鐘優(yōu)艷,陳連國,王 瓊
(浙江省溫州市人民醫(yī)院,浙江溫州 325000)
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中藥蘇葉與蘇梗中黃酮含量測定
鐘優(yōu)艷,陳連國*,王 瓊
(浙江省溫州市人民醫(yī)院,浙江溫州 325000)
[目的]建立蘇葉和蘇梗中黃酮含量測定的紫外分光光度法。[方法]以蘆丁為對照品,采用紫外分光光度法在510 nm處分別測定蘇葉和蘇梗中的總黃酮含量。[結果]蘇葉、蘇梗中總黃酮的含量分別為57.174 3、3.850 2 mg/g,總黃酮提取率分別為5.72%、0.39%,蘇葉中總黃酮含量遠高于蘇梗中總黃酮含量。[結論]對于研究紫蘇中黃酮類化合物,蘇葉更具有研究價值。
蘇葉;蘇梗;黃酮含量;紫外分光光度法
紫蘇為我國傳統(tǒng)中藥,全株均有食用和藥用價值,主要以葉、梗、果實入藥。其中蘇葉辛溫發(fā)散,解表散寒,行氣和胃,用于風寒感冒、咳嗽嘔惡、妊娠嘔吐、魚蟹中毒等。蘇梗辛溫,理氣寬中,止痛、安胎,用于胸膈痞悶、胃脘疼痛、噯氣嘔吐、胎動不安等[1]。紫蘇可開發(fā)出多種保健食品,在醫(yī)藥、食品工業(yè)上具有廣泛的用途,前景十分廣闊[2-3]。紫蘇中黃酮含量較高,是紫蘇抗氧化、抗炎、抗過敏和抑菌的主要活性成分[4]。目前,國內外對蘇葉的研究主要集中在紫蘇色素、紫蘇精油等方面[5-6],而對蘇葉黃酮的研究較少。筆者以蘇葉和蘇梗為原料,采用水浴加熱回流的方法分別提取兩者的總黃酮,并將蘆丁作為對照品,以未加任何顯色試劑的供試品溶液作參比,采用紫外分光光度法在510 nm處測定其吸光度[7],最后計算蘇葉和蘇梗提取液中總黃酮的含量,并進行比較分析,以期為紫蘇的進一步開發(fā)利用提供參考。
1.1 材料 紫蘇采自浙江溫州,采收后干燥備用;蘆丁(化學對照品)來源于中國藥品生物制品檢定所;無水乙醇(分析純)購自上海聯(lián)試化工試劑有限公司;亞硝酸氫鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉均為分析純;電子天平AL204(梅特勒—托利多儀器有限公司,上海);紫外可見光譜儀HP8453(上海捷辰儀器有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 標準溶液的配制。精密稱取0.053 g蘆丁,置于50 mL容量瓶中,加70%乙醇振蕩溶解并定容,搖勻,得到濃度為1.06 mg/mL的蘆丁標準溶液,備用。
1.2.2 供試品溶液的制備。將蘇葉剪碎,稱取5.0 g,藥材和50%乙醇以1∶30的比例加入到250 mL圓底燒瓶中,室溫浸泡60 min后,于80 ℃加熱回流提取60 min,抽濾,濾去濾渣,至濾液無沉淀物;再加熱回流60 min,抽濾,濾去濾渣,至濾液無沉淀物,得紫蘇葉供試品。紫蘇梗供試品的制備過程與紫蘇葉的相同。
1.2.3 參比溶液的制備。
1.2.3.1 參比溶液a的制備。精密移取蘇葉、蘇梗供試品溶液各1 mL至25 mL容量瓶,加水至刻度,搖勻,放置。
1.2.3.2 參比溶液b的制備。精密移取1.2 mL蘇葉供試品溶液、蘇梗供試品溶液各6份,各加0.106 mg/mL標準品溶液9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2 mL,分別稀釋至50 mL。
1.2.4 標準曲線的繪制。用移液管準確量取“1.2.1”蘆丁標準對照液0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、1.75、2.00、2.25 mL,分別置于25 mL容量瓶中,各加水6 mL、5% NaNO2溶液1 mL,搖勻,靜置6 min,加10% Al(NO3)3溶液1 mL,搖勻,靜置6 min,加5% NaOH試液10 mL,再加水至刻度,搖勻,放置15 min。然后以溶劑及顯色試劑為參比溶液,在510 nm處測吸光度A,以吸光度A為縱坐標、蘆丁溶液濃度C(μg/mL)為橫坐標繪制標準曲線。
1.2.5 方法學考察。
1.2.5.1 精密度試驗。精密移取1.06 mg/mL蘆丁標準溶液1 mL,加入至25 mL容量瓶中,加6 mL水、5% NaNO2溶液1 mL,搖勻,靜置6 min,加10% Al(NO3)3溶液1 mL,搖勻,靜置6 min,加5% NaOH試液10 mL,再加水至刻度,搖勻,放置15 min。然后以溶劑及顯色試劑為參比溶液,用紫外分光光度法在510 nm處測吸光度A,重復測樣6次,并計算RSD值。
1.2.5.2 穩(wěn)定性試驗。精密移取蘇葉供試品溶液、蘇梗供試品溶液各1 mL,按“1.2.5.1”操作。并于15、30、45、60、75、90 min測定6次,得吸光度A,計算RSD值。
1.2.5.3 重現(xiàn)性試驗。精密移取蘇葉供試品溶液、蘇梗供試品溶液各1 mL,按“1.2.5.1”操作。以“1.2.3.1”制備的參比溶液作對照,將配備好的溶液于紫外分光光度計上測定6次,得吸光度A,分別計算蘇葉和蘇梗中的黃酮含量及其RSD。
1.2.5.4 加樣回收率試驗。將1.06 mg/mL的標準品溶液稀釋10倍,精密移取1.2 mL蘇葉供試品溶液6份,各加0.106 mg/mL標準品溶液9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2 mL,分別加入至50 mL容量瓶中,加6 mL水、5% NaNO2溶液1 mL,搖勻,靜置6 min,加10% Al(NO3)3溶液1 mL,搖勻,靜置6 min,加5% NaOH試液10 mL,再加水至刻度,搖勻,放置15 min。以“1.2.3.2”制備的參比溶液b作對照,于510 nm處測定吸光度A,計算回收率。蘇梗供試品溶液的處理同上。
2.1 標準曲線的繪制 以吸光度A為縱坐標、蘆丁溶液濃度C(μg/mL)為橫坐標繪制標準曲線,得出標準曲線方程為Y=9.407 2X+0.009 1(R2=0.999 5),表明蘆丁濃度在10.6~95.4 μg/mL范圍內與吸光度呈較好的線性關系。
2.2 精密度試驗 按照“1.2.5.1”操作,測得吸光度的平均值為0.404 2,RSD=0.4%,表明儀器精密度較好。
2.3 穩(wěn)定性試驗 按照“1.2.5.2”操作,計算得蘇葉供試品溶液、蘇梗供試品溶液的吸光度的RSD分別為1.5%、2.8%,表明蘇葉供試品溶液、蘇梗供試品溶液在室溫下90 min內穩(wěn)定。
2.4 重復性試驗 平行樣6份,定量測得5 g蘇葉、5 g蘇梗中提取的總黃酮平均含量分別為285.871 5、19.251 2 mg,則蘇葉、蘇梗中總黃酮含量分別為57.174 3、3.850 2 mg/g,總黃酮提取率分別為5.72%、0.39%,蘇葉、蘇梗中總黃酮提取率的RSD分別為1.2%、2.9%,表明該提取方法的重現(xiàn)性良好。
2.5 加樣回收率試驗 由表1~2可知,蘇葉、蘇梗中總黃酮的平均回收率分別為100.5%、101.0%,RSD分別為0.9%、1.4%,可見該方法的回收率較為理想,方法可行。
表1 蘇葉中總黃酮加樣回收率測定結果
表2 蘇梗中總黃酮加樣回收率測定結果
試驗結果顯示,蘇葉、蘇梗中總黃酮的含量分別為57.174 3、3.850 2 mg/g,總黃酮提取率分別為5.72%、0.39%,可見蘇葉中總黃酮提取率遠高于蘇梗中總黃酮提取率。因此對于研究紫蘇中黃酮類化合物,蘇葉比蘇梗具有更大的開發(fā)價值和應用前景。
該試驗以蘆丁為對照品,采用紫外分光光度法測定紫蘇葉和紫蘇梗中總黃酮含量,設備要求不高,操作簡便易行;以未加所有顯色試劑的供試品溶液作為參比溶液,消除了供試液本身的干擾,使吸光度測定值穩(wěn)定,結果準確可靠。因此,該方法可用于紫蘇中總黃酮的含量測定。
[1] 崔國靜,玉亭,賀薔.紫蘇的用藥部位及性能特點[J].首都醫(yī)藥,2013(15):50.
[2] 張洪,黃建韶,趙東海.紫蘇營養(yǎng)成分的研究[J].食品與機械,2006,22(2):41-43.
[3] 楊曉靜,王立眾,李和.紫蘇子油不皂化物的分離與分析[J].中國油料作物學報,2006,28(2):207-209.
[4] 劉娟,雷焱霖,唐友紅,等.紫蘇的化學成分與生物活性研究進展[J].時珍國醫(yī)國藥,2010,21(7):1768-1769.
[5] 劉建輝,陳蘭貴.紫蘇油中主要化學成分的分離和鑒定[J].香料香精化妝品,1998(1):19-20.
[6] YOSHIDA K,KAMEDA K,KONDO T.Diglucuronoflavones from purple leaves ofPerillaocimoides[J].Phytochemistry,1993,33(4):917-919.
[7] 鄭杭生,李計萍,韓煒,等.紫外-可見分光光度法測定總黃酮含量的方法學考察要點[J].中成藥,2008,30(9):1364-1365.
Determination on Flavone Content in Traditional Chinese Medicine Folium Perillae and Caulis Perllae
ZHONG You-yan, CHEN Lian-guo*, WANG Qiong
(Wenzhou Municipal People’s Hospital, Wenzhou, Zhejiang 325000)
[Objective] The aim was to establish ultraviolet spectrophotometry for determining flavone content in folium perillae and caulis perllae. [Method] With rutin as control, flavone content in folium perillae and caulis perllae was determined at 510 nm by ultraviolet spectrophotometry. [Result] Total flavone in folium perillae and caulis perllae were 57.174 3, 3.850 2 mg/g, extraction rate were 5.72%, 0.39%, total flavone content in folium perillae was higher than that in caulis perllae. [Conclusion] Folium perillae has more research value in research about flavonoid.
Folium perillae; Caulis perllae; Flavone content; Ultraviolet spectrophotometry
鐘優(yōu)艷(1986-),女,浙江溫州人,初級藥師,從事藥用植物學研究。*通訊作者,初級藥師,碩士,從事中藥藥理研究。
2016-08-31
S 567.21+9
A
0517-6611(2016)31-0112-02