于淼琛，王 貞，朱 鴻，劉 輝

(1.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗科，遼寧大連 116011；2.大連醫(yī)科大學(xué)，遼寧大連 116011)

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·論 著·

乙型肝炎表面抗體與年齡的相關(guān)研究及影響因素

于淼琛1，王 貞1，朱 鴻1，劉 輝2△

(1.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗科，遼寧大連 116011；2.大連醫(yī)科大學(xué)，遼寧大連 116011)

目的 研究乙型肝炎(后簡稱乙肝)表面抗體(HBsAb)隨年齡增長而降低的原因。方法 測定HBsAb，按照一定比例稀釋標(biāo)本直至HBsAb<10 U/L；測定巨細(xì)胞病毒IgG(CMV-IgG)，按照一定比例稀釋標(biāo)本直至抗CMV-IgG<14 U/mL。比較分析抗體活性的變化。結(jié)果 “2和(或)3抗體”陽性組中，青年組HBsAb活性水平高于中年組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；中年組CMV-IgG活性高于青年組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。青年組中“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb活性水平高于單抗體陽性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；中年組中“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb活性水平高于單抗體陽性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 HBsAb隨年齡增長而降低，可能與乙肝病毒感染進(jìn)程中抗體反應(yīng)模式不同有關(guān)。

乙型肝炎表面抗體； 抗體活性； 年齡組； 影響因素

乙型肝炎(后簡稱乙肝)是由乙肝病毒(HBV)感染引起，以肝臟損害為主的傳染病。全球約20億人曾感染HBV，其中3.5億人為慢性HBV感染，每年約有100萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)[1]。HBV感染是全球嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一。

接種乙肝疫苗是預(yù)防乙肝的最有效方法,其對預(yù)防和治療乙肝有巨大作用[2]。但是，疫苗并不對所有人群有效，且隨著接種時間的延長,免疫人群的保護(hù)性抗體水平逐年下降[3]。研究發(fā)現(xiàn)，隨著年齡增長，人體內(nèi)的免疫應(yīng)答可隨著免疫原排出、病原體反復(fù)刺激、神經(jīng)內(nèi)分泌因素作用及免疫細(xì)胞凋亡而逐漸被削弱[4-5]，且無論初次免疫后乙肝表面抗原(HBsAg)水平如何,保護(hù)性抗體的下降速率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。本研究將結(jié)合臨床試驗，探討HBV陽性率、抗體水平與年齡的關(guān)系，影響HBsAg水平的相關(guān)原因，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 統(tǒng)計2010年1月1日至2013年9月23日大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院所有非乙肝患者中乙肝表面抗體(HBsAb)陽性(HBsAb>10 U/L)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)正常(男15～40 U/L，女15～35 U/L)，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)正常(男9～50 U/L，女7～40 U/L)的標(biāo)本信息75 065例，按年齡統(tǒng)計HBsAb陽性率，男女比例為1∶1。

選取2012年5月至2014年3月大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院非肝炎患者中，ALT、AST均正常、HBsAb陽性、HBsAg陰性、乙肝E抗原(HBeAg)陰性。根據(jù)年齡及HBeAb、乙肝核心抗體(HBcAb)陰性、陽性分為4組。單抗體陽性青年組：HBeAb、HBcAb陰性，年齡為24～26歲，男51例，女68例。單抗體陽性中年組：HBeAb、HBcAb陰性，年齡為45～50歲，男50例，女50例?！?和(或)3抗體”陽性青年組：HBeAb和(或)HBcAb陽性，年齡為24～26歲，男100例，女104例?！?和(或)3抗體”陽性中年組：HBeAb和(或)HBcAb陽性，患者年齡為45～50歲，男101例，女100例。

選取大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院所有檢測HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb患者1 600例，24～26歲400例，男200例，女200例；45～50歲400例，男200例，女200例。檢出12種表現(xiàn)模式[6]，按HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb結(jié)果分組：組1為陰性、陽性、陰性、陰性、陰性，組2為陰性、陽性、陰性、陽性、陽性，組3為陽性、陰性、陽性、陰性、陽性,組4為陽性、陰性、陰性、陽性、陽性，組5為陰性、陰性、陰性、陰性、陰性，組6為陰性、陽性、陰性、陰性、陽性，組7為陰性、陽性、陰性、陽性、陰性，組8為陰性、陰性、陰性、陰性、陽性，組9為陰性、陰性、陰性、陽性、陰性，組10為陰性、陰性、陰性、陽性、陽性，組11為HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb結(jié)果任意一(或幾)項陽性，組12為(組11～組1)。

每例研究對象需要空腹抽靜脈血3 mL，標(biāo)本需靜置2 h左右，讓血清充分析出，離心后分離上層血清2例，1例檢測HBsAb，1例檢測巨細(xì)胞病毒IgG(CMV-IgG),(-20)℃冰箱密封保存，備用。試驗前室溫充分復(fù)融，通過離心(15 000 r/min離心10 min)沉淀加以澄清，保證不含有任何顆粒或殘存纖維蛋白。

1.2 儀器與試劑 HBsAb采用瑞士羅氏公司生產(chǎn)的Cobas e 601全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測；HBsAg采用美國雅培公司生產(chǎn)的ARCHITECT i2000SR化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測；CMV-IgG檢測儀器為意大利索靈公司生產(chǎn)的LIAISON化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)；ALT、AST由日本日立7600-110/7600-020全自動生化分析儀檢測。所有試劑均為配套專用商品試劑盒。

1.3 方法 以前研究中，免疫指標(biāo)的檢測如HBsAb和CMV-IgG結(jié)果僅報告某一水平值，并不能完全準(zhǔn)確反映其真實水平，精密性難以保證，阻礙實驗室規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)化。本研究嘗試將陽性高值結(jié)果進(jìn)行倍比稀釋，發(fā)現(xiàn)其測定結(jié)果與稀釋倍數(shù)lg值之間并非直線關(guān)系，而是呈曲線性。筆者認(rèn)為計算曲線下面積來表示檢測指標(biāo)結(jié)果更加準(zhǔn)確，能代表其實際水平。由于曲線的面積計算復(fù)雜，本研究將使用梯形面積計算法，以簡化結(jié)果[7-9]。如乙肝表面抗體原始測得水平值均標(biāo)記為H1，稀釋倍數(shù)為1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1 024、1∶2 048，測得水平值分別標(biāo)記為H2、H3、H4、H5、 H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12，HBsAb活性公式為S=(H1+H2)×(lg2-lg1)+(H2+H3)×(lg4-lg2)+(H3+H4)×(lg8-lg4)+(H4+H5)×(lg16-lg8)+(H5+H6)×(lg32-lg16)+(H6+H7)×(lg64-lg32)+(H7+H8)×(lg128-lg64)+(H8+H9)×(lg256-lg128)+(H9+H10)×(lg512-lg256)+(H10+H11)×(lg1 024-lg512)+(H11+H12)×(lg2 048-lg1 024)。CMV-IgG的抗體原始測得的水平值均標(biāo)記為C1，稀釋倍數(shù)為1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128，測得水平值分別標(biāo)記為C2,C3,C4,C5,C6,C7,C8，則CMV-IgG活性公式為S=(C1+C2)×(lg2-lg1)+(C2+C3)×(lg4-lg2)+(C3+C4)×(lg8-lg4)+(C4+C5)×(lg16-lg8)+(C5+C6)×(lg32-lg16)+(C6+C7)×(lg64-lg32)+(C7+C8)×(lg128-lg64)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，組間比較采用F檢驗、t檢驗，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HBsAb水平隨年齡變化曲線 年齡與HBsAb陽性率變化的分布曲線表明，HBsAb陽性率與年齡變化曲線存在2個波峰、2個波谷。2個波峰位于出生時和24～26歲左右，2個波谷位于10～12歲和45～50歲。本次研究選取24～26歲波峰區(qū)，45～50歲波谷區(qū)2組。見圖1。

2.2 HBsAb水平在不同組比較

2.2.1 2個年齡組HBsAb水平比較 單抗體陽性青年組和中年組HBsAb水平比較，青年組HBsAb水平高于老年組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；“2和(或)3抗體”陽性青年組和中年組HBsAb水平比較，青年組HBsAb水平高于老年組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2.2 相同年齡組單抗體陽性組“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb水平比較 青年組單抗體陽性組和“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb水平比較，“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb水平高于單抗體陽性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；中年組單抗體陽性組和“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb水平比較，“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb水平高于單抗體陽性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

圖1 HBsAb陽性率與年齡變化曲線

2.3 HBsAb陽性中CMV-IgG精密測定結(jié)果比較 “2和(或)3抗體”陽性青年組和中年組CMV-IgG活性水平比較，青年組CMV-IgG活性水平低于中年組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表1 不同年齡組HBsAb結(jié)果

表2 相同年齡組HBsAb檢測結(jié)果

表3 HBsAb陽性的2個年齡組CMV-IgG檢測結(jié)果

2.4 模式統(tǒng)計分析乙肝感染 統(tǒng)計1 600例患者血樣，24～26歲400例，男200例，女200例；45～50歲400例，男200例，女200例。檢出12種表現(xiàn)模式[10-12]。見圖2。

圖2 不同年齡組模式分析結(jié)果比較

3 討 論

臨床資料統(tǒng)計中發(fā)現(xiàn)，HBsAb陽性率隨著年齡增長有減低趨勢。出生時，HBsAb陽性率最高，隨著年齡的增長，HBsAb陽性率降低。10歲以后緩慢增高，24～26歲達(dá)到1次高峰。之后再次降低，45～50歲達(dá)到1個低谷。

從免疫學(xué)的角度看，隨著年齡的增長，中年人的免疫水平逐漸減低[13]，通過試驗發(fā)現(xiàn)，單抗體陽性組中，青年組和中年組HBsAb活性水平比較，青年組HBsAb活性水平高于老年組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；“2和(或)3抗體”陽性組中，青年組和中年組HBsAb活性水平比較，青年組HBsAb活性水平高于老年組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。“2和(或)3抗體”陽性組中，青年組和中年組CMV-IgG活性比較，中年組CMV-IgG活性高于青年組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。由此表明，免疫水平并非單純隨年齡增長而降低。

在大多數(shù)國家，嬰兒出生后即接種乙肝疫苗，使其HBsAb保持較高水平[14]。研究發(fā)現(xiàn)，絕大多數(shù)疫苗接種后，能誘發(fā)使疫苗接種者保持至少15年免疫效果。隨著年齡的增長，乙肝疫苗的保護(hù)作用逐漸減低，由接種疫苗產(chǎn)生的HBsAb活性逐漸降低。

通過模式分析發(fā)現(xiàn)，組1的HBsAb為疫苗來源，組12的HBsAb為非疫苗來源。組12的青年組為33.0%，中年組為52.5%，說明乙肝疫苗對機(jī)體有一定保護(hù)作用。但是青年組存在33.0%的人群與乙肝感染有關(guān)，中年組有52.5%的人群感染乙肝，說明乙肝疫苗的保護(hù)有限。組2為HBsAb、HBeAb、HBcAb陽性，組6為HBsAb、HBcAb陽性，組7為HBsAb、HBeAb陽性，組8為HBcAb陽性，這4組說明感染乙肝后的抗體水平，中年組陽性率高于青年組，且兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義，說明中年人發(fā)生乙肝感染與年輕人乙肝感染預(yù)后模式有差異。青年組單抗體陽性組和“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb活水平性比較，“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb活性水平高于單抗體陽性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；中年組單抗體陽性組和“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb活性水平比較，“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb活性水平高于單抗體陽性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。根據(jù)2個年齡組HBsAb活性和CMV-IgG活性的試驗結(jié)果及模式分析結(jié)果，提示中年人與年輕人天然抗體模式不同。因此，中年人對HbsAg的反應(yīng)不同于年輕人，發(fā)現(xiàn)乙肝感染后，針對乙肝的抗體也有區(qū)別。

HBsAb隨著年齡增長，呈一定下降趨勢?？赡芘cHBV感染進(jìn)程中抗體反應(yīng)模式不同有關(guān)。本次試驗采用精密測定方法，能比以往傳統(tǒng)方法更精確地反映患者體內(nèi)抗體活性水平，更適用于不同患者體內(nèi)乙肝抗體定量相等時抗體的強(qiáng)弱情況分析，其在疾病診斷中的價值正在逐漸被認(rèn)可?？傊?，隨著年齡的增長，疫苗保護(hù)作用在逐漸下降，而中年人與青年人發(fā)生HBV感染時的反應(yīng)模式不同，其產(chǎn)生抗體也不盡相同。

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The research on relationship between level of hepatitis B surface antibody and age

YUMiaochen1,WANGZhen1,ZHUHong1,LIUHui2△

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian,Liaoning116011,China;2.DepartmentofClinicalImmunology,DalianMedicalUniversity,Dalian,Liaoning116011,China)

Objective To study the relationship between Hepatitis B surface antibody(HBsAb) and the age.Methods The level of HBsAb was detected until the level was diluted lower than 10 IU/L according to the certain ratio and.And the level of cytomegalovirus antibody(CMV-IgG) were detected until the level was diluted lower than 14 U/mL according to the certain ratio.The antibody activity were analyzed statistically.Results In the 2 and/or 3 positive-antibodies group,the antibody activity level of youth group was significantly higher than that of middle-aged group(P<0.05).The CMV-IgG activity level of middle-aged group was significantly higher than that of youth group(P<0.05).In the youth group,the antibody activity of 2 and/or 3 positive-antibodies group was significantly higher than that of single antibody positive group(P<0.05).In the middle-aged group,the antibody activity of 2 and/or 3 positive-antibodies group was significantly higher than that of single positive-antibody group(P<0.05).Conclusion The level of HBsAb has decreased with the growth of the age.The possible reason may be that antibody response pattern is different in the process of hepatitis B virus infection.

hepatitis B surface antibody; antibody activity; age group; influence factor

于淼琛，女，主管技師，主要從事臨床免疫方面的研究。

△通訊作者，E-mail：liuhui60@sina.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.21.020

A

1673-4130(2016)21-3004-03

2016-05-10

2016-06-30)