宋 斌，陳 雁，吳修偉，常 娟，周 璐，張榮耀，李章志，張 霞，章正華，萬楚成

（十堰市太和醫(yī)院湖北醫(yī)藥學院附屬醫(yī)院血液科，湖北十堰442000）

176例成人急性髓細胞白血病免疫表型分析及其與療效、復發(fā)關系的研究

宋 斌，陳 雁，吳修偉，常 娟，周 璐，張榮耀，李章志，張 霞，章正華，萬楚成

（十堰市太和醫(yī)院湖北醫(yī)藥學院附屬醫(yī)院血液科，湖北十堰442000）

目的 探討成人急性髓細胞白血?。ˋML）免疫表型的特點及其與療效、復發(fā)的關系。方法 選擇2013年2月至2014年2月期間在我院血液科進行治療的176例成年AML患者進行免疫表型檢測，隨訪觀察24個月，記錄復發(fā)的數(shù)據(jù)。結果 176例AML患者中髓系特異性抗原主要陽性表達依次為CD13（165例、93.75%）、CD117（115例、65.34%）、CD33（109例、61.93%）、MPO（81例、46.02%）、CD64（51例、28.98%）；造血干/祖細胞標記抗原主要陽性表達依次為CD38（122例、69.32%）、HLA-DR（94例、53.41%）、CD34（85例、48.30%），在176例AML患者中伴有淋系抗原陽性表達的有79例，主要為CD56（58例、32.95%）、CD7（31例、17.61%）。在176例患者中，123位患者化療1至2個療程后達到完全緩解，其中：HLA-DR、CD34、CD7、CD19等4個抗原表達陽性的患者的緩解率低于表達為陰性的患者（P＜0.05）；在24個月的隨訪觀察中，123例得到緩解的患者當中25例出現(xiàn)復發(fā)，其中患者HLA-DR、CD34、CD7陽性表達的患者復發(fā)比例高（P＜0.05）。結論 CD13、CD33、CD38等抗原在AML患者中表達較高，其中44.88%的患者伴有淋系抗原的表達；而患者具有CD7、CD34、CD56、HLA-DR表達陽性后出現(xiàn)緩解的預期值相對較低，當患者出現(xiàn)CD34、CD56、HLA-DR表達陽性后增加其復發(fā)的概率。

AML； 免疫表型； 化療； 效果； 復發(fā)

急性髓細胞白血病（acute myeloid leukemia，AML）是血液科常見的惡性腫瘤，由于白血病的FAB分型主觀性較強，近年來流式細胞分析方法（flow cytometry，F(xiàn)CM）被廣泛應用于白血病的檢測，白血病的免疫分型在臨床上得到明顯的重視，據(jù)報道［1］白血病的免疫表型與治療效果及預后之間存在一定的關聯(lián)，為此筆者對急性髓性白血病患者的免疫表型及其與療效、復發(fā)的關系進行了針對性的研究。

材料和方法

1 對象與分組

選擇176例2013年2月至2014年2月期間在我院血液科進行治療的成年AML患者作為研究對象，經(jīng)診斷所有患者均符合AML的診斷標準［2］，根據(jù)FAB分型，其中 5例為M0、6例為M1、80例為M2、31例為M3、18例為M4、35例為M5、1例為M6（以M2，M3，M5為最常見類型）。其中男性 93例，女性83例，中位年齡42.4（26～72）歲。所有患者均為初次接受治療。

2 儀器與試劑

Epics XL流式細胞儀，多甲藻葉綠素蛋白（Per CP）、紅蛋白（PE）、異硫氰酸熒光素（FITC），CD2、CD3、CD20等抗體（均購買自美國Beckman Coulter公司）。

3 檢驗方法

抽取骨髓液2mL，以肝素抗凝，于采樣后24小時內檢測。試管中加入肝素抗凝骨髓液50μL及熒光標記抗體各20μL，放在避光37℃孵育15min，之后加2mL紅細胞裂解液震蕩混勻，沉淀10min，離心棄去上清，利用磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌沉淀物2次，加入15mLPBS，流式細胞儀檢測。免疫分型參考標準［3］。

4 治療方案與評判標準

AML患者采用含阿糖胞苷方式進行化療，包括：阿糖胞苷、柔紅霉素（DA方案），阿糖胞苷、去甲氧柔紅霉素（IA方案）以及阿糖胞苷、吡柔比星（TA方案），以推薦的劑量進行化療，治療2個療程。利用三氧化二砷、全反式維甲酸聯(lián)合化療治療M3型患者。以張之南等編寫的《血液病診斷及療效標準》［4］作為患者完全緩解的參考標準。

5 統(tǒng)計學處理

統(tǒng)計學軟件采用SPSS16.0中文版，計數(shù)資料比較采用卡方檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

1 AML患者抗原表達及治療情況

以異常細胞群表面抗原陽性超過20%為抗原陽性表達，176例AML患者多種抗原呈陽性表達（見表1），其中髓系特異性抗原主要陽性表達依次為CD13（93.75%）、CD117（65.34%）、CD33（61.93%）、MPO（46.02%）、CD64（28.98%）；造血干/祖細胞標記抗原主要陽性表達依次為CD38（69.32%）、HLADR（53.41%）、CD34（48.30%），在176例AML患者中伴有淋系抗原陽性表達的有79例，主要為CD56（32.95%）、CD7（17.61%）?；颊咴诨?個療程獲得緩解的有123人，緩解率為69.88%，123人中25人在2年的隨訪中出現(xiàn)復發(fā)，復發(fā)率為20.32%。

表1 AML患者各類抗原表達情況（例）

2 髓系抗原表達與療效的關聯(lián)

主要的陽性表達髓系特異性抗原對應的緩解率分別是CD13+69.70%、CD13-72.73%；CD117+73.43%、CD117-68.85%；CD33+69.72%、CD33-70.15%；MPO+75.30%、MPO-65.26%；CD64+66.67%、CD64-71.20%。陽性與陰性表達之間的

緩解率均無明顯統(tǒng)計學差異，P＞0.05，表2。

表2 主要的陽性表達髓系特異性抗原與緩解的關聯(lián)

3 造血干/祖細胞標記抗原表達與療效的關聯(lián)

主要的陽性表達造血干/祖細胞標記抗原對應的緩解率分別是CD34+62.35%、CD34-79.12%；HLA-DR+60.64%、HLA-DR-80.49%；CD38+66.39%、CD38-77.77%，其中CD34與HLA-DR陽性與陰性表達之間的緩解率存在明顯統(tǒng)計學差異，P＜0.05，表3。

表3 主要的陽性表達造血干/祖細胞標記抗原與緩解的關聯(lián)

4 淋系抗原表達與療效的關聯(lián)

主要的陽性表達淋系抗原對應的緩解率分別是CD56+58.62%、CD56-75.42%；CD7+54.83%、CD7-73.10%，兩個抗原陽性與陰性表達之間的緩解率均存在明顯統(tǒng)計學差異，P＜0.05，表4。

表4 主要的陽性表達淋系抗原與緩解的關聯(lián)

5 抗原陽性與復發(fā)的關聯(lián)

在兩年的隨訪中，獲得緩解的123人中有25人復發(fā)，對陽性與陰性表達之間的緩解率存在明顯差異的4個抗原進行回顧分析，分類計算復發(fā)率，CD34+28.30%、CD34-14.28%；HLA-DR+28.07%、HLA-DR-13.63%；CD56+35.29%、CD56-14.60%；CD7+35.29%、CD7-17.92%，其中具有HLA-DR+、CD34+、CD56+表達的患者復發(fā)率更高，存在明顯統(tǒng)計學差異，P＜0.05，表5。

表5 抗原陽性與復發(fā)的關聯(lián)

討 論

白血病是造血干細胞發(fā)生高度異質性病變的惡性克隆性疾病，是嚴重威脅我國成人及青少年的惡性腫瘤。檢測急性白血病的方法常用形態(tài)學檢查，這是最基本的分型方法，對判斷、識別白血病原始細胞的所屬類別、增生程度都具有較好的臨床價值，但是其診斷符合率常常不足60% ～80%［5-6］，免疫分型是通過分析細胞內外表達的特殊抗原，對白血病細胞的來源和分化進行精細分析，具有樣本分析準確率高、速度快、重復性好等優(yōu)點，近年來在血液系統(tǒng)惡性腫瘤的診斷中得到了廣泛的應用。

在本研究收集的樣本中，常見的髓系抗原表達為CD13（93.75%）、CD117（65.34%）、CD33（61.93%）、MPO（46.02%）、CD64（28.98%），與葛繁梅［7］的報道一致，與許曉東、鹿群先等［8-9］報道的CD33是AML患者最高表達的抗原不相符；而HLADR、CD38、CD34是造血干/祖細胞表面的標記抗原，所有AML患者中有79例伴有淋系抗原陽性表達（包括CD56、CD7），這與相關報道一致［10］。考慮出現(xiàn)此類情況應與樣本數(shù)量有關，樣本數(shù)量沒有足夠大時，偏差往往存在，總的來說，髓系抗原、造血干/祖細胞標記抗原、淋系抗原陽性表達符合文獻預期。

所有患者中，根據(jù)FAB分型，其中M2、3、5三種

類型患者的例數(shù)超過 20，以M3抗原表達做最高，CD13等髓系抗原的表達次之，而僅在淋系抗原和造血干細胞標記抗原中CD38高表達，與其他分型差異較大［11］，這也從側面揭示M3型治療、預后與其他分型不同提供了佐證。相對來說，髓系抗原表達在各分型中，表達較為平均，而造血干/祖細胞標記抗原尤其CD34、HLA-DR在分化程度相對較低的類型如M1、2、4型中表達較高，同時CD7、CD56等淋系抗原也擁有和干/祖細胞抗原相似的抗原，在M1、2、4型中表達較高。

在我們的研究中，我們觀察到表達較高的髓系抗原與治療效果之間并不存在明顯的關聯(lián)；而相對髓系抗原來說，表達較低的干/祖細胞抗原與淋系抗原，一旦陽性表達，患者往往具有較差的緩解率與較高的復發(fā)率。以CD56為例，CD56是主要表達在NK細胞以及部分T細胞表面上的抗原，與細胞粘附有關聯(lián)，表達增高后，往往提示患者復發(fā)的可能性更高，與報道［12］的結果也類似，但是目前尚無大規(guī)模的臨床研究對此提供支持，因此這一觀點仍有爭議，也有研究認為CD56陰性或陽性表達與患者復發(fā)關聯(lián)較小，但王會芳等［13］也認為CD56陽性是分化較差的白血病類型。

根據(jù)我們在臨床中的實踐，研究人員傾向認為，此類抗原往往表達不高，但是一旦表達也提示腫瘤變異程度可能更高，從而出現(xiàn)上述結果，但是也有可能與研究的方法、樣本數(shù)量或者治療方案的差異有關，需要進一步大樣本的觀察。

總的來說，就我們的研究分析認為，白血病的免疫分型與患者的治療效果及復發(fā)之間存在有一定的關聯(lián)，具有進一步研究的價值。

［1］谷芳娜，李國輝，劉利，等.急性髓系白血病染色體核型及免疫表型分布及治療后臨床療效分析.昆明醫(yī)科大學學報，2015，36（3）：113-116.

［2］van Dongen J J，Lhermitte L，Biittcher S，et al.EuroFlow antibody panelsforstandardizedn-dimensionalflowcytometric immunophenotyping of normal，reactive and malignant leukocytes.Leukemia，2012，26（9）：1908-1975

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［8］許曉東，趙聲明，鄭天林，等.多參數(shù)流式細胞術在成人急性髓系白血病免疫表型中的應用.白血病淋巴瘤，2009，18（5）：270-271

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［11］王清霞，張秋堂，岳保紅，等.成人急性髓性白血病免疫學表型分析.鄭州大學學報（醫(yī)學版），2008，43（4）：779-781.

［12］許曉東，胡翠華，常乃柏，等.成人急性髓細胞白血病免疫分型特點及臨床預后分析.中國實驗診斷學，2010，14（3）：423-426.

［13］王會芳，蘇顯都，于彩霞，等.125例成人急性髓系白血病免疫表型特點分析.解放軍醫(yī)學院學報，2015，36（4）：363-367.

（潘子昂編輯）

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Phenotype Analysis in Adult Acute Myeloid Leukemia and Its Relationship with Remission/Recurrence

SONG Bin，CHEN Yan，WU Xiu-wei，CHANG Juan，ZHOU Lu，ZHANG Rong-yao，LI Zhang-zhi，ZHANG Xia，ZHANG Zheng-hua，WANG Chu-cheng
（Department of Hematology，Taihe Hospital Affiliated Hospital of Hubei Medical College，Shiyan 442 000，China）

Objective To investigate the immune phenotype characteristics of adultacute myeloid leukemia（AML）and its efficacy.Methods We selected 176 cases of adult AML patients who were admitted in our hospital hematology treatment from February 2013 to February 2014.Immunophenotyping was performed in all subjects and patients were followed up for 24 months.Results AML patients with positive expression in myeloid-specific antigen were CD13（165 Li，93.75%），CD117（115 Li，65.34%），CD33（109 Li，61.93%），MPO（81 cases，46.02%），CD64（51 cases，28.98%）.Hematopoietic stem and progenitor cell marker antigen expression of major／were CD38（122 Li，69.32%），HLA-DR（94 Li，53.41%），CD34（85，48.30%）.Lymphoid antigen expression was found in 79 cases out of 176 cases of AML patients，mainly for CD56（58 Li，32.95%），CD7（31 cases，17.61%）.123 patients with chemotherapy 1-2 rounds achieved complete remission.HLA-DR，CD34，CD7，CD19 positive expression rates were lower in complete remission patients（P＜0.05）.After 24 month follow-up，25out of 123 patients had recurrence.The patients with HLADR，CD34，CD7 expression had higher recurrent rate（P＜0.05）.Conclusion CD13，CD33，CD38 expressions were higher in AML patients，of which 44.88%patients had lymphoid antigen expression.The patients who had positive CD7，CD34，CD56 and HLA-DRwere less likely to go into remissions.The patients who had positive CD34，CD56 and HLA-DR expression were more likely to have recurrence.

AML； Phenotype； Chemotherapy； Effect； Relapse

10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.11.028

2016-05-31；

2016-06-20