萬水霞，蔣光月**

（1．安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所，安徽 合肥 230031；2．安徽養(yǎng)分循環(huán)與資源環(huán)境省級(jí)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230031）

富硒栽培對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)量的影響*

萬水霞1，2，蔣光月1，2**

（1．安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所，安徽 合肥 230031；2．安徽養(yǎng)分循環(huán)與資源環(huán)境省級(jí)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230031）

以黑木耳（Auricularia auricula）為富硒載體，研究了不同濃度的紅色納米硒對(duì)黑木耳菌絲體、子實(shí)體發(fā)育和產(chǎn)量的影響，以及黑木耳的富硒能力。結(jié)果表明，培養(yǎng)基中添加的硒濃度為10 mg·kg－1～50 mg·kg－1時(shí)，黑木耳子實(shí)體產(chǎn)量及子實(shí)體中的總硒含量均隨硒濃度的增加而提高，并于硒濃度為50 mg·kg－1時(shí)子實(shí)體產(chǎn)量達(dá)到最大；當(dāng)硒濃度高于50 mg·kg－1時(shí)，子實(shí)體產(chǎn)量降低。黑木耳子實(shí)體中硒含量分析表明，黑木耳具有較強(qiáng)的富硒和耐硒能力，且子實(shí)體中硒含量與硒加入量呈正相關(guān)關(guān)系。

黑木耳；富硒栽培；產(chǎn)量；硒含量；紅色納米硒

硒（Se）是目前已知的14種人體必需的微量元素之一，是谷胱甘肽過氧化酶的重要組成部分。研究發(fā)現(xiàn)，硒及硒化物具有抗癌、抗氧化、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、防治心血管疾病、保肝及解毒排毒等重要功能[1－2]。但我國(guó)72%的地區(qū)屬于缺硒或低硒地區(qū)，2/3的人口存在不同程度的硒攝入不足。因此，尋找和開發(fā)安全、高效的富硒產(chǎn)品，以保證人體攝入充足的硒已成為生產(chǎn)中亟待解決的重要問題。許多食用菌不僅含有豐富的蛋白質(zhì)、多糖及其他生理活性成分，同時(shí)還具有較強(qiáng)的富硒能力[3－4]，能夠?qū)o機(jī)硒通過菌絲體吸收轉(zhuǎn)化富集于子實(shí)體中，成為對(duì)人類較為理想的富硒食品。紅色納米硒在動(dòng)物科學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用較多，在食用菌中應(yīng)用較少，它具有比亞硒酸鈉低的毒性及高的生物利用率等特點(diǎn)[5]。本研究以黑木耳作為富硒載體，研究黑木耳對(duì)紅色納米硒營(yíng)養(yǎng)液中硒元素的富集能力，以及不同濃度硒對(duì)黑木耳產(chǎn)量的影響，以期獲得更為優(yōu)質(zhì)的富硒黑木耳。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試菌株：黑木耳（Auricularia auricula） 由浙江省慶元食品公司提供。

母種培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基；原種培養(yǎng)基：玉米；栽培培養(yǎng)料：木屑40%、茶樹枝35%、黃豆粉8%、玉米粉16%、石膏0．5%、石灰0．5%。

紅色納米硒營(yíng)養(yǎng)液：制備方法參見文獻(xiàn)[6]。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)設(shè)置5個(gè)處理：對(duì)照CK，不施用硒；T1，栽培料中硒濃度10 mg·kg－1；T2，栽培料中硒濃度50 mg·kg－1；T3，栽培料中硒濃度100 mg·kg－1；T4，栽培料中硒濃度250 mg·kg－1。

1.3試驗(yàn)方法

按配方稱取培養(yǎng)料并將不同濃度的硒溶液加到培養(yǎng)基中混合均勻，并調(diào)節(jié)含水量至55%左右，裝入17 cm×33 cm×0．005 cm的聚丙烯塑料袋，每袋大約裝干料450 g，滅菌，備用。每個(gè)菌株分別接種30袋，18℃～25℃培養(yǎng)，隨機(jī)排列。菌絲長(zhǎng)滿栽培袋后，每袋開口12個(gè)，菌袋6個(gè)放一橫排，間距10cm排于地上，根據(jù)氣溫及木耳生長(zhǎng)狀況進(jìn)行適時(shí)、適量的噴水管理，使耳場(chǎng)處于干濕交替狀態(tài)。耳片充分展開后，及時(shí)采收。

在菌絲生長(zhǎng)階段，記錄菌絲生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)勢(shì)，同時(shí)記錄不同菌種的菌絲滿袋天數(shù)。子實(shí)體生長(zhǎng)階段記錄出芽時(shí)間，觀察記錄耳片大小、薄厚、顏色、軟硬等外觀性狀，子實(shí)體的產(chǎn)量。產(chǎn)量測(cè)定時(shí)每個(gè)菌株隨機(jī)抽取10袋，記算平均產(chǎn)量，計(jì)算絕對(duì)生物學(xué)效率。絕對(duì)生物學(xué)效率（%）為子實(shí)體干重（g）除以干料重。

1.4硒含量測(cè)定

參照原子熒光光譜法測(cè)定[7]。

2　結(jié)果與分析

2.1富硒栽培對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)的影響

培養(yǎng)基中施加不同濃度的硒對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)產(chǎn)生了顯著影響，見表1。適度施硒（T1、T2）菌絲定殖早，滿袋時(shí)間短，菌絲生長(zhǎng)速度快，菌絲濃白、粗壯，整齊度高；尤其硒濃度為50 mg·kg－1時(shí)，菌絲長(zhǎng)勢(shì)最好。施硒濃度達(dá)到100 mg·kg－1時(shí),菌絲行長(zhǎng)速度減慢，菌絲定殖時(shí)間拖后，滿袋時(shí)間延長(zhǎng)，菌絲長(zhǎng)勢(shì)減弱。施硒濃度為250 mg·kg－1時(shí)，菌絲纖弱且菌絲生長(zhǎng)速度顯著低于其他處理，菌絲滿袋時(shí)間相對(duì)于CK延遲了10 d?？梢?，施入適當(dāng)濃度的硒，利于黑木耳菌絲生長(zhǎng)。

表1　不同硒濃度對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)的影響Tab．1　Effect of different Se concentration on the growth of Auricularia auricula mycelium

2.2富硒栽培對(duì)黑木耳產(chǎn)量的影響

對(duì)不同處理單袋黑木耳產(chǎn)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，施硒處理黑木耳產(chǎn)量與不施硒間有顯著性差異，見表2。

表2　施用不同濃度的硒對(duì)單個(gè)菌袋干耳產(chǎn)量的影響Tab．2　Effect of different Se concentration on the yield of dried Auricularia auricula fruit bodies in each fungus bag

培養(yǎng)基中施用硒10 mg·kg－1～100 mg·kg－1，黑木耳產(chǎn)量提高了2．99%～12．57%。其中，T2處理（硒施用濃度50 mg·kg－1）產(chǎn)量最高，每袋產(chǎn)干木耳達(dá)56．4 g。施硒濃度超過50 mg·kg－1時(shí)，黑木耳產(chǎn)量有所下降，當(dāng)硒濃度達(dá)到250 mg·kg－1時(shí)，黑木耳產(chǎn)量降低了15．97%。通過對(duì)菌棒出耳過程進(jìn)行觀察，硒濃度達(dá)200 mg·L－1時(shí)，很多菌袋出菇情況差，培養(yǎng)基出現(xiàn)很多禿斑且子實(shí)體細(xì)弱，所以最終產(chǎn)量相對(duì)于CK降低了15．97%。

從各處理的絕對(duì)生物學(xué)效率來看，T2＞T1＞T3＞CK＞T4，顯然，T2處理即硒施用濃度50 mg·kg－1時(shí)生物學(xué)效率最高。說明向培養(yǎng)基中施入50 mg·kg－1硒時(shí)，黑木耳將培養(yǎng)基中的基質(zhì)轉(zhuǎn)化為自身菇體的能力最強(qiáng)，但過量施硒卻抑制了食用菌的這種能力。

2.3富硒栽培對(duì)黑木耳子實(shí)體中硒含量的影響

富硒栽培對(duì)黑木耳子實(shí)體中硒含量影響見表3。

表3　富硒栽培對(duì)黑木耳子實(shí)體中硒含量的影響Tab．3　Effect of different Se concentration on Se contents of Auricularia auricula fruit bodies

由表3可見，在常規(guī)培養(yǎng)基中施加一定濃度的硒溶液可影響黑木耳子實(shí)體中的硒含量。培養(yǎng)基料中加入硒溶液可明顯提高黑木耳子實(shí)體中的硒含量。子實(shí)體中硒含量隨著硒濃度的增加而增加，尤其是當(dāng)硒施入濃度為50 mg·kg－1時(shí)，子實(shí)體中的硒含量相對(duì)于不加硒增加的幅度最大。隨著培養(yǎng)基中硒濃度的進(jìn)一步加大，子實(shí)體對(duì)硒的富集增量減小。這可能與過量的硒施入影響了黑木耳菌體的自身代謝有關(guān)。

3　結(jié)論與討論

自然界中的硒多以無機(jī)鹽形式存在，無機(jī)硒均為劇毒，且不易被人體吸收，有機(jī)硒對(duì)動(dòng)物的毒性明顯低于無機(jī)硒，且生物利用率高[8－9]。有機(jī)硒主要以硒蛋白及硒多糖的形式存在，而食用菌菌絲體和子實(shí)體中富含蛋白質(zhì)和多糖，利用食用菌作為富硒載體，可以將無機(jī)硒轉(zhuǎn)化為蛋白硒和多糖硒[10－11]。另外，食用菌能利用廉價(jià)的農(nóng)副產(chǎn)品快速生長(zhǎng)，收獲周期短，培養(yǎng)方便。因此，食用菌的富硒栽培越來越成為富硒產(chǎn)品研究開發(fā)的重點(diǎn)。

該研究表明，黑木耳培養(yǎng)料中添加一定濃度（10 mg·kg－1～50 mg·kg－1） 范圍內(nèi)的外源硒，可以促進(jìn)黑木耳菌絲早定殖、早萌發(fā)，縮短菌絲的滿袋時(shí)間。同時(shí)一定量的外源硒在一定程度上促進(jìn)黑木耳子實(shí)體的增產(chǎn)及絕對(duì)生物學(xué)效率的提高。當(dāng)施入硒濃度達(dá)50 mg·kg－1，子實(shí)體產(chǎn)量增產(chǎn)最為明顯，生物學(xué)效率達(dá)到最大。但施入的硒濃度過大（250 mg·kg－1） 時(shí)，黑木耳菌絲纖弱，生長(zhǎng)不佳，禿斑明顯，子實(shí)體產(chǎn)量降低。究其原因，硒是細(xì)胞內(nèi)一些酶的重要輔助因子，可激活菌絲細(xì)胞的輔酶，促進(jìn)菌絲的發(fā)育，提高菌絲及子實(shí)體的生物量。當(dāng)培養(yǎng)基中添加適當(dāng)濃度的Na2SeO3時(shí)，經(jīng)過一段時(shí)間培養(yǎng)，細(xì)胞內(nèi)積累一定無機(jī)硒，此時(shí)，菌絲細(xì)胞會(huì)合成大量的蛋白質(zhì)或多糖，與這些無機(jī)硒相結(jié)合[12－13]。然而，當(dāng)培養(yǎng)基中添加高濃度的硒時(shí)，菌絲細(xì)胞中積累的無機(jī)硒耗盡了細(xì)胞內(nèi)大量的還原性物質(zhì)，阻礙了正常的細(xì)胞代謝，導(dǎo)致菌絲細(xì)胞的裂解和死亡，從而導(dǎo)致菌絲生長(zhǎng)緩慢和子實(shí)體產(chǎn)量的降低。

前人研究表明，黑木耳對(duì)硒具有良好的富集、吸收和轉(zhuǎn)化功能[14－15]。本研究進(jìn)一步證實(shí)了前人的研究成果。在本次試驗(yàn)中，隨著培養(yǎng)基料中外源硒施用濃度的增加，黑木耳子實(shí)體中含硒量升高，并且都達(dá)富硒標(biāo)準(zhǔn)。在適宜硒濃度范圍內(nèi)，無機(jī)硒進(jìn)入菌絲后，經(jīng)生物轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒,可促進(jìn)氨基酸和蛋白質(zhì)的合成，進(jìn)而促使氨基酸結(jié)合更多的硒，從而最終表現(xiàn)為子實(shí)體中硒含量的升高。

綜上所述，本研究條件下，在黑木耳栽培料中加入10 mg·kg－1～50 mg·kg－1亞硒酸鈉，對(duì)黑木耳菌絲體及子實(shí)體生長(zhǎng)發(fā)育有明顯促進(jìn)作用，黑木耳的栽培生產(chǎn)能獲得最佳的增產(chǎn)、增收和富硒效果。至于外源硒的最佳施用臨界點(diǎn)仍需進(jìn)一步分析和探討。

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Effects of Selenium-Enriched Cultivation on Mycelium Growth and Yield of Auricularia auricula

WAN Shui-xia1，2,JIANG Guang-yue1，2
(1．Soil and Fertilizer Research Institute,Anhui Academy of Agricultural Sciences,Hefei 230031,China; 2．Anhui Provincial Key Laboratory of Nutrient Recycling,Resources and Environment,Hefei 230031,China)

The effect of different selenium concentration on mycelium growth and yield of Auricularia auricula and the Se－accumulation ability of A.auricula were studied．Results showed that the biomass of fruit bodies and selenium content of fruit bodies increased along with selenium concentration between 10 mg·kg－1～50 mg·kg－1．And the yield was highest in the treatment with selenium concentration of 50 mg·kg－1．The yield of A.auricula decreased when selenium concentration was more than 50 mg· kg－1．The analysis of selenium content in fruit bodies indicated that A.auricula had strong Se－enriching and Se－enduring ability,and that the Se content of A.auricula fruit bodies was positively correlated to Se－component added．

Auricularia auricula;selenium－enriched cultivation;yield;selenium content;Red Nano－Se

S646.6

A

1003-8310（2016）06-0028-03

10．13629/j．cnki．53－1054．2016．06．006

安徽省2015年科技對(duì)口幫扶項(xiàng)目（1504031180）。

萬水霞（1978－），女，碩士，助理研究員，主要從事農(nóng)業(yè)微生物和農(nóng)業(yè)廢棄物資源化研究。E－mail:wanshuixia2006＠126．com

**通信作者：蔣月光（1968－），男，碩士，助理研究員，主要從事農(nóng)業(yè)廢棄物資源化研究及硒元素研究。E－mail:2345678hf＠163．com

2016－09－10