許為民，徐 靜，萬(wàn) 瑛

（江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇鎮(zhèn)江212001）

抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體在診斷類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的意義

許為民，徐 靜，萬(wàn) 瑛

（江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇鎮(zhèn)江212001）

目的 探討抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體（anti-mutated citrullinated vimentin antibody，Anti-MCV）在診斷類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）中的價(jià)值。方法 選取確診的RA患者51例（RA組）、非RA自身免疫性疾病患者36例（疾病對(duì)照組）和健康查體者30例（對(duì)照組）作為研究對(duì)象。根據(jù)臨床資料計(jì)算DAS28評(píng)分，將RA組分為活動(dòng)組和穩(wěn)定組。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)血清中的抗MCV抗體、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）及白細(xì)胞介素-6（IL-6）水平，采用免疫比濁法檢測(cè)血清中C-反應(yīng)蛋白（CRP）的濃度水平，并進(jìn)行比較。結(jié)果 RA組抗MCV抗體的濃度水平顯著高于非RA組和對(duì)照組（P均＜0.01）；活動(dòng)組抗MCV抗體的濃度水平顯著高于穩(wěn)定組和對(duì)照組（P均＜0.01）；經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，抗MCV抗體的濃度水平與CRP及IL-6呈正相關(guān)，而與DAS28無(wú)相關(guān)性；抗MCV抗體與抗CCP抗體的診斷效率無(wú)顯著差異，但是靈敏度高于抗CCP抗體。結(jié)論 抗MCV抗體具有較高的靈敏度和特異性，并且能提示RA病情的活動(dòng)情況，可以成為新的輔助RA診斷的血清學(xué)指標(biāo)。

抗MCV抗體； 抗CCP抗體； 白細(xì)胞介素-6； 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種常見(jiàn)的慢性、進(jìn)行性自身免疫性疾病，發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，臨床表現(xiàn)為不可逆的關(guān)節(jié)破壞與畸形，最終導(dǎo)致患者勞動(dòng)力的喪失，因此早期診斷與治療對(duì)疾病的控制有著至關(guān)重要的意義［1］。目前，RA的診斷除了依靠臨床癥狀、X線檢查外，還需要結(jié)合血清學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)。近年來(lái)有研究表明，抗MCV抗體與RA患者病情的活動(dòng)度及關(guān)節(jié)的放射學(xué)改變有關(guān)，但仍然存在著爭(zhēng)議［2-4］。本文通過(guò)對(duì)RA患者血清中抗MCV抗體、抗CCP抗體及炎性指標(biāo)的檢測(cè)，探討抗MCV抗體在RA診斷中的意義。

資料與方法

1 研究對(duì)象

1.1 RA患者組 收集2015年3月至2015年11月期間江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院風(fēng)濕科住院的RA患者51例，其中男性9例，女性42例，年齡36～78（59.2± 10.9）歲。所有患者的診斷均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)會(huì)（ACR）和歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟（EULAR）2010年修訂的RA分類標(biāo)準(zhǔn)（ACR/EULAR2010標(biāo)準(zhǔn)）。根據(jù)DAS28≥5.1病情高度活動(dòng)；DAS28 3.2～5.1病情中度活動(dòng)；DAS28 2.6～3.2病情低度活動(dòng)；DAS28≤2.6病情緩解的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，將RA患者分為活動(dòng)組和穩(wěn)定組。

1.2 非RA組 收集同時(shí)期與RA患者性別及年齡相匹配的其他自身免疫性疾病患者38例，其中系統(tǒng)性紅斑狼瘡25例，強(qiáng)直性脊柱炎4例，皮肌炎2例，干燥綜合征3例，結(jié)締組織病4例。所有患者的臨床診斷均符合目前國(guó)內(nèi)或國(guó)際上通用的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 健康對(duì)照組 同期選擇與RA患者性別及年齡相匹配的江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院健康查體人員30例，排除類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及其他自身免疫性疾病、感染、腫瘤等。上述三組病例的年齡、性別分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2 標(biāo)本采集

所有病例均空腹采集靜脈血3mL，3000rpm/min離心10 min，收集血清標(biāo)本，-20℃保存至實(shí)驗(yàn)時(shí)，一次性凍融后測(cè)定。

3 試劑和測(cè)定方法

采用德國(guó) ORGENTEC公司的Alegria自身免疫全自動(dòng)定量分析系統(tǒng)測(cè)定血清中抗MCV抗體的濃度水平；采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定血清抗CCP抗體和IL-6的濃度水平，試劑盒分別由上海富純中南生物技術(shù)有限公司和美國(guó)RB公司提供；采用美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司的IMMAGE 800特種蛋白分析儀檢測(cè)血清CRP的濃度水平，試劑盒由貝克曼庫(kù)爾特公司提供。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用GraphPad Prism 5.0軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman檢驗(yàn)，均以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 各組間抗MCV抗體的濃度值比較

RA組的抗MCV抗體的水平（212.3± 34.6U/mL）明顯高于非 RA組（19.48±4.1U/mL）（t=4.662，P＜0.01）及健康對(duì)照組（5.4±0.4U/ mL）（t=4.578，P＜0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。活動(dòng)組抗MCV抗體的濃度水平（373.7±56.7U/mL）顯著高于穩(wěn)定組（72.6±8.7U/mL）（t=6.222，P＜0.01）及健康對(duì)照組（5.4±0.4U/mL）（t=7.792，P＜0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)圖1。

2 血清抗MCV抗體的水平與其他炎性指標(biāo)的相關(guān)性分析

我們將抗MCV抗體的水平與DAS28、CRP及IL-6經(jīng)Spearman進(jìn)行相關(guān)分析。結(jié)果顯示，血清抗MCV抗體的水平和CRP及IL-6呈正相關(guān)，但是和DAS28無(wú)相關(guān)性。見(jiàn)圖2。

3 抗MCV抗體與抗CCP抗體對(duì)RA的診斷效率的比較

我們分別比較了抗MCV抗體和抗CCP抗體的診斷效率?？筂CV抗體的靈敏度（81.3%）高于抗

CCP抗體（75%），特異性相似分別為 93.7%、94.2%。ROC曲線下面積分別為92.2、87.5。（Z= 0.946，P=0.620＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 抗MCV抗體、抗CCP抗體診斷效率的比較

討 論

長(zhǎng)期以來(lái)，RA的實(shí)驗(yàn)室診斷主要依靠傳統(tǒng)檢測(cè)項(xiàng)目類風(fēng)濕因子（RF），但由于 RF的靈敏度及特異性均不夠理想，常常導(dǎo)致臨床診斷的偏差。近年來(lái)，越來(lái)越多的抗瓜氨酸化蛋白抗體（ACPAS）在RA患者體內(nèi)被發(fā)現(xiàn)，由于這些抗體表現(xiàn)出較高的特異性和靈敏度而得到廣泛的研究和關(guān)注?？筂CV抗體作為ACPAS家族的新成員，我們?cè)噲D全面了解其在RA診斷中的意義。

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，RA患者外周血中抗MCV抗體的濃度水平顯著增高（P＜0.01）且活動(dòng)期尤其明顯（P＜0.01），提示RA患者體內(nèi)抗MCV抗體水平的變化與疾病的活動(dòng)度有關(guān)，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)患者血清中的水平有助于判斷病情的活動(dòng)性。

DAS28、CRP、ESR是目前公認(rèn)的能夠有效地評(píng)估RA病情活動(dòng)性的指標(biāo)，抗MCV抗體和這些指標(biāo)的關(guān)系也成為討論研究的焦點(diǎn)。Yousefghahari B等［5］通過(guò)研究表明血清抗MCV抗體的水平和 DAS28無(wú)相關(guān)性，Mansour H E等［6］的研究結(jié)果卻是血清抗MCV抗體的水平和DAS28密切相關(guān)，Sizova L［2］通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明血清抗MCV抗體的水平與DAS28、腫脹關(guān)節(jié)數(shù)、壓痛關(guān)節(jié)數(shù)均無(wú)相關(guān)性，卻與紅細(xì)胞沉降率（ESR）及類風(fēng)濕因子（RF-IgM）成正相關(guān)。Liu X等［3］發(fā)現(xiàn)抗MCV抗體與DAS28、CRP、ESR、抗 角蛋白 抗體（AKA）、抗核周因子（APF）等均無(wú)相關(guān)性。我們的數(shù)據(jù)結(jié)果顯示抗 MCV抗體與 DAS28無(wú)相關(guān)性，但是卻與CRP成正相關(guān)。我們分析各結(jié)果大相徑庭的原因可能與標(biāo)本量的多少、分期不同的患者所占的比例以及藥物治療等影響因素有關(guān)，此外DAS28在評(píng)判腫脹關(guān)節(jié)和壓痛關(guān)節(jié)數(shù)，存在著一定的主觀偏差，也是導(dǎo)致結(jié)果不相一致的直接原因。

近年來(lái)，越來(lái)越多的研究報(bào)道證明炎癥、感染、創(chuàng)傷導(dǎo)致的蛋白質(zhì)瓜氨酸化，可能是RA自身抗原的主要來(lái)源［7-9］。IL-6是一種多效性的細(xì)胞因子，能夠調(diào)控免疫反應(yīng)及炎癥反應(yīng)，在RA的病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用且IL-6的水平與疾病的活動(dòng)度有密切的關(guān)系。同時(shí)最近有文獻(xiàn)報(bào)道IL-6除了能刺激B淋巴細(xì)胞分化，還能誘導(dǎo)濾泡輔助性T細(xì)胞的成熟，證明IL-6和自身抗體的大量分泌有密切的關(guān)系［10］。那RA患者體內(nèi)過(guò)度的瓜氨酸化是否和IL-6相關(guān)？于是我們將抗MCV抗體與IL-6進(jìn)行了相關(guān)性分析，結(jié)果顯示抗MCV抗體和IL-6成正相關(guān)，提示 RA患者體內(nèi)過(guò)度的瓜氨酸化可能會(huì)誘導(dǎo)IL-6的大量分泌，從而刺激B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生大量的自身抗體，繼而誘發(fā)一系列的免疫反應(yīng)，導(dǎo)致RA患者滑膜關(guān)節(jié)不可逆的炎性改變。這為闡明復(fù)雜的RA病理機(jī)制提供了新的研究思路。

此外有報(bào)道稱［11-12］，抗MCV抗體的滴度水平還對(duì)早期RA患者的預(yù)后，特別是骨的侵蝕性的發(fā)展，具有指導(dǎo)意義。高濃度水平的抗MCV抗體和骨的侵蝕性有很好的相關(guān)性，而低濃度的抗MCV抗體與RA患者的預(yù)后無(wú)關(guān)。由于我們的受試對(duì)象中，早期初發(fā)的患者較少，暫時(shí)還不能得出明確的結(jié)論，有待于后續(xù)進(jìn)一步的研究。

最后我們比較了抗MCV抗體、抗CCP抗體的對(duì)RA的診斷效能。在 ACR/EULAR2010新的標(biāo)準(zhǔn)中，血清學(xué)檢測(cè)首次將抗CCP抗體納入其中，抗CCP抗體的診斷價(jià)值得到了肯定。我們的數(shù)據(jù)顯示，抗MCV抗體的敏感度高于抗CCP抗體，為81.3%，特異度僅比抗CCP抗體低0.5%，達(dá)到93.7%，其敏感度和特異度均達(dá)到滿意。同時(shí)抗MCV抗體ROC曲線下的AUC面積也高于抗 CCP抗體，為92.2，但是兩者的診斷效能沒(méi)有差別。

綜上所述，抗MCV抗體在RA診斷中具有較高的靈敏度和特異性，同時(shí)與RA病情活動(dòng)密切相關(guān)，抗MCV抗體可以成為RA新的血清學(xué)指標(biāo)，對(duì)于早期不典型患者或者抗CCP抗體為陰性的患者，聯(lián)合檢測(cè)抗MCV抗體，可以減少RA的漏診率。

［1］Magyari L，VarszegiD，KovesdiE，etal.Interleukins and interleukin receptors in rheumatoid arthritis：Research，diagnostics and clinical implications.World J Orthop，2014，5（4）：516-536.

［2］Sizova L.Diagnostic value of antibodies to modified citrullinated vimentin in early rheumatoid arthritis.Hum Immunol，2012，73（4）：389-392.

［3］Liu X，Jia R，Zhao J，et al.The role of anti-mutated citrullinated vimentin antibodies in the diagnosis of early rheumatoid arthritis.J Rheumatol，2009，36（6）：1136-1142.

［4］Fabris M，De Vita S，Blasone N，et al.Serum levels of anti-CCP antibodies，anti-MCV antibodies and RF IgA in the follow-up of patients with rheumatoid arthritis treated with rituximab.Auto Immun Highlights，2010，1（2）：87-94.［5］Yousefghahari B，AlhooeiS，Soleimani-AmiriMJ，etal.Comparison of sensitivity and specificity of anti-CCP and anti-MCV antibodies in an Iranian cohort of patients with rheumatoid arthritis.Caspian J Intern Med，2013，4（3）：702-706.

［6］Mansour H E，Metwaly K M，Hassan I A，et al.Antibodies to mutated citrullinated vimentininrheumatoidarthritis：diagnosticvalue，association with radiological damage and axial skeleton affection.Clin Med Insights Arthritis Musculoskelet Disord，2010，3：33-42.

［7］Valesini G，Gerardi M C，Iannuccelli C，et al.Citrullination and autoimmunity.Autoimmun Rev，2015，14（6）：490-497.

［8］Sohn D H，Rhodes C，Onuma K，et al.Local Joint Inflammation and Histone Citrullination in a Murine Model of the Transition From PreclinicalAutoimmunitytoInflammatoryArthritis. Arthritis Rheumatol，2015，67（11）：2877-2887.

［9］Pruijn G J.Citrullination and carbamylation in the pathophysiology of rheumatoid arthritis.Front Immunol，2015，6：192.

［10］Tangye S G，Ma C S，Brink R，et al.The good，the bad and the ugly-TFH cells in human health and disease.Nat Rev Immunol，2013，13（6）：412-426.

［11］Degboe Y，Constantin A，Nigon D，et al.Predictive value of autoantibodiesfromanti-CCP2， anti-MCVandanti-human citrullinated fibrinogen tests，in early rheumatoid arthritis patients with rapid radiographic progression at 1 year：results from the ESPOIR cohort.RMD Open，2015，1（1）：e000180.

［12］Ruyssen-Witrand A，van Steenbergen H W，van Heemst J，et al.A new classificationofHLA-DRB1allelesbasedonacid-base properties of the amino acids located at positions 13，70 and 71：impact on ACPA status or structural progression，and meta-analysis on 1235 patients with rheumatoid from two cohorts（ESPOIR and EAC cohort）.RMD Open，2015，1（1）：e000099.

（李 凌編輯）

The Diagnostic Value of Anti-mutated Citrullinated Vimentin Antibodies in Patients with Rheumatoid Arthritis

XU Wei-min，XU Jing，WAN Ying
（The Affiliated Hospital of Jiangsu University，Zhenjiang 212001，China）

Objective To investigate the diagnostic value of Anti-mutated CitrullinatedVimentin（anti-MCV）antibodies in patients with rheumatoid arthritis（RA）.Methods Fifty-one patients diagnosed with rheumatoid arthritis were enrolled in the study.Disease activity was evaluated by calculating the 28-joint Disease Activity Score（DAS28）based on the clinical information RA patients were divided into active group and inactive group according to the DAS28 score.The antibodies and interleukin-6（IL-6）were measured by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）and C-reactionprotein（CRP）by nephelometry.Results The serum levels of anti-MCV antibodies increased significantly in RA group than the other two groups（P＜0.01）.The serum levels of anti-MCV antibodies in active group was higher than that in the inactive group and control group，The serum levels of anti-MCV antibodies was positively correlated with the serum level of CRP and IL-6，but not DAS28 by Spearman′s test.Anti-MCV with high sensitivity has approximately the same accuracy for the diagnosis of rheumatoid arthritis compared to anti-CCP.Conclusion Anti-MCV antibodies has high sensitivity and specificity.It might indicate the disease activity of RA and may become a valuable marker for the evaluation of RA.

Anti-MCV； Anti-CCP； IL-6； RA

10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.11.008

2016-01-15；

2016-05-26

許為民（1981—），碩士，主管檢驗(yàn)師，主要從事免疫學(xué)檢驗(yàn)