，并與傳統(tǒng)的水蒸氣蒸餾法進行比較研究；并比較藥典收錄的3種正品馬勃和1種偽品馬勃中揮發(fā)性成分的異同。為馬勃的質(zhì)量控制和綜合利用提供一定的科學依據(jù)和參考。

1 資料與方法

1.1 儀器與材料 Agilent HP-6890GC/5973MS 氣質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，數(shù)據(jù)庫為 NIST-05 標準質(zhì)譜圖庫。乙酸乙酯、乙醚等所用試劑均為國產(chǎn)分析純。經(jīng)河北省藥品檢驗研究院段吉平鑒定，正品馬勃為灰包科脫皮馬勃(Lasiosphoera fenzlii Reich)、大馬勃[Calvatia gigantea(Batsch ex pers.)Lloyd]或紫色馬勃[C.lilacina(Mont.et Berk.)Lloyd]的干燥子實體；非正品馬勃為灰包科大口靜灰球(Bovistella sinensis Lloyd)的干燥子實體。

1.2 方法

1.2.1 水蒸氣蒸餾法:取馬勃樣品80 g破碎后放入圓底燒瓶中，采用 2010 年版《中國藥典》中揮發(fā)油提取裝置進行提取，加蒸餾水1 600 ml，振搖使樣品完全浸入水中，蒸餾14 h，流出液用乙醚萃取，用無水硫酸鈉除水干燥后作為供試品溶液。0.22 μm 濾膜過濾，取續(xù)濾液，進行GC-MS分析。

1.2.2 超聲提取法:取干燥后的馬勃樣品，粉碎，分別稱取10 g不同品種的馬勃樣品，各加入乙酸乙酯或乙醚200 ml，靜置過夜后，超聲1 h，過濾，將濾液減壓濃縮至10 ml，0.22 μm 濾膜過濾，取續(xù)濾液，進行 GC-MS分析。

1.3 分析測試條件 (1)氣相色譜條件:HP-5MS 毛細管色譜柱 (0.1 mm×0.45 mm×30 m)，柱溫50℃，保持2 min，然后以4℃/min升溫至230℃，保持20 min，氣化室溫度 250℃，載氣為高純度氮氣(99.999%)，柱前壓15.08 psi，載氣流量2.0 ml/min，進樣量 2 μl，分流比40∶1。(2)質(zhì)譜條件：EI離子源，離子源溫度230℃，四極桿溫度150℃，電子能量70 eV，發(fā)射電流34.6 μA，倍增器電壓1 936 V，接口溫度 280℃，質(zhì)量范圍(m/z)10～550。

2 結(jié)果

2.1 水蒸氣蒸餾法

2.1.1 馬勃揮發(fā)性成分總離子流圖：采用 GC-MS 進行分析，得馬勃揮發(fā)性化學成分的總離子流圖。見圖1。

圖1 水蒸氣-馬勃氣相色譜-質(zhì)譜總離子流色譜圖

2.1.2 GC-MS分析結(jié)果:選用水蒸氣蒸餾法提取，共分離鑒定出66個峰，通過GC-MS分析工作站和 NIST標準圖庫進行檢索,并參照有關(guān)文獻，鑒定出馬勃揮發(fā)性化學成分16個化學成分，占總揮發(fā)油總量的64.814%，其中主要成分為2,2'-亞甲基雙-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(12.72%)和7-Amino-1,4-dimethylpyrimido[4,5-c]pyridazine-3,5-(1H,2H)-dione(14.61%)。見表1。

表1 水蒸氣-馬勃揮發(fā)性成分GC-MS分析結(jié)果

2.2 乙酸乙酯超聲提取GC-MS分析結(jié)果 選用乙酸乙酯為提取溶劑。其中大馬勃共分離出12個峰，鑒定出7個化學成分，占總揮發(fā)油總量的94.451%，其中主要成分為2,2'-亞甲基雙-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(39.64%)，n-Propyl-9,12-octadecadienoate(29.83%)；紫色馬勃共分離出9個峰，鑒定出5個化學成分，占總揮發(fā)油總量的85.237%，其中主要成分為3,4-二甲基苯胺(24.05%)，Racemosol (25.45%)；脫皮馬勃共分離出13個峰，鑒定出7個化學成分，占總揮發(fā)油總量的87.561%，其中主要成分n-Propyl-9,12-octadecadienoate (34.70%)，十六烷酸乙酯(17.03%)，油酸乙酯(14.47%)；偽品馬勃共分離出6個峰，鑒定出4個化學成分，占總揮發(fā)油總量的73.153%，其中主要成分為3,4-二甲基苯胺(31.33%)，2,2'-亞甲基雙-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(28.25%)。見表2。

2.3 乙醚超聲提取GC-MS分析結(jié)果 乙醚為提取溶劑，大馬勃共分離出7個峰，鑒定出4個化學成分，占總揮發(fā)油總量97.679%，主要成分為2,2'-亞甲基雙-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(71.08%)；紫色馬勃共分離出5個峰，鑒定出3個化學成分，占總揮發(fā)油總量96.013%，主要成分為4-苯乙炔基苯乙酮(45.05%)，2,2'-亞甲基雙-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(49.11%)；脫皮馬勃共分離出10個峰，鑒定出6個化學成分，占總揮發(fā)油總量86.620%，主要成分為 4-苯乙炔基苯乙酮(25.40%)，2,2'-亞甲基雙-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(41.74%)；偽品馬勃共分離出6個峰，鑒別出4個峰，占總揮發(fā)油總量96.163%，主要成分為2,2'-亞甲基雙-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(46.25%),3-(Dimethyphenysilyl)-2-methylpropionamide(47.88%)。見表3。

表2 乙酸乙酯-馬勃揮發(fā)性成分GC-MS分析結(jié)果

表3 乙醚-馬勃揮發(fā)性成分GC-MS分析結(jié)果

3 討論

通過對水蒸氣蒸餾法和超聲提取法比較研究發(fā)現(xiàn)，不同品種、不同制備方法馬勃揮發(fā)性成分存在明顯差異。3種正品馬勃：脫皮馬勃、大馬勃或紫色馬勃均含有化合物十六烷酸乙酯(又稱棕櫚酸乙酯)，作為一種香精、香料，主要被用來作為乳化劑、生物柴油和食品添加劑等廣泛使用[6]。同時棕櫚酸乙酯是合成蔗糖酯(SE)及蔗糖多酯(SPE)的重要原料[7]。而非正品馬勃中不含有該成分。同時在乙酸乙酯提取中，3,4-二甲基苯胺是4種馬勃的共有成分，據(jù)報道，3,4-二甲基苯胺作為一種重要的精細化工中間體，是合成核黃素 (維生素 B2)的重要原料，還廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、染料、農(nóng)藥等化工產(chǎn)品的合成中，國內(nèi)外需求量很大 ,市場前景較好[8]。

1 國家藥典委員會主編.中華人民共和國藥典(2015 年版).第一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.50.

2 郭晶.馬勃化學成分及藥理作用研究進展.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2013，29：386-389.

3 鄧志鵬,孫隆儒.中藥馬勃的研究進展.中藥材,2006，28:996．

4 鄧永中,陸夢怡.中藥抗菌有效化學物質(zhì)的研究進展.中藥現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2008,18:110-112.

5 徐淑楠,司攀,高玉瓊.脫皮馬勃揮發(fā)性成分的GC-MS分析.中國實驗方劑學雜志,2012,18:132-134.

6 李洋.SBA-15固定化脂肪酶催化合成棕櫚酸乙酯的研究.吉林大學,2014.

7 張艷,章亞東,蔣登高.固體酸催化合成棕櫚酸乙酯.精細化工,2003,20:230-233.

8 吳崖迪,王桂林.3,4-二甲基苯胺合成進展.浙江化工,2003,34:22-24.

GC-MS analysis for the volatile constituents of Lasiosphaera calvatia extracted by different extraction methods

XIANGCongkun*,GUANShengjiang*,WANGQiao,etal.

*DepartmentofPharmacy,Hebei,ProvincialTCMHospital,Shijiazhuang050017,China

Objective To use GC-MS to analyze the volatile constituents of Lasiosphaera calvatia obtained by different extraction methods in order to provide scientific basis for evaluating and controlling the quality of Lasiosphaera calvatia.Methods The volatile oil constituents in Lasiosphaera calvatia were extracted by steam distillation method and ethyl acetate ultrasound extraction method,respectively,then the volatile oil constituents in Lasiosphaera calvatia were analyzed and identified by means of GC-MS. Moreover the two kinds of extraction methods were compared.Results The volatile oil compositions extracted by steam distillation method were mainly phenol,2,2'-methylenebis[6-(1,1-dimethylethy)]-4-methyl and 7-amino-1,4-dimethylpyrimido [4,5-c]pyridazine-3,5-(1H,2H)-dionethe,however, which extracted by ethyl acetate ultrasound extraction method were mainly hexadecanoic acid ethyl ester,moreover, which extracted by ethyl ether extraction method were mainly the common composition of 2,2'- methylene double (4-methyl-6-tertiary butyl phenol).Conclusion There are significant differences in the volatile constituents of Lasiosphaera calvatia extracted by different extraction methods,thus it is need to normalize and standardize the quality control of Lasiosphaera calvatia further.The research results in this article provide a certain reference and basis for quality control of puffballs.

Lasiosphaera calvatia; GC-MS；volatile constituents

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.23.006

項目來源：河北省科學技術(shù)研究與發(fā)展指導計劃項目(編號：12277794)

050011 石家莊市，河北省中醫(yī)院藥學部(相聰坤、關(guān)勝江、安福麗、陳迎春)；河北醫(yī)科大學藥學院藥物分析教研室(王巧、吳海燕)

R 917

A

1002-7386(2016)23-3545-03

2016-07-23)