金凌云，黃樣增，吳長輝，李 曄**，陳冠敏

（1．福建仙芝樓生物科技有限公司，藥用菌栽培與深加工國家地方聯(lián)合工程研究中心，福建 福州 350002；2．福建省疾病預防控制中心，福建 福州 350001）

〈生理生化〉

靈芝孢子油提取物復合制劑對酒精性肝損傷的保護作用*

金凌云1，黃樣增1，吳長輝1，李 曄1**，陳冠敏2

（1．福建仙芝樓生物科技有限公司，藥用菌栽培與深加工國家地方聯(lián)合工程研究中心，福建 福州 350002；2．福建省疾病預防控制中心，福建 福州 350001）

探討靈芝（Ganoderma lucidum）孢子油提取物復合制劑對小鼠急性酒精肝損傷的保護作用。分別設定0．167 g·kg－1、0．333 g·kg－1、1．00 g·kg－1三個劑量組，以及乙醇模型對照組和空白對照組。各劑量組經(jīng)口灌胃給予受試物，溶劑對照組和乙醇模型組給予食用植物油。30 d后，用乙醇建立急性酒精性肝損傷小鼠模型。16 h后處死動物，測定肝組織中甘油三酯（TG）、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA），同時取肝臟進行組織病理學檢查。結(jié)果表明樣品可以降低3個劑量組小鼠急性酒精性肝損傷后第16小時肝組織中TG含量和中劑量組MDA含量，肝臟組織病理學檢查發(fā)現(xiàn)，乙醇模型對照組動物肝損傷程度高于溶劑對照組（P＜0．05）。結(jié)論證明靈芝孢子油提取物復合制劑對急性酒精肝損傷具有輔助保護功能。

靈芝孢子油提取物復合制劑；酒精性肝損傷；乙醇模型；ICR小鼠

我國是飲酒大國，因長期大量飲酒導致的酒精性肝病（alcoholic liver diseases，ALD） 發(fā)病率在我國有逐年上升的趨勢，已成為繼病毒性肝炎后導致肝損害的第二大病因。ALD的發(fā)病機制目前尚不完全清楚，可能與酒精的毒性作用、氧化應激等因素有關(guān)，西醫(yī)對肝損傷的藥物治療療法并不十分肯定，臨床用藥如糖皮質(zhì)激素、己酮可可堿、英夫利昔等，僅能改善患者生存率或生存期，且容易出現(xiàn)副作用，治療效果并不明顯[1－2]。近年來中醫(yī)在肝損傷治療方面的研究有了長足發(fā)展，充分發(fā)揮中醫(yī)藥在肝病治療方面的優(yōu)勢，日漸成為研究熱點[3]。

靈芝（Ganoderma lucidum） 是擔子菌綱（Basidiomycetes）多孔菌科（Polyporaceae） 赤芝或紫芝的干燥子實體，是我國傳統(tǒng)中藥材，已被廣泛地用作治療各種病因引起的肝炎[4]。靈芝中多糖和三萜類化合物被認為是對化學毒物所致肝損傷有保護作用的活性成分。靈芝多糖能抗酒精性肝損傷和病毒性肝炎[5]，靈芝三萜類化合物對CCl4等損傷模型鼠也顯示出有效的保護作用[6]。靈芝孢子油提取物復合制劑是以靈芝孢子油、靈芝（赤芝、紫芝）提取物制成，集合了靈芝的多種功效成分。本文主要對靈芝孢子油提取物復合制劑在小鼠酒精性肝損傷保護方面的作用進行研究，進而對靈芝復合制劑的功能性提供理論支持。

1　材料

1.1動物

清潔級ICR小鼠，雌性，18 g～22 g，共50只，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司，許可證號：SCXK（滬）2012－0002。

1.2藥物及試劑

受試物靈芝孢子油提取物復合制劑，由仙芝科技（福建）股份有限公司提供。生化試劑盒購自南京建成生化試劑有限公司，分析純乙醇購自上?；瘜W試劑一廠，用蒸餾水配制成濃度為50%的乙醇溶液。

1.3儀器

日立7060C全自動生化分析儀、生物U1800紫外可見分光光度計、電子天平、Leica CM－1950冰凍切片機、OlympusBX51T－32E顯微鏡。

2　方法

2.1分組、給藥及造模

將小鼠隨機分成5組，每組10只，即低、中、高劑量組（受試物濃度分別為0．167 g·kg－1、0．333 g·kg－1、1．00 g·kg－1），空白對照組、模型對照組。每日稱取受試物樣品10．0 g，加食用植物油定容至100 mL，搖勻，作為高劑量組受試物；取高劑量組受試物50 mL，加食用植物油定容至150 mL，搖勻，作為中劑量組受試物；取中劑量組受試物50 mL，加食用植物油定容至100 mL，搖勻，作為低劑量組受試物。模型對照組乙醇濃度為50%（V·V－1）。

3個劑量組動物每日經(jīng)口灌胃給予受試物，空白對照組和模型對照組給予等量食用植物油，灌胃劑量為10 mL·kg－1，連續(xù)30 d。動物每周稱重2次，以調(diào)整受試動物灌胃量，自由飲食、飲水。

2.2動物造模

實驗第30天將各組動物稱重，模型組及各劑量組動物按照0．012 mL·g－1一次性灌胃給予50%（V·V－1）乙醇染毒，空白對照組給予蒸餾水。

2.3指標測定

禁食16 h后，處死動物觀察肝組織外觀性狀，并取部分肝組織，勻漿，測定肝組織中TG、GSH、MDA含量，同時取肝臟進行組織病理學檢查。

2.4試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法

試驗數(shù)據(jù)以SPSS軟件進行統(tǒng)計?？瞻讓φ战M和乙醇模型對照組比較用t檢驗；各樣品組與乙醇模型對照組比較用單因素方差分析。經(jīng)方差齊性檢驗，方差齊的試驗數(shù)據(jù)采用LSD法進行統(tǒng)計分析。對方差不齊或非正態(tài)的試驗數(shù)據(jù)先進行變量轉(zhuǎn)換，再進行統(tǒng)計。

3　結(jié)果

3.1靈芝孢子油提取物復合制劑對小鼠體重的影響

靈芝孢子油提取物復合制劑對小鼠體重的影響，結(jié)果見表1。

受試物各組小鼠的初始體重經(jīng)方差分析檢驗，差異不顯著（P＞0．05），即小鼠的初始體重在各組間較為均衡；經(jīng)口灌胃30 d后，各組小鼠的體重增長值經(jīng)方差分析檢驗，差異不顯著（P＞0．05），即受試物對小鼠的體重增長無影響。

3.2靈芝孢子油提取物復合制劑對肝組織中TG、GSH、MDA含量的影響

靈芝孢子油提取物復合制劑對肝組織中TG、GSH、MDA含量的影響，結(jié)果見表2。

試驗結(jié)束時，模型對照組小鼠肝組織中的TG、MDA含量均高于空白對照組，GSH含量低于空白對照組，經(jīng)統(tǒng)計檢驗，差異顯著（P＜0．05），說明動物模型建模較成功。受試物3個劑量組肝組織TG含量、中劑量組MDA含量低于模型對照組，經(jīng)統(tǒng)計檢驗，差異顯著（P＜0．05），說明靈芝孢子油提取物復合制劑可顯著降低酒精性肝損傷小鼠肝組織中TG、MDA含量水平。

表1　各組小鼠的初始體重、結(jié)束體重、增重（±S）Tab．1　Initial body weight,final weight and weight gain of mice in each group（±S）

表1　各組小鼠的初始體重、結(jié)束體重、增重（±S）Tab．1　Initial body weight,final weight and weight gain of mice in each group（±S）

組別　動物數(shù)/只　初始體重/g　P　結(jié)束體重/g　P　增重/g　P空白對照組　10　19．9±1．4　1．000　38．3±1．9　1．000　18．4±2．6　1．000模型對照組　10　19．9±1．4　－　38．3±2．4?。?8．4±2．3　－低劑量組　10　19．8±1．5　0．875　38．7±1．9　0．683　18．9±2．0　0．668中劑量組　10　19．7±1．3　0．753　40．0±2．2　0．087　20．3±3．0　0．108高劑量組　10　19．7±1．3　0．753　39．4±2．4　0．264　19．7±2．9　0．268

表2　靈芝孢子油提取物復合制劑對小鼠肝組織TG、GSH、MDA含量的影響（±S）Tab．2 Effects of Ganoderma lucidum spore oil and extract complex preparation on the content of TG,GSH,MDA in mice liver tissue（±S）

表2　靈芝孢子油提取物復合制劑對小鼠肝組織TG、GSH、MDA含量的影響（±S）Tab．2 Effects of Ganoderma lucidum spore oil and extract complex preparation on the content of TG,GSH,MDA in mice liver tissue（±S）

注：*與模型對照組比較，P＜0．05；＃與空白對照組比較，P＜0．05。Note:*Compared with the model control group,P＜0．05;＃Compared with the control group,P＜0．05．

組別　動物數(shù)/只　TG/(mmol·kg－1)　P　GSH/(mg/g·prot－1)　P　MDA/(nmol/mg·prot－1)　P空白對照組　10　113．0±19．30　0．002　3．30±0．72　0．002　1．64±0．23　0．001模型對照組　10　153．0±29．50?！。?．30±0．50?！。?．65±0．64＃?。蛣┝拷M　10　114．8±13．90*　0．016　2．54±0．55　0．345　2．29±0．52　0．156中劑量組　10　112．8±21．68*　0．018　2．56±0．58　0．304　2．08±0．50*　0．025高劑量組　10　120．6±13．70*　0．046　2．57±0．60　0．292　2．47±0．49　0．468

3.3肝臟組織病理學檢查結(jié)果

3．3．1肉眼觀察

空白對照組：肝臟表面平整光滑，色澤亮呈鮮紅色，質(zhì)軟。

模型對照組：肝臟表面有顆粒狀，色澤變淡呈土黃色，質(zhì)稍硬。

各劑量組：肝臟表面有均勻細顆粒，色澤呈略黃、深褐色或土黃色，質(zhì)軟或稍硬。

3．3．2鏡檢

小鼠肝臟病組織學檢查結(jié)果見表3。

表3　小鼠肝臟病理組織學檢查結(jié)果（±S）Tab．3　Histopathological examination of mice liver tissue（±S）

表3　小鼠肝臟病理組織學檢查結(jié)果（±S）Tab．3　Histopathological examination of mice liver tissue（±S）

注：*與模型對照組比較，P＜0．05；＃與空白對照組比較，P＜0．05。Note:*Compared with the model control group,P＜0．05;＃Compared with the control group,P＜0．05．

組別　動物數(shù)/只　脂滴面積積分　P空白對照組　10　0．4±0．7　0模型對照組　10　3．2±0．8?！。蛣┝拷M　10　2．0±0．7*　0．001中劑量組　10　1．8±0．8*　0高劑量組　10　2．5±0．8　0．051

由表3可見，模型組動物脂滴在肝臟的分布、范圍和面積積分均高于空白對照組；低、中劑量組動物的脂滴在肝臟的分布、范圍和面積積分均低于模型對照組，且差異顯著（P＜0．05）。

4　討論

肝損傷是指在一系列理化因素作用下，肝細胞發(fā)生不同程度的腫脹、變性、壞死和凋亡，是各種肝病發(fā)生發(fā)展的最基本病理狀態(tài)[7]。酒精是導致肝損傷的一個重要因素。研究發(fā)現(xiàn)，機體大量攝入乙醇后，在乙醇脫氫酶作用下大量脫氫氧化，影響三羧酸循環(huán)，并減弱脂肪酸氧化，從而影響脂肪代謝；乙醇可致α－磷酸甘油增多而促進TG合成，致使脂肪在肝細胞內(nèi)沉積，同時乙醇能激活氧分子，產(chǎn)生的氧自由基可導致細胞膜的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)生MDA及體內(nèi)還原型GSH的耗竭。因而TG、GSH和MDA含量?？煞从丑w內(nèi)脂質(zhì)過氧化程度，間接反映體內(nèi)組織、細胞損傷程度[5，8]。

靈芝是我國傳統(tǒng)的補益中藥，被歷代醫(yī)家視為滋補強壯、扶正固本、延年益壽之珍品?，F(xiàn)代藥理與臨床研究證實，靈芝具有多方面生理活性和藥理作用，尤其在保肝護肝方面具有較好的功效[9－11]。目前研究多認為其保肝功效與其清除自由基、抗氧化等作用有關(guān)。陳瓊瑤[12]等的研究表明靈芝孢子粉對酒精性肝損傷具有輔助保護作用。何慧[4]等研究表明靈芝肽對酒精性肝損傷具有保護功能，其良好的保肝效果可能與其優(yōu)異的抗氧化能力有關(guān)。周昌艷[5]等研究表明靈芝多糖可以提高模型小鼠的GSH、GSH-Px和SOD水平，同時降低MDA、TG水平，具有一定的預防酒精性肝損傷作用。樸日龍[13]等、李曄[14]等、黃建康[15]等的研究均表明靈芝孢子油對CCl4誘導的化學性肝損傷也具有輔助保護作用。

本文所用材料靈芝孢子油提取物復合制劑中含有全靈芝的多種功效成分，其中以靈芝多糖和三萜類為主要活性物質(zhì)，本研究結(jié)果得出樣品可以降低3個劑量組小鼠急性酒精肝損傷后第16小時肝組織中的TG含量和中劑量組MDA含量，且低、中劑量組小鼠的脂滴在肝臟的分布、范圍和面積積分低于乙醇模型對照組。結(jié)論表明靈芝孢子油提取物復合制劑在有效地降低了酒精代謝過程中TG、MDA的產(chǎn)生，并減少了受損肝臟中脂肪的沉積，對酒精性肝損傷具有輔助保護的功能。靈芝的保肝作用已經(jīng)被國內(nèi)外學者廣泛證實，且與其較強的抗氧化、清除自由基功能有關(guān)，但其抗氧化、抗自由基的具體作用環(huán)節(jié)仍有待進一步研究。

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Effects of Ganoderma lucidum Spore Oil and Extract Complex Preparation on Mice with Alcoholic Liver Injury

JIN Ling-yun1,HUANG Yang-zeng1,WU Chang-hui1,LI Ye1,CHEN Guan-min2
(1．Fujian Xianzhilou Biological Science and Technology Co．Ltd．,Research Center of Medicinal Mushroom Cultivation and Deep Processing of Local and National United Engineering,Fuzhou 350002,China;2．Fujian Center of Disease Control and Prevention,Fuzhou,Fujian 350001,China)

Effects of Ganoderma lucidum spore oil and extract complex preparation on mice with alcoholic liver injury were studied in this paper．The experiment was employed with 5 treatments,such as 0．167 g·kg－1,0．333 g·kg－1,1．00 g·kg－1dosage group,blank control and ethanol model control group．Three dosages of samples were given orally with blank control and ethanol model control groups given edible vegetable oil．30 days later,the mouse model of acute alcoholic liver injury was established by ethanol．The animals were sacrificed after 16 hours,and the livers were collected for the triglycercide(TG),glutathione(GSH),methane dicarboxylic aldehyde(MDA)measurements and liver histopathological examination．The results showed that three dosages of samples significantly reduced the TG content in mice liver tissue at the 16th hour after the alcoholic treatments while the middle dosage sample reduced the MDA content．And the ethanol model control group showed higher damage degree than the blank control group(P＜0．05)．It was concluded that G.lucidum spore oil and extract complex preparation exhibited a protective effect on acute alcohol liver injury．

Ganoderma lucidum spore oil and extract complex preparation;alcoholic liver injury;ethanol model;ICR mice

S646.9

A

1003-8310（2016）06-0034-04

10．13629/j．cnki．53－1054．2016．06．008

公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項的部分研究內(nèi)容（201303080）。

金凌云（1985－），女，碩士，工程師，主要從事珍稀食（藥）用真菌的活性物質(zhì)的研究。E－mail:yanfa8＠xianzhilou．com

**通信作者：李曄（1971－），男，本科，高級工程師，主要從事靈芝等食（藥）用真菌栽培、深加工及活性物質(zhì)的研究。E－mail:lee＠xianzhilou．com

2016－09－10