向 娟，吳佳妮，唐 兵

（成都市第六人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，四川成都610051）

CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板參數(shù)在重癥肺炎患者中表達(dá)的意義

向 娟，吳佳妮，唐 兵

（成都市第六人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，四川成都610051）

目的 探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板參數(shù)在重癥肺炎患者中表達(dá)的意義。方法 收集2013年5月至2015年10月我院診斷為肺炎的患者，共計(jì)80例，進(jìn)一步分為重癥肺炎組28例和肺炎組52例。對(duì)照組為同期健康體檢者，共50例。對(duì)比重癥肺炎組、肺炎組和對(duì)照組入院時(shí)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板參數(shù)水平，并且分析重癥肺炎組死亡患者與存活患者入院時(shí)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板參數(shù)水平。結(jié)果 ①重癥肺炎組、肺炎組和對(duì)照組入院時(shí)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平、MPV及PLT結(jié)果比較有差異（P＜0.05）；重癥肺炎組、肺炎組和對(duì)照組入院時(shí)PDW、PCT結(jié)果比較無(wú)差異（P＞0.05）。②重癥肺炎組死亡患者與存活患者入院時(shí)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平、MPV及PLT結(jié)果比較有差異（P＜0.05）；重癥肺炎組死亡患者與存活患者入院時(shí)PDW、PCT結(jié)果比較無(wú)差異（P＞0.05）。結(jié)論 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、MPV及PLT可作為反應(yīng)肺炎嚴(yán)重程度的敏感指標(biāo)，并且可作為評(píng)價(jià)重癥肺炎患者預(yù)后的客觀指標(biāo)。

CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞； 血小板參數(shù)； 重癥肺炎

肺炎是指終末氣道、肺泡及肺間質(zhì)的炎癥，可由病原微生物、理化因素、免疫損傷、過(guò)敏及藥物所致。美國(guó)疾病預(yù)防控制中心在2013年的一份報(bào)告中提示肺炎住院患者的病死率平均為12%，入住重癥監(jiān)護(hù)室者約40%［1］。而且隨著人口老齡化、吸煙、環(huán)境的變化，該比例仍居高不下。引起肺炎患者死亡的主要因素與免疫功能低下有關(guān)，此外大氣污染、生物因子也是誘因。臨床各科都可能會(huì)遇到重癥肺炎患者，如何評(píng)價(jià)患者的免疫功能，進(jìn)行早期診斷及治療是本研究的問(wèn)題。血小板參數(shù)主要包括平均血小板體積（MPV）、血小板壓積（PCT）、血小板分布寬度（PDW）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）等指標(biāo)，有學(xué)者對(duì)比了輕、重癥肺炎的血小板參數(shù)后發(fā)現(xiàn)，重癥肺炎的MPV、PCT、PDW、PLT升高更為顯著，可能與內(nèi)毒素誘發(fā)的骨髓代償性增生活力有關(guān)［2］。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞不同于以往的細(xì)胞亞群等，即總體上，他們主要執(zhí)行免疫負(fù)調(diào)控功能，很多實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)的下降有利于感染細(xì)胞的清除。還有研究發(fā)現(xiàn)50歲以上健康老年人組外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例高于健康成人組，可能與免疫衰老的發(fā)生有關(guān)［3］。因此本次研究擬收集2013年5月至2015年10月我院診斷為重癥肺炎的患者，探討 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞及血小板參數(shù)在重癥肺炎患者中表達(dá)的意義。

材料和方法

1 病例選擇

收集2013年5月至2015年10月我院診斷為肺炎的患者，共計(jì)80例，進(jìn)一步分為：28例重癥肺炎組和52例肺炎組。對(duì)照組為同期健康體檢者，共50例。重癥肺炎組平均年齡48.5±12.4歲，男性18例，女性10例；肺炎組平均年齡49.7±11.5歲，男性29例，女性23例；對(duì)照組平均年齡50.4±15.4歲，男性28例，女性22例，3組人員性別，年齡無(wú)差異。

2 入選標(biāo)準(zhǔn)

①重癥肺炎參考美國(guó)胸科協(xié)會(huì)及美國(guó)感染協(xié)會(huì)2007年制定的指南［2］；肺炎符合第8版《實(shí)用內(nèi)科學(xué)》制定的標(biāo)準(zhǔn)［2］。②自愿參加試驗(yàn)。③無(wú)免疫抑制劑或激素使用史。

3 排除標(biāo)準(zhǔn)

①入院前服用過(guò)抗生素。②有其他系統(tǒng)感染性。③免疫功能低下、患有惡性腫瘤。④肺血栓栓塞、肺結(jié)核者。

4 檢測(cè)方法

血樣抽取后立刻派專(zhuān)人送檢進(jìn)行檢查。

4.1 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞測(cè)定 ①抽取肘部靜脈血，EDTA抗凝，每個(gè)標(biāo)本分為2管，分別標(biāo)記為染色管和對(duì)照管。染色管加入CD4-PE和CD25-FITC各10μL，另一管加入 CD4-PE和Ig G1-FITC各10μL。②加溶血?jiǎng)?00μL，避光10min，加入PBS液500μL離心后，放入水浴箱靜置10min，放入流式細(xì)胞儀中。計(jì)算軟件為CXP-cytometer。

4.2 血小板參數(shù)檢測(cè) 使用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行檢測(cè)：MPV、PCT、PDW、PLT。

5 評(píng)價(jià)方法

①對(duì)比重癥肺炎組、肺炎組和對(duì)照組入院時(shí)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板參數(shù)水平。②分析重癥肺炎組死亡患者與存活患者入院時(shí)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板參數(shù)水平。

6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

1 重癥肺炎組、肺炎組和對(duì)照組入院時(shí)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板參數(shù)水平

重癥肺炎組、肺炎組和對(duì)照組入院時(shí)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平、MPV及PLT結(jié)果比較有差異（P＜0.05）；重癥肺炎組、肺炎組和對(duì)照組入院時(shí)PDW、PCT結(jié)果比較無(wú)差異（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 重癥肺炎組、肺炎組和對(duì)照組入院時(shí)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板參數(shù)水平

2 重癥肺炎組死亡患者與存活患者入院時(shí)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板參數(shù)水平

重癥肺炎組死亡患者與存活患者入院時(shí)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平、MPV及PLT結(jié)果比較有差異（P＜0.05）；重癥肺炎組死亡患者與存活患者入院時(shí)PDW、PCT結(jié)果比較無(wú)差異（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 重癥肺炎組死亡患者與存活患者入院時(shí)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板參數(shù)水平對(duì)比

討 論

1 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性細(xì)胞的來(lái)源及功能

調(diào)節(jié)性細(xì)胞包括CD4+CD25+細(xì)胞、Tr1和Th3等多種亞型，目前研究最為廣泛的為 CD4+CD25+調(diào)節(jié)細(xì)胞［3］。CD4+CD25+調(diào)節(jié)細(xì)胞分為自然型和誘導(dǎo)型，前者主要在胸腺內(nèi)發(fā)育，后者是在周?chē)芨鞣N抗原反復(fù)刺激誘導(dǎo)下產(chǎn)生［4］。人類(lèi)外周循環(huán)中CD4+CD25+調(diào)節(jié)細(xì)胞在維持機(jī)體免疫內(nèi)環(huán)境的起著重要作用，主要表現(xiàn)在免疫抑制和免疫無(wú)能性?xún)纱蠊δ芴卣?。前者表現(xiàn)在調(diào)節(jié)性T細(xì)胞能夠抑制CD4+和CD8+細(xì)胞的活化和增殖，后者表現(xiàn)在各種刺激原均能刺激CD4+CD25+調(diào)節(jié)細(xì)胞的增生［5］。本研究我們發(fā)現(xiàn)重癥肺炎組、肺炎組和對(duì)照組入院時(shí)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平結(jié)果比較有差異（P＜0.05）。我們分析重癥肺炎患者入院時(shí)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性細(xì)胞數(shù)目增多與免疫功能受損、功能下降有關(guān)。還有學(xué)者對(duì)重癥肺炎患者進(jìn)行自身對(duì)照研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)入院時(shí)患者 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性細(xì)胞數(shù)目明顯增高，患者在接受積極治療后，出院時(shí)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性細(xì)胞數(shù)目明顯降低。

2 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性細(xì)胞與免疫的關(guān)系

CD4+CD25+調(diào)節(jié)細(xì)胞數(shù)量異常或功能紊亂時(shí)會(huì)干擾機(jī)體的免疫力，使感染不能控制。有學(xué)者曾經(jīng)分析過(guò)健康人群外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)，老人外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)細(xì)胞呈增多趨勢(shì)［6］。因此推測(cè)CD4+CD25+調(diào)節(jié)細(xì)胞與免疫下降有關(guān)。本次研究發(fā)現(xiàn)重癥肺炎組、肺炎組和對(duì)照組入院時(shí)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平結(jié)果比較有差異，此外在重癥肺炎組死亡患者與存活患者中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞也存在差異。我們分析重癥肺炎患者體內(nèi)免疫力下降，造成感染持續(xù)不能得到有效控制。在免疫下降過(guò)程中，表現(xiàn)為炎癥抗原刺激后使記憶效應(yīng)性細(xì)胞寡克隆擴(kuò)增和胸腺萎縮。當(dāng)機(jī)體受到病原微生物攻擊后，免疫反應(yīng)不能有效地應(yīng)答［7］。同樣還有學(xué)者［8］指出在重癥肺炎患者的胸腺細(xì)胞中存在CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的積聚現(xiàn)象，而患者在接受丙種球蛋白、粒細(xì)胞集落刺激因子等有效治療后，在出院時(shí)體內(nèi)循環(huán)的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞大幅度下降［9］。由于CD4+CD25+調(diào)節(jié)細(xì)胞在發(fā)生、表型、功能等方面均與小鼠體內(nèi)的CD4+CD25+T細(xì)胞很相似，有學(xué)者［10］通過(guò)敗血癥大鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ桶l(fā)現(xiàn)，CD4+CD25+調(diào)節(jié)細(xì)胞在大鼠血及氣管黏膜中顯著增多，并且能夠分泌大量抑制性的細(xì)胞因子，抑制正常細(xì)胞的增殖，可能途徑是參與編碼轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的基因調(diào)控來(lái)抑制NK細(xì)胞、B細(xì)胞的活性［11］。

此外對(duì)于近幾年來(lái)許多研究表明肺癌、胰腺癌、胃癌、結(jié)腸癌等免疫低下患者中存在外周血和腫瘤浸潤(rùn)部位的CD4+CD25+調(diào)節(jié)細(xì)胞大量累積現(xiàn)象［12］。還有學(xué)者［13］發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者外周血中的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞高于良性乳腺腫物患者和健康志愿者。此外CD4+CD25+調(diào)節(jié)細(xì)胞過(guò)高，會(huì)抑制抗腫瘤免疫，使機(jī)體容易催患腫瘤等疾病［14］。

3 正常血小板參數(shù)的意義

血小板指數(shù)包括MPV、PCT、PDW、PLT等4項(xiàng)指標(biāo)。PLT是計(jì)數(shù)血小板的數(shù)量，反映血小板生成和衰亡的動(dòng)態(tài)平衡。MPV代表平均血小板體積大小，主要反映骨髓中巨核細(xì)胞的增生、代謝及血小板的生成情況，反應(yīng)血小板的超微結(jié)構(gòu)及功能。PDW

代表血小板體積分布寬度，是血小板體積差異程度的一個(gè)參數(shù)［14］。PCT反映單位容積的全血中血小板體積所占的比例。

4 血小板參數(shù)與肺炎的關(guān)系

本次研究發(fā)現(xiàn)重癥肺炎組、肺炎組和對(duì)照組入院時(shí)MPV及PLT水平結(jié)果比較有差異，此外在重癥肺炎組死亡患者與存活患者中MPV及PLT也存在差異。重癥肺炎患者體內(nèi)感染嚴(yán)重，菌血癥、毒血癥使血小板破壞增多，并導(dǎo)致產(chǎn)血小板產(chǎn)物的代償性增多，此外感染也會(huì)刺激骨髓巨核細(xì)胞產(chǎn)生血小板過(guò)多［15］。因此重癥肺炎患者體內(nèi)PLT明顯高于肺炎組和對(duì)照組。還有學(xué)者指出重癥肺炎發(fā)生后，會(huì)造成毛細(xì)血管低氧狀態(tài)，使完整的血管內(nèi)皮受到破壞，使血小板易于黏附、聚集于血管粗糙的內(nèi)壁上，導(dǎo)致破壞加速，從而刺激骨髓巨核細(xì)胞的增生代謝及血小板生成，使外周循環(huán)池中產(chǎn)生大量新生血小板。而MPV與骨髓中巨核細(xì)胞的增生、代謝及血小板生成密切相關(guān)，MPV顯示外周循環(huán)池中單個(gè)血小板超微結(jié)構(gòu)和功能狀態(tài)。即外周血血小板破壞增加后，骨髓發(fā)生代償功能，促進(jìn)成熟的巨核細(xì)胞的胞質(zhì)轉(zhuǎn)化為血小板，在此過(guò)程中使平均MPV增大。還有研究［18］指出肺炎急性期時(shí)，會(huì)使肺血管內(nèi)皮細(xì)胞合成和釋放血小板活化因子，使血小板活化增強(qiáng)，過(guò)度激活，而大體積血小板比小體積血小板更容易被活化。還有學(xué)者指出肺炎時(shí)低氧，病原微生物及其毒素作為始動(dòng)因子可引起機(jī)體的微血管內(nèi)皮損傷，激活在血小板聚集的過(guò)程中，會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的肺循環(huán)障礙，甚至多器官功能衰竭，加重肺炎。本次研究發(fā)現(xiàn)重癥肺炎組死亡患者與存活患者M(jìn)PV比較無(wú)差異，但是重癥肺炎組與對(duì)照組MPV之間有差異，我們分析可能與本研究樣本量過(guò)少，影響研究結(jié)果。

因此，本次研究認(rèn)為CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、MPV及PLT可作為反應(yīng)肺炎嚴(yán)重程度的敏感指標(biāo)，并且可作為評(píng)價(jià)重癥肺炎患者預(yù)后的客觀指標(biāo)。

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（潘子昂編輯）

Expression of CD4+CD25+Regulatory T Cells and Platelet Parameters in Patients with Severe Pneumonia

XIANG Juan，WU Jia-ni，TANG Bing
（Department of Critical Medicine，Chengdu Sixth People’s Hospital，Chengdu 610051，China）

Objective To investigate the significance of CD4+CD25+regulatory T cells and platelet parameters in patients with severe pneumonia.Methods A total of 80 patients with pneumonia in our hospital from May 2013 to October 2015 were collected，and further divided into 28 cases of severe pneumonia group and 52 cases of pneumonia group.The control group had 50 cases from healthy physical examination during the same period.CD4+CD25+regulatory T cells and platelet parameters were compared and analyzed.Results①CD4+CD25+regulatory T cells，MPV and PLT were different among severe pneumonia group，pneumonia group and control group（P＜0.05）.PDW and PCT showed no difference among severe pneumonia group，pneumonia group and control group（P＜0.05）.②CD4+CD25+regulatory T cells，MPV and PLT were different between died patients and alive patients with severe pneumonia.There was no difference between PDW，PCT and MPV in patients with severe pneumonia（P＞0.05）.Conclusion The study suggests that CD4+CD25+regulatory T cells，MPV and PLT can be used as a sensitive indicator of the severity of the response in pneumonia，and they can be used as an objective index to evaluate the prognosis of patients with severe pneumonia.

CD4+CD25+regulatory T cells； Platelet parameters； Severe pneumonia

10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.11.018

2016-06-16；

2016-07-19

向娟，女，碩士，主治醫(yī)師。Tel：15328006823