黃淑芳，王才益，卞慶松，應志豪，于學偉，龔利洋，陳玎玎

(杭州市虎跑路 杭州動物園，浙江杭州 310008)

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BC-2800Vet獸用全自動血液細胞分析儀應用于部分野生動物紅白細胞計數(shù)的探討

黃淑芳，王才益，卞慶松，應志豪，于學偉，龔利洋，陳玎玎

(杭州市虎跑路 杭州動物園，浙江杭州 310008)

野生動物血細胞形態(tài)各異，大小差異較大，其血細胞計數(shù)最準確的方法除傳統(tǒng)的手工計數(shù)外，市場上出現(xiàn)的獸用血細胞分析儀對其適應性均在探索中。筆者通過杭州動物園圈養(yǎng)的25種野生動物73份血液樣本采用BC-2800Vet獸用全自動血液細胞分析儀進行血細胞分析，探索其合適的檢測通道。通過紅細胞大小、手工計數(shù)等參數(shù)的比較，初探出黇鹿、羊駝、馬鹿、梅花鹿、毛冠鹿、黑麂采用綿羊通道檢測結(jié)果較可靠，鬣羚、旋角羚羊采用山羊通道檢測結(jié)果較可靠，大象、黑猩猩、黑白疣猴、金絲猴、狼、赤大袋鼠采用猴通道檢測結(jié)果較理想，非洲獅、黑豹、金貓、小熊貓、南美海獅則采用貓通道檢測結(jié)果較好，東南亞虎、白虎、北方貉則采用狗通道檢測結(jié)果較可靠，白狐則采用豬通道檢測結(jié)果較理想。

血細胞計數(shù)；動物檢測通道；野生動物

1947年美國科學家?guī)鞝柼?W.H.Coulter)發(fā)明了用電阻法計數(shù)粒子的專利技術，1956年又將該技術應用于血細胞計數(shù)獲得成功，其原理是根據(jù)血細胞非傳導性質(zhì)，以電解質(zhì)溶液中懸浮血細胞在通過計數(shù)小孔時引起的電阻變化進行檢測為基礎，進行血細胞計數(shù)和體積測定，這種方法稱為電阻法或庫爾特原理[1]。

1962年，我國第一臺血細胞計數(shù)儀在上海研制成功。在20世紀60年代未血細胞分析儀除可進行血細胞計數(shù)外，還可同時測定HGB血紅蛋白；70年代，進行血小板計數(shù)；80年代，研究出白細胞分類(3分類及5分類)；90年代，則開發(fā)出了對網(wǎng)狀紅細胞進行計數(shù)的血細胞分析儀，同時5分類及幼稚細胞檢測也更成熟，并發(fā)展成為血細胞分析流水線，即計數(shù)、涂片染色和讀片一體化。

野生動物疾病診斷的重要方式之一就是血液細胞計數(shù)技術。動物發(fā)病時各種病理變化都會導致內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變，體液，特別是血液，是內(nèi)環(huán)境的重要組成部分。臨床上通過測定血常規(guī)生理指標可為疾病的診斷、治療和判斷預后提供參考。其中紅細胞數(shù)量、紅細胞大小、血紅蛋白含量測定,對各種貧血的鑒別診斷有著重要意義,是分析貧血性質(zhì)不可缺少的指標之一。白細胞計數(shù)在指導動物疾病診斷和治療中起著非常重要的作用。

野生動物血細胞形態(tài)各異，大小差異較大，目前除了使用傳統(tǒng)的手工方式計數(shù)外，市面上也開發(fā)了很多獸用血細胞分析儀。筆者通過杭州動物園收集的25種野生動物73份血液樣本采用BC-2800Vet獸用全自動血液細胞分析儀進行血細胞分析，探索其合適的檢測通道，現(xiàn)簡介如下，供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑 BC-2800Vet獸用全自動血液細胞分析儀，應用阻抗法進行紅白細胞計數(shù)，血紅蛋白濃度應用比色法測量，體積計量由體積計量單元中的體積計量管和兩個光電傳感器測定。EDTA-K2抗凝管，載玻片，瑞氏-姬姆薩染色液(BaSO)，冰醋酸，10 g/L亞甲藍，微量管，血細胞計數(shù)板等。

1.2 血液樣本 采自杭州動物園圈養(yǎng)的25種野生動物血液樣本共73份，其中黇鹿、羊駝各11份，小熊貓10份，馬鹿6份，梅花鹿4份，黑猩猩、非洲獅各3份，黑白猶猴、金絲猴、黑豹、狼、棕熊、黑熊、南美海獅各2份，毛冠鹿、黑麂、鬣羚、旋角羚羊、大象、金貓、東南亞虎、白虎、赤大袋鼠、北方貉、白狐各1份。

1.3 白細胞目視計數(shù) 采用稀醋酸將采集的野生動物血液樣品稀釋并破壞紅細胞，混勻后，滴入計數(shù)盤中，顯微鏡下計數(shù)四個大方格內(nèi)白細胞總數(shù)N，N/20，單位×109/L[1]。涂片厚度為8 μL血液涂成6 cm×2.5 cm，染色后用低倍鏡觀察血涂片的細胞分布情況，選擇體尾交界染色良好處，計數(shù)100～200個白細胞進行白細胞分類。手工計數(shù)方法每個血液樣本采血后均在2 h內(nèi)完成檢測，檢測環(huán)境溫度為25℃左右。

1.4 選擇檢測通道方法 根據(jù)動物細胞大小選擇相應的動物檢測通道進行檢測。然后與手工計數(shù)的結(jié)果進行比對，探索其合適的檢測通道。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同動物細胞大小與檢測通道 通過探索發(fā)現(xiàn)紅細胞平均直徑在4.0(3～5)μm左右的采用山羊、綿羊通道，紅細胞平均直徑在5.0(4～7)μm左右的采用貓通道，紅細胞平均直徑在6.0(5～7)μm左右的采用狗通道，紅細胞平均直徑7.5(6～9)μm左右的采用猴通道，結(jié)果與手工檢測比較接近。測定的細胞大小與其他動物園報道所測動物血細胞大小結(jié)果相近[2]。

2.2 試驗結(jié)果比較選擇檢測通道方法 詳見表1。

表1 不同野生動物紅、白細胞計數(shù)檢測結(jié)果

由表1結(jié)果比較，可初步看出食草動物中黇鹿、羊駝、馬鹿、梅花鹿、毛冠鹿、黑麂采用綿羊通道檢測數(shù)值較準確；鬣羚和旋角羚羊采用山羊通道檢測較好；大象細胞較大最好采用手工，采用猴通道檢測則可作為參考；黑猩猩、黑白疣猴、金絲猴、狼、赤大袋鼠則采用猴通道檢測數(shù)值比較可靠；非洲獅、黑豹、金貓、小熊貓、南美海獅則采用貓通道檢測數(shù)值較穩(wěn)定；東南亞虎、白虎則采用狗或貓通道檢測較好；棕熊、黑熊、北方貉采用狗通道檢測，白狐采用豬通道檢測較好。

3 小結(jié)與討論

3.1 BC-2800Vet獸用全自動血液細胞分析儀共有14個檢測通道，通過對73份野生動物血液樣本分析可以得出其對部分動物可以進行準確的紅、白細胞計數(shù)及血紅蛋白測定。每個通道檢測的MCV都有一個范圍，在選擇不同檢測通道時，一般可結(jié)合紅細胞大小和動物屬性確定，但由于形態(tài)上的差異，旋角羚羊采用綿羊通道，東南亞虎、白虎采用貓通道，其檢測結(jié)果均不理想。

3.2 細胞形態(tài)判斷，血細胞分析儀可能出現(xiàn)假陽性或假陰性，在開發(fā)非常完善的人類血細胞分析中都非常重視復檢的重要性[3-6]，涂片顯微鏡復檢不僅能彌補儀器對形態(tài)鑒別的不足，還能直觀評估和驗證血細胞分析儀檢測結(jié)果的可行性。由于動物血細胞形態(tài)各不相同，每個血液樣本都應進行血涂片，在顯微鏡下觀察，并進行白細胞分類，觀察40*高倍鏡下白細胞數(shù)量及紅細胞形態(tài)。BC-2800Vet獸用全自動血液細胞分析儀，理論上可實現(xiàn)狗、貓、馬、猴、奶牛等白細胞3分類，山羊、綿羊、豬、駱駝和水牛通道的白細胞分類則較為困難，應采用手工分類。

3.3 BC-2800Vet獸用全自動血液細胞分析儀的精密度較好，即重復性較好，但為使結(jié)果準確度較高應每半年進行一次室內(nèi)質(zhì)控。一般結(jié)果除山羊和駱駝通道外,其他結(jié)果均可作為參考。

3.4 采用BC-2800Vet獸用全自動血液細胞分析儀檢測時能用全血檢測的情況下盡量采用全血模式進行檢測，因為手工采血過程會有個人誤差存在。采用預稀釋法時，稀釋液與血液融合的時間一定要達5 min，跟人類血細胞融合時間相同[7]，這樣結(jié)果比較可靠。注重儀器的保養(yǎng)，操作中應按正確步驟進行，可延長儀器的壽命和維護周期[8-9]。定期對采樣針應用專用浸泡液進行浸泡，出現(xiàn)堵孔時一定要多次清洗通道，本底做出結(jié)果在標準范圍內(nèi)后才可進行下一個樣本的檢測。

3.5 本次試驗25種動物中，部分動物血液樣本只有1～2份，因同種動物血細胞有時會存在差異性，如黑白疣猴這次檢測用猴通道和狗通道檢測結(jié)果均差異不大，馬鹿采用馬和綿羊通道檢測紅細胞數(shù)量相近，但檢測的白細胞數(shù)量差異較大，這些動物的檢測通道尚需進一步探討分析，以探索其最適檢測通道。

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2016-08-16

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