葉亞平 李覓 吳穎星 黃俊明 印衛(wèi)鋒 郭風勁

·實驗研究論著·

溶血磷脂酸通過RhoA?YAP通路調(diào)控脂肪干細胞增殖的研究

葉亞平 李覓 吳穎星 黃俊明 印衛(wèi)鋒 郭風勁

目的探討溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）調(diào)控脂肪干細胞（adipose?derived stem cells,ASCs）增殖的作用及其分子機制。方法分離SD大鼠ASCs，利用LPA對其進行干預，干預時間為1 h，采用Western Blot檢測YES相關蛋白（yes associated protein,YAP）、結締組織生長因子（connective tissue growth factor,CTGF）蛋白表達水平。利用免疫熒光檢測YAP亞細胞定位，逆轉錄聚合酶鏈反應（reverse transcription polymerase chain reaction,RT?PCR）檢測CTGF和Ankrd1的mRNA表達水平。慢病毒轉染ASCs，Western Blot檢測不同分組YAP蛋白表達。進一步利用流式細胞術和CCK?8法檢測不同分組中ASCs增殖情況。最后采用RhoA抑制劑C3干預，免疫熒光檢測不同分組中YAP亞細胞定位，Western Blot檢測YAP、CTGF和GTP?RhoA的表達情況。結果LPA能顯著促進YAP的表達和在細胞核內(nèi)的聚集，同時LPA也能夠促進YAP靶基因CTGF在蛋白水平的表達。LPA能上調(diào)YAP靶基因CTGF和錨蛋白重復域1（ankyrin repeating domain 1,Ankrd1）的mRNA表達水平。慢病毒轉染敲除YAP表達后，LPA對YAP的上調(diào)作用被明顯抑制。細胞周期流式細胞術和CCK?8檢測結果顯示LPA可顯著促進ASCs的增殖，但在shYAP慢病毒轉染特異性敲除YAP后，LPA對ASCs的促增殖能力被明顯削弱。RhoA抑制劑C3處理后，LPA對YAP細胞核聚集的促進作用被削弱，同時LPA對YAP、CTGF和GTP?RhoA表達的促進作用也得到了明顯抑制。結論LPA能夠通過RhoA?YAP通路調(diào)控ASCs的增殖。

溶血磷脂酸；脂肪干細胞；RhoA?YAP通路；細胞增殖

間充質(zhì)干細胞為具有自我更新能力的成體干細胞，其能向中胚層方向（如軟骨細胞、成骨細胞和脂肪細胞等）分化［1］。間充質(zhì)干細胞存在于諸多部位，如骨髓、脂肪、牙髓及滑膜等組織中［2，3］。Zuk等［4］學者最早在脂肪組織中發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細胞，并將其命名為脂肪干細胞（adipose?derived stem cells, ASCs）。De Ugarte等［5］發(fā)現(xiàn)分離獲取ASCs與其他來源的間充質(zhì)干細胞比較，操作更為簡單，所獲取的細胞量也更大。目前以ASCs為種子細胞的多項臨床試驗正在進行中［6］。但是利用ASCs等干細胞的治療依舊具有局限性，主要因為移植的細胞數(shù)目偏低，且移植的細胞容易發(fā)生凋亡［7］。促進ASCs細胞的增殖能力對于有效提高以ASCs為種子細胞的臨床治療效果意義重大，目前仍缺乏關于ASCs細胞增殖及其分子機制的相關研究報道。

YES相關蛋白（yesassociated protein,YAP）能顯著促進細胞增殖、器官發(fā)育及腫瘤生長［8］。Hippo通路能通過磷酸化YAP的127絲氨酸位點從而抑制YAP進入細胞核并導致YAP表達下調(diào)［9］。Hippo?YAP通路在細胞增殖、凋亡、遷移和分化等領域中發(fā)揮著十分重要的作用［8］。Yung等［10］研究顯示溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）能通過G蛋白偶聯(lián)受體來調(diào)控細胞增殖、存活、黏附遷移等一系列生物學行為。LPA能通過激活ERK1/2和PI3K/AKT通路從而抑制H2O2導致的骨髓間充質(zhì)干細胞（bone marrow?derived stem cells,BMSCs）凋亡［11］。Radeff?Huang等［12］研究顯示LPA能夠抑制其他細胞（如成纖維細胞、腸上皮細胞、腎小管上皮細胞等）的凋亡。Yu等［13］于2012年報道了他們的研究，結果顯示LPA能夠調(diào)控乳腺癌上皮細胞中YAP的表達。但是LPA對于ASCs增殖的作用及其相關機制尚未見文獻報道。

LPA對于ASCs的促增殖作用，LPA相關分子機制對提高ASCs干細胞治療的效果和ASCs在再生醫(yī)學中的研究意義重大。在本研究中，我們將對其作用和相關分子機制進行詳細闡述。

材料與方法

一、實驗材料與儀器

DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清（Gibco公司，美國），Ⅰ型膠原酶、胰蛋白酶、結締組織生長因子（connec? tive tissue growth factor,CTGF）一抗、辣根過氧化物酶偶聯(lián)二抗（Santa Cruz公司，美國），RhoA抑制劑C3（Cytoskeleton公司，美國），YAP一抗（CST公司，美國），GTP?RhoA一抗、RhoA檢測試劑盒（Thermo公司，美國），RIPA裂解緩沖液（上海碧云天生物科技公司），Alexa Fluor488免疫熒光二抗、Alexa Fluor 594免疫熒光二抗、TrizolReagent（Invitrogen公司，美國），DAPI染液（博士德公司，中國），逆轉錄聚合酶鏈反應（reverse transcription polymerase chain reac?tion,RT?PCR）試劑盒、Taq聚合酶、dNTP（MBI公司，美國），引物合成（北京擎科生物技術有限公司），RNA酶、PI染液（Sigma公司，美國），IQ SYBR Green supermix（Bio?Rad公司，美國），流式細胞儀（FAC?Sort，BD公司，美國），CCK?8細胞增殖檢測試劑盒（日本同仁生物科技公司，日本），蛋白定量檢測試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司），慢病毒構建（上海吉凱生物科技有限公司），熒光顯微鏡（奧林巴斯公司，日本）。

二、實驗方法

（一）ASCs的分離、培養(yǎng)

選取200～250 g成年SD大鼠（由華中科技大學同濟醫(yī)學院實驗動物中心提供）。所有實驗動物操作都經(jīng)過華中科技大學同濟醫(yī)學院倫理委員會批準。手術分離得到大鼠腹股溝脂肪組織后，仔細修剪并去除血管及淺筋膜等結締組織，用眼科剪剪至糊狀，加入2倍于組織體積的0.1％Ⅰ型膠原酶，37℃水浴30min，加入等體積的含10％胎牛血清的DMEM終止消化，900×g離心10min后去掉上清液，沉淀物用5m l含10％胎牛血清的DMEM重懸，并以80目尼龍篩網(wǎng)過濾，倒置顯微鏡下觀察并計數(shù)后，將細胞種植于25 cm2培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5％CO2孵箱內(nèi)培養(yǎng)，并標記為原代。以后每隔2 d換液1次，并于換液后在倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀況和形態(tài)特征。待細胞接近融合時用0.25％胰蛋白酶消化，按1∶2比例傳代。

（二）免疫熒光染色

PBS漂洗后將不同分組中的細胞以4％多聚甲醛固定15min，然后以0.1％Triton X?100于室溫下穿孔處理10 min。5％BSA封閉處理1 h后，將細胞爬片以YAP一抗4℃條件下孵育過夜。PBS漂洗3次，再以Alexa Fluor 488免疫熒光二抗或AlexaFluor 594免疫熒光二抗室溫下繼續(xù)孵育1 h。PBS漂洗3次，室溫下DAPI染色孵育5min。再次PBS漂洗去除背景干擾。最后將細胞置于熒光顯微鏡下觀察。

（三）Western Blot檢測

收獲細胞，用RIPA裂解緩沖液裂解細胞，提取總蛋白。用蛋白定量檢測試劑盒對總蛋白進行定量。蛋白上樣量為25μg，SDS?PAGE法分離蛋白質(zhì)，將蛋白質(zhì)轉移到硝化纖維膜上，用5％脫脂牛奶進行封閉。然后使用相應一抗抗體進行孵育，4℃過夜。漂洗后再加入辣根過氧化物酶偶聯(lián)的抗兔二抗，室溫下孵育2 h。最后采用化學發(fā)光法對蛋白表達濃度進行檢測，選取GAPDH為內(nèi)參。條帶強度以Quantity One軟件進行相對定量。

（四）RT?PCR檢測

收獲細胞，PBS輕柔漂洗，并使用Trizol分別提取各組細胞的總RNA，按逆轉錄試劑盒的操作步驟逆轉錄得到cDNA，并選取逆轉錄產(chǎn)物進行實時熒光定量RT?PCR。CTGF、錨蛋白重復域1（ankyrin repeating domain 1，Ankrd1）、GAPDH引物標記采用熒光染料SYBR GreenⅠ（表1）。聚合酶鏈反應程序為：95℃預變性2min；95℃變性10 s，55℃退火30 s，72℃延伸30 s，該步驟循環(huán)40次；溶解曲線。反應結束后在PCR儀上讀取Ct值，并進行相應計算。以GAPDH為內(nèi)參。

（五）CCK?8法檢測細胞增殖

將不同分組細胞以2×103個/孔的密度種植于96孔板中。細胞分別予以LPA或不予以LPA進行處理，處理時間分別為1 d、2 d、3 d。將10μL的CCK?8染液加入每個孔中，于37℃條件下避光孵育2 h。之后于490 nm波長下微孔板分光光度計中讀取不同孔中的吸光度值（A490）并以此來計算細胞相對數(shù)量。種植細胞每24 h標記為1 d。記錄不同時間點分光光度計中的A490，并與2×103個細胞組A490進行比較計算出實際細胞數(shù)目，研究細胞增殖情況。

（六）流式細胞術檢測細胞周期

PBS漂洗細胞2次，70％冷乙醇于-20℃條件下孵育過夜。乙醇固定后的細胞以RNA酶于37℃條件下處理30min，然后以PI染液室溫下避光染色30min。PI染液的熒光強度采用流式細胞術進行檢測。數(shù)據(jù)采用FlowJo軟件進行分析。

（七）慢病毒載體的構建和轉染

將YAP特異性限制位點（NM_001034002）插入GV118質(zhì)粒中。YAP特異性抑制位點序列為GGCAATACGGAATATCAAT。插入YAP特異性抑制位點序列后的產(chǎn)物以雙酶切法及DNA測序法進行進一步驗證。之后采用Lipofectamine 2000將慢病毒載體系統(tǒng)轉染進入293T細胞，連續(xù)稀釋法測定病毒滴度。最后根據(jù)吉凱公司的操作說明將慢病毒轉染進入ASCs細胞中，并于24孔板中繼續(xù)培養(yǎng)。72 h后丟棄上清液，更換為普通DMEM培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

為了進一步研究LPA對YAP的調(diào)控作用，我們在LPA干預前利用shYAP慢病毒對YAP表達進行了特異性的敲除。慢病毒轉染成功后72 h再采用LPA對細胞進行干預，干預時間為24 h。隨機序列shRNA被標記為shControl組，YAP特異性敲除shRNA被標記為shYAP組。最后采用Western Blot對YAP蛋白表達進行分析。

慢病毒轉染ASCs后，采用LPA對ASCs進行進一步干預，干預時間為72 h，72 h后采用流式細胞術分析ASCs細胞周期，并利用CKK?8法于24 h、48 h和72 h對細胞進行計數(shù)。S及G2/M期細胞所占比例代表細胞增殖情況。

（八）GTP?RhoA檢測

利用RhoA檢測試劑盒對RhoA進行定量檢測。采用GST?rhotekin?RBD融合蛋白及谷胱甘肽樹脂下拉激活的RhoA。最后利用RhoA特異性抗體對激活的RhoA進行檢測。

采用RhoA特異性抑制劑C3（1mg/L）對LPA調(diào)控ASCs細胞的分子機制進行進一步研究。ASCs預先以C3干預2 h，再以LPA干預4 h，最后固定細胞進行免疫熒光及Western Blot分析。

三、統(tǒng)計學處理

表1　各基因引物序列

采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用oneway?ANOVA檢測。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結果

一、LPA對YAP表達的影響

將LPA（10μmol/L）加入ASCs細胞培養(yǎng)液中，作用時間共計1 h。結果顯示LPA可以顯著上調(diào)YAP蛋白的表達，隨著作用時間的延長，LPA對YAP蛋白的上調(diào)效益更加明顯（圖1）。CTGF和Ankrd1為YAP蛋白的下游靶基因，我們也采用Western Blot對CTGF的表達進行的分析。結果顯示，LPA（10μmol/L）亦可以顯著上調(diào)CTGF蛋白的表達，且該促進作用同樣具有時間依賴性（圖1）。同時，我們利用免疫熒光染色對YAP的亞細胞定位和表達進行分析，結果顯示LPA作用1 h后，YAP在細胞核內(nèi)表達得到明顯增強（圖2 a）。同時，RT?PCR檢測結果也進一步顯示LPA作用可以顯著促進CTGF的表達（圖2 b）。

二、shRNA慢病毒轉染對YAP表達的調(diào)控

研究shRNA慢病毒轉染對YAP的調(diào)控作用，采用Western Blot對YAP蛋白表達進行分析，結果顯示shYAP慢病毒轉染能特異性抑制YAP蛋白的表達，同時shYAP慢病毒敲除YAP之后LPA雖然依舊能夠輕微促進YAP表達，但其促進YAP表達的效果不明顯，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05，圖3）。而在shControl組中，LPA可顯著上調(diào)YAP的表達，且該促進效果差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，圖3）。

三、LPA對ASCs增殖的調(diào)控作用研究

圖1　LPA對YAP和CTGF表達的調(diào)控作用a～c：LPA能夠顯著上調(diào)YAP和CTGF的表達，且其促進作用具有時間依賴性。與0 min比較，*P＜0.05

圖2　LPA對YAP亞細胞定位及其靶基因表達的調(diào)控作用（Alexa Fluor 488染色，×200）a、b：LPA能顯著促進YAP在細胞核內(nèi)的表達，并上調(diào)其靶基因CTGF和Ankrd1的表達。與未加LPA比較，*P＜0.05

慢病毒轉染ASCs后，采用LPA對ASCs進行進一步干預，結果顯示與shControl組相比，shYAP組ASCs細胞增殖受到明顯抑制（P＜0.05）。shControl組+LPA與shControl組比較，可見LPA能夠顯著促進ASCs的增殖（P＜0.05，圖4），我們推測這種增殖效益可能與LPA能促進YAP的表達相關。同時，CCK?8計數(shù)結果顯示，shControl組中，LPA干預后的ASCs細胞增殖能力最強，而shYAP組ASCs細胞增殖能力被明顯抑制（圖4）。

四、RhoA?YAP通路在LPA調(diào)控ASCs中的作用研究

免疫熒光研究結果顯示，LPA（10μmol/L）能夠顯著促進YAP在細胞核內(nèi)的表達，加入RhoA特異性抑制劑C3（1mg/L）后，LPA對YAP細胞核內(nèi)表達的上調(diào)作用得到明顯減弱（圖5 a）。同時，Western Blot顯示RhoA特異性抑制劑C3干預可顯著抑制LPA對YAP、CTGF和GTP?RhoA的上調(diào)作用（圖5 b）。因此，我們的結果初步顯示LPA可能通過RhoA來調(diào)控YAP的表達，并進一步影響ASCs的增殖等生物學行為。

討論

圖3　慢病毒轉染ASCs細胞a、b：shYAP轉染能顯著抑制YAP表達，同時LPA對YAP表達的促進作用被shYAP轉染削弱。與shControl比較，*P＜0.05

圖4　ASCs細胞增殖情況a、b：利用流式細胞術分析細胞周期，結果顯示LPA可以顯著促進ASCs增殖，shYAP轉染后LPA對ASCs的促增殖作用得到明顯抑制；c：CCK?8法分析細胞增殖，結果進一步證實LPA能有效促進ASCs增殖，同時shYAP轉染抑制YAP表達后，LPA對ASCs促增殖作用得到明顯抑制。與shYAP比較，*P＜0.05；與shControl組比較，#P＜0.05

ASCs為具有多向分化潛能且分離獲取相對容易的一類成體干細胞，其臨床應用前景良好。ASCs能顯著促進受損組織或器官的功能恢復，相比骨髓間充質(zhì)干細胞而言，ASCs的分離獲取更加簡便、微創(chuàng)。Barba等［14］研究顯示ASCs在體外傳代次數(shù)更多，且增殖能力也更強。ASCs在骨修復和骨重建的過程中發(fā)揮著十分關鍵的作用，骨形態(tài)發(fā)生蛋白2與ASCs結合應用可以顯著促進其骨修復效果。Ma?rino等［15］研究顯示磷酸鈣三維支架可以顯著促進ASCs的成骨分化。Arrigoni等［16］采用羥基磷灰石或者種植有ASCs細胞的羥基磷灰石來治療脛骨骨缺損，他們以骨形態(tài)學、生物力學、免疫組化為研究指標，顯示種植有ASCs的羥基磷灰石支架與單獨羥基磷灰石支架相比可以顯著促進其骨缺損修復效果。Yeh等［17］發(fā)現(xiàn)ASCs在靶組織或器官中的數(shù)量對于提高治療效果至關重要。因此，對于ASCs增殖及其相關分子機制的研究意義重大。

圖5　LPA通過RhoA調(diào)控YAP表達（Alexa Fluor 594染色，DAPI染色，×200）a：免疫熒光分析顯示LPA可以促進YAP在細胞核內(nèi)表達，RhoA抑制劑C3能夠顯著削弱LPA對于YAP核內(nèi)表達的促進作用；b：RhoA抑制劑C3能夠削弱LPA對于YAP、CTGF及GTP?RhoA表達的促進作用

LPA能夠通過G蛋白偶聯(lián)受體來調(diào)控細胞的一系列生物學行為，其下游信號包括Ras、Rac和MAPK等［18］。下游信號通路的激活能進一步調(diào)控細胞的增殖、遷移、分化等生物學行為。Cai等［19］研究發(fā)現(xiàn)LPA?LPA3?G13?RhoA?ROCK?PP1A?dpYAP?AREG?EGFR信號軸在卵巢癌上皮細胞轉移中起著關鍵的作用。另Chen等［20］研究顯示在急性心肌梗死患者急性發(fā)病時間為48～72 h，LPA濃度可上升至10mg/L，可能是因為LPA可以通過調(diào)控間充質(zhì)干細胞的增殖或者存活以提供對心臟的保護作用。LPA也能夠抑制缺氧誘導的間充質(zhì)干細胞凋亡，并且LPA誘導凋亡的濃度與其在血液中的濃度（2～20μmol/L）十分一致［21］。Chen等［22］的研究進一步顯示LPA抗間充質(zhì)干細胞凋亡的分子機制可能與LPA1受體相關，LPA1受體的激活介導LPA對新生大鼠心臟成纖維細胞凋亡的調(diào)控。LPA也能夠通過LPA1受體來調(diào)控Schwann細胞的程序性細胞死亡［23?25］。LPA1下游的信號通路包括ERK1/2和PI3K/Akt通路，Li等［26］研究顯示這兩條通路與LPA對許多不同細胞的抗凋亡作用關系密切?？紤]到LPA是具有多種生物學活性的脂類小分子，若能通過LPA調(diào)控ASCs的增殖將有助于進一步優(yōu)化ASCs對相關的疾病的治療效果。

我們擬闡明LPA對ASCs的調(diào)控作用及其相關分子機制。本實驗結果表明LPA能顯著促進YAP的表達和在細胞核內(nèi)的聚集，同時LPA也能夠促進YAP靶基因CTGF在蛋白水平的表達。LPA能進一步上調(diào)YAP靶基因CTGF和Ankrd1在mRNA水平的表達。之后我們利用慢病毒轉染特異性敲除YAP表達，以研究LPA對YAP表達的調(diào)控作用。結果顯示LPA在shControl組中可顯著促進YAP的表達，而在shYAP組中，LPA對YAP的上調(diào)作用得到明顯抑制。隨后利用流式細胞術和CCK?8對ASCs的增殖能力進行了分析研究，結果顯示LPA可明顯促進ASCs的增殖，我們推測這種促進增殖能力可能和LPA對YAP的上調(diào)作用相關。同時，利用shYAP特異性敲除YAP表達后，LPA對ASCs增殖能力的促進作用得到明顯削弱。最后，利用RhoA抑制劑C3特異性抑制RhoA的表達，顯示LPA能夠促進YAP和GTP?RhoA的表達，RhoA抑制劑C3干預能顯著抑制LPA誘導的YAP的表達和細胞核的聚集，同時CTGF表達也得到明顯下調(diào)。Qiao等［27］研究顯示RhoA分子在細胞增殖、遷移等生物學行動中也十分關鍵，但是缺乏RhoA與YAP間存在上下游的直接調(diào)控關系的充分證據(jù)。本研究通過RhoA抑制劑C3對RhoA表達進行調(diào)控，從而初步揭示了RhoA和YAP的上下游調(diào)控關系，該結果具有較大意義，但是需要進行進一步的研究去證實RhoA和YAP間相互作用的直接分子機制。

本實驗中，我們研究結果初步證實LPA可有效促進ASCs的增殖，該促增殖效應可能由RhoA/YAP通路來介導。我們的研究結果進一步證實了LPA?RhoA?YAP信號通路在調(diào)控細胞生物學行為中的重要作用。與之前的研究不同的是，我們的研究重點集中于細胞增殖及其分子機制研究ASCs的增殖及其分子機制對于提高ASCs相關的干細胞治療效果及其在再生醫(yī)學中的應用。同時，本研究也存在一定的不足之處，LPA介導細胞的一系列生物學行為，但是LPA在細胞膜上的受體較多，包括LPA1、LPA2和LPA3［28］。LPA與不同受體的結合可能導致細胞出現(xiàn)完全不同的生物學行為，而該研究中并未涉及。我們將在下一步的研究中對此進行深入研究，以期進一步明確LPA對ASCs增殖的調(diào)控作用和分子機制。

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Lysophosphatidic acid regulates the proliferation of adipose?derived stem cells via the RhoA/YAP signaling pathway.

YE Yaping,LIMi,WU Yingxing,HUANG Junming,YINWeifeng,GUO Fengjin.Depart?ment ofOrthopaedics,TongjiHospital,TongjiMedical College,Huazhong University ofScience and Technology, Wuhan 430030,China
Corresponding author:GUOFengjin,E?mail:fjguo@tjh.tjmu.edu.cn

Objective To study the role andmolecularmechanism of lysophosphatidic acid(LPA)in regulating adipose?derived stem cells(ASCs)proliferation.M ethods ASCs were isolated from SD rats and treated with LPA for 1 h.Western blotting was applied to detect the expression of YAP and CTGF proteins. Immunofluorescence stainingwas performed to detect YAP subcellular localization.RT?PCRwas used to detect the expressions of YAP target genes CTGF and Ankrd1.Western blotting was done to detect YAP protein expression after lentivirus transfection.Flow cytometry and CCK?8 assaywere carried out to detect the prolifera?tion of ASCs in different groups.Finally,RhoA inhibitor C3 was utilized and YAPwas subcellularly localized by immunofluorescence staining.The expression of YAP,CTGF and GTP?RhoA was examined byWestern blot?ting.Results LPA could significantly promote the expression and nuclear localization of YAP.LPA could also promote the expression of YAP targetgene CTGF.The RT?PCR also showed that LPA promoted the expression of YAP targetgenes CTGF and Ankrd1.The promotion effectof LPA on YAP protein expressionwas abrogated after shYAP lentivirus transfection.LPA could also significantly promote proliferation of ASCs as demonstrated by the flow cytometry and CCK8 assay.However,the effectwas abrogated by transfection of shYAP lentivirus. The effectof LPA on YAPnuclear localization was abrogated by RhoA inhibitor C3 treatment.C3 treatmentalso abrogated the effect of LPA on YAP,CTGF and GTP?RhoA protein expression.Conclusion LPA could promote proliferation ofASCsvia the RhoA/YAPsignaling pathway.

Lysophosphatidic acid;Adipose?derived stem cells;RhoA?YAP signaling pathway;Cell proliferation

10.3969/j.issn.1674?8573.2016.06.011

國家自然科學基金資助項目（81371915）

430030武漢，華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院骨科

郭風勁，E?mail：fjguo@tjh.tjmu.edu.cn

（2016?05?13）