劉 佩，趙旭鴻

（上海市楊浦區(qū)中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海200090）

乙肝五項(xiàng)、HBV-DNA定量及乙肝前S1抗原聯(lián)合檢測用于診斷乙肝的臨床價(jià)值分析

劉 佩，趙旭鴻

（上海市楊浦區(qū)中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海200090）

目的 分析乙肝五項(xiàng)與病毒（HBV）前S1抗原及病毒DNA的相關(guān)性，并探討聯(lián)合檢測對乙肝診斷的臨床價(jià)值。方法 選取本院門診部和住院部2013年10月至2015年10月期間收治的患者作為研究對象，收集其HBsAg陽性血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測其前S1抗原和乙肝五項(xiàng)，采用熒光定量PCR法檢測其HBV-DNA水平，對比分析不同模式下前S1抗原的表達(dá)水平和HBV-DNA的水平，并分析其相關(guān)性。結(jié)果 乙肝前S1抗原陽性率與HBV-DNA陽性率在不同HBV-M模式下比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。此外①+③+⑤+組中HBV-DNA陽性拷貝數(shù)較高，多數(shù)高于105copies/mL；而①+④+⑤+、①+②+、①+③+、①+④+和①+⑤+組的前S1+與前S1-組相比，其HBV-DNA陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。HBsAg陽性血清標(biāo)本中前S1抗原在HBeAg+組中陽性率明顯高于HBeAg-組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），HBsAg陽性血清標(biāo)本中前S1抗原與HBeAg具有一定的相關(guān)性。HBsAg陽性血清標(biāo)本中前S1抗原在HBV-DNA+組中陽性率明顯高于在HBV-DNA-組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），HBsAg陽性血清標(biāo)本中前S1抗原與HBV-DNA具有一定的相關(guān)性。結(jié)論 前S1抗原可較好反映乙肝病毒存在和復(fù)制的情況，將前S1與乙肝五項(xiàng)和HBV-DNA進(jìn)行聯(lián)合檢測可較早發(fā)現(xiàn)較低水平病毒的感染，其可作為抗病毒療效的評判指標(biāo)，對乙肝的臨床診斷和療效評價(jià)均具有較好的應(yīng)用價(jià)值。

乙肝兩對半； DNA； 前S1抗原； 乙肝病毒； 臨床診斷

乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）感染目前已成為全球性公共衛(wèi)生難題，并且不同的地區(qū)其流行性有很多差異，世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計(jì)目前全球的乙肝攜帶者已達(dá)3.5億，其攜帶率高達(dá)5%［1-2］。同時(shí)乙肝也是我國近年來廣泛流行的一種病毒性肝炎，其感染率約達(dá)70%，而攜帶率也達(dá)10%，對其給予及時(shí)的診斷、預(yù)防和治療工作具有重要的意義。臨床上常采用乙肝病毒的血清標(biāo)志物（HBV-M）即乙肝五項(xiàng)或乙肝兩對半對受試者進(jìn)行檢測，分別為：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb［3］，這五項(xiàng)血清標(biāo)志物可用于對患者的病程和傳染性進(jìn)行判斷，其組合的模式較多，往往會受到藥物的治療、病毒的變異和方法學(xué)等影響，但對于乙肝病毒的復(fù)制及其傳染性均不易得到充分反映，造成了漏診以及誤診的發(fā)生［4-5］。隨著熒光定量PCR的迅速發(fā)展，對HBV-DNA進(jìn)行定量檢測也越來越容易，從而更直接地檢測患者體內(nèi)HBV的復(fù)制狀態(tài)，陽性檢出目前被作為HBV感染及復(fù)制的金標(biāo)準(zhǔn)，但這種方法成本較高且需要特殊的儀器，對基層醫(yī)院的實(shí)施造成了障礙［6-7］。前S1抗原作為一項(xiàng)檢測HBV感染和復(fù)制的血清學(xué)指標(biāo)，其臨床診斷價(jià)值收到了越來越多的青睞。本次研究通過分析上述三種檢測方法的相關(guān)性，探討了其用于乙肝檢測的臨床價(jià)值，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

材料和方法

1 一般資料

選取本院門診部和住院部2013年10至2015年10月期間收治的300例受試者作為研究對象，其中男173例，女127例；年齡分布為18～72歲，平均年齡為37.8±6.6歲。收集受試者其HBsAg陽性血清213例，所有患者均排除其他各種原因引發(fā)的惡性腫瘤、肝功能異常、免疫系統(tǒng)疾病、急慢性感染疾病和血液系統(tǒng)疾病等，所有受試者均自愿參與本次研究，且均已簽署有本院倫理委員會編制的知情同意書。

2 方法

本次研究所有受試者均需記錄詳細(xì)的臨床信息和相關(guān)病史及家族史，采用由本院編制的調(diào)查表對各受試者問詢記錄?；颊呷朐汉蟠稳涨宄烤崭钩槿∑?mL肘正中的靜脈血，3000r/min，離心5min后存于-20℃待用。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑盒（由上海榮盛生物科技有限公司和上海阿爾法生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)提供），操作步驟均嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，然后采用Multiskan MK3酶標(biāo)儀檢測乙肝五項(xiàng)和乙肝前S1抗原水平，采用熒光定量PCR法檢測HBV-DNA的含量，對其乙肝病毒的感染情況進(jìn)行評價(jià)。采用Bio-Rad CFX926 PCR儀，當(dāng)其檢測值低于5×102copies/mL時(shí)則可判定其為HBV-DNA為陰性。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本次研究所有數(shù)據(jù)均采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，其中計(jì)數(shù)資料采用百分率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，將P＜0.05定為結(jié)果具有顯著性差異。

結(jié) 果

1 不同HBV-M模式下前S1抗原和HBVDNA的檢測結(jié)果

為方便描述，本次研究將HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb五項(xiàng)血清標(biāo)志物分別表示為①、②、③、④和⑤。本次研究共獲得213例HBsAg陽性血清標(biāo)本，將其按照乙肝兩對半的結(jié)果分為6組，我們發(fā)現(xiàn)乙肝前S1抗原陽性率與HBVDNA陽性率在不同HBV-M模式下比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具體見表1。

表1 不同HBV-M模式下S1抗原和HBV-DNA的檢測結(jié)果比較（n，%）

2 HBsAg陽性模式中前S1抗原與HBV-DNA水平相關(guān)性

將HBsAg陽性模式的每個(gè)組分為前S1抗原陽性和陰性兩種情況，共計(jì)6種模式，其中①+③+⑤+組中HBV-DNA陽性拷貝數(shù)較高，多數(shù)高于105copies/mL；而①+④+⑤+、①+②+、①+③+、①+④+和①+⑤+組的前S1+與前S1-組相比，其HBV-DNA陽性率經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具體見表2。

表2 213例HBsAg陽性模式中前S1抗原與HBV-DNA水平相關(guān)性分析（n）

3 HBsAg陽性血清標(biāo)本中前S1抗原與HBeAg的相關(guān)性

本次研究中，HBeAg陽性血清標(biāo)本中前S1抗原在HBeAg+組中陽性率（71.4%）明顯高于HBeAg-組（17.2%），經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，具有顯著性差異（P＜0.05）。HBsAg陽性血清標(biāo)本中前S1抗原與HBeAg具有一定的相關(guān)性，具體見表3。

表3 213例HBsAg陽性血清標(biāo)本中前S1抗原與HBeAg的相關(guān)性分析［n（%）］

4 HBsAg陽性血清標(biāo)本中前S1抗原與HBVDNA的相關(guān)性

本研究中，HBsAg陽性血清標(biāo)本中前S1抗原在HBV-DNA+組中陽性率（94.4%）明顯高于在HBVDNA-組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，具有顯著性差異（P＜0.05），HBsAg陽性血清標(biāo)本中前S1抗原與HBV-DNA具有一定的相關(guān)性，具體見表4。

表4 213例HBsAg陽性血清標(biāo)本中前S1抗原與HBV-DNA的相關(guān)性分析［n（%）］

討 論

乙肝病毒是雙鏈環(huán)狀DNA病毒，其前S1蛋白主要在Dane顆?；蚬苄皖w粒中存在，對病毒的裝配、復(fù)制、感染及刺激機(jī)體的免疫反應(yīng)等方面均具有重要作用［8］。該蛋白的21～47位肽段可介導(dǎo)病毒對肝細(xì)胞進(jìn)行黏附，并與細(xì)胞膜上相應(yīng)的受體結(jié)合，還可與細(xì)胞膜上IL-6識別位點(diǎn)進(jìn)行結(jié)合［9-10］。前S1蛋白還含有肝細(xì)胞膜的受體，免疫原性較高，與病毒侵入肝細(xì)胞及其復(fù)制均有密切的關(guān)系。

本次研究對乙肝五項(xiàng)、前 S1抗原和HBV-DNA含量進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)HBsAg陽性血清標(biāo)本中前S1抗原和HBV-DNA檢出率均較高，而HBsAg陰性時(shí)前S1抗原和HBV-DNA檢出率均較低。由此可見，前S1抗原檢出主要在HBsAg陽性模式中，推測與編碼

前S1蛋白的基因及編碼HBsAg的基因均位于HBV開放閱讀框的S區(qū)相關(guān)。此外，本研究發(fā)現(xiàn)①+②+、①+③+、①+④+和①+⑤+組中的HBsAg呈陰性時(shí)仍有部分血清其HBV-DNA可檢出，由此可見患者體內(nèi)HBsAg呈陰性或出現(xiàn)了HBsAb無法說明HBV-DNA復(fù)制的停止或傳染性消失，僅可說明患者體內(nèi)乙肝病毒使其復(fù)制的能力下降。表明HBV前S1抗原基本可以作為乙肝患者體內(nèi)病毒復(fù)制情況的指標(biāo)，所以可作為病毒感染的診斷依據(jù)［11］。

在臨床對傳統(tǒng)的血清學(xué)標(biāo)志物兩對半的判讀中，HBeAg是HBV在宿主復(fù)制和傳染程度的主要臨床指標(biāo)，當(dāng)出現(xiàn)時(shí)可表明病毒的復(fù)制活躍度和傳染性均較高；而 HBeAb出現(xiàn)則可說明病毒復(fù)制降低和傳染性降低［12-14］。本次研究中，HBeAg+大三陽組其前S1和HBV-DNA的陽性率均高于其他組別；特別是大三陽前S1+組中HBV-DNA的拷貝數(shù)較高，為高拷貝復(fù)制。由此可見，HBeAg與病毒的復(fù)制具有較高的相關(guān)性，可反映病毒的復(fù)制和傳染性情況，HBeAg+的前S1陽性率也較高，說明HBeAg轉(zhuǎn)陰或HBeAg產(chǎn)生時(shí)前S1表達(dá)水平也會下降，由此可見前S1與HBeAg具有一定的相關(guān)性，并且HBeAg與前S1同時(shí)呈陽性時(shí)，HBV-DNA呈高拷貝復(fù)制，并且HBsAg+時(shí)其前S1+組中HBV-DNA的陽性率均明顯高于其余前S1-組，可見前S1抗原與HBV-DNA的含量具有較好的相關(guān)性。

綜上所述，傳統(tǒng)的乙肝五項(xiàng)可反映機(jī)體感染HBV后的免疫狀態(tài)，但無法明確其感染的確切狀態(tài)，也無法反映病毒的復(fù)制情況；對HBV-DNA進(jìn)行定量檢測，可對其感染及復(fù)制情況有個(gè)較精確的了解，但由于其價(jià)格較昂貴，并且需要特殊的儀器，而前S1抗原則既可反映HBV復(fù)制的情況，又可彌補(bǔ)由于病毒變異等原因造成的HBeAg無法被檢出而影響診斷的情況［15-16］。所有采用血清學(xué)標(biāo)志物聯(lián)合前S1或HBV-DNA的定量檢測用于早期低水平病毒感染的發(fā)現(xiàn)可全面而快速了解乙肝患者的病情，可將其作為抗病毒治療過程中療效評價(jià)的指標(biāo)，對臨床診斷及病情的觀察均具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

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（潘子昂編輯）

The Analysis of Diagnostic Value of Combined Pre-S1 Antigen and HBV-DNA and Multi-5 Test Panel in Hepatitis B Detection

LIU Pei，ZHAO Xu-hong
（Clinical Laboratory，Central Hospital of Shanghai Yangpu District，Shanghai 200090，China）

Objective To analyze multi-5 test panel of hepatitis b virus（HBV），pre-S1 antigen and the correlation of the viral DNA，and to explore the clinical value of diagnosis of combined detection of hepatitis B.Methods We selected the outpatients and inpatients in our hospital during October 2013 to October 2015 as the research objects.Collected HBsAg positive serum samples were used for enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）to detect pre-S1 and multi-5 test panel and fluorescent quantitative PCR method to detect the HBV-DNA.The comparative analysis of different conditions of pre-S1 antigen and HBV-DNA content was conducted and their correlation was analyzed.Results When the positive rates of pre-S1 antigen and HBVDNA in different HBV-M mode were compared，the differences were not significant（P＞0.05）.The positive rate of pre-S1 antigen in HBeAg positive group was higher than that of control group，the difference was statistically significant（P＜0.05）.In HBsAg positive serum samples，pre-S1 and HBeAg were correlated. The positive rate of Pre-S1 antigen in HBV-DNA group was higher than control group，the difference was statistically significant（P＜0.05）.In HBsAg positive serum samples，Pre-S1 antigen and HBV-DNA were correlated.Conclusion Pre-S1 antigen can better reflect the existence and hepatitis B virus replication.The combination detection of pre-S1，multi-5 test panel and HBV-DNA for HBV can detect early virus infections.It can be used as antiviral efficacy indicator.It might have applicable value in the clinical diagnosis and treatment of Hepatitis B infection.

Two pairs of semi-hepatitis B； DNA； Pre-S1 antigen； Hepatitis B virus；Clinical diagnosis

10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.11.011

2016-02-23；

2016-09-20