張?zhí)m，滕珂，肖國增，梁小紅，許立新 ，尹淑霞，晁躍輝*

(1.北京林業(yè)大學(xué)林學(xué)院草坪研究所，北京 100083； 2.長江大學(xué)園藝園林學(xué)院，湖北 荊州 434025)

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日本結(jié)縷草ZjADH基因?qū)M南芥的轉(zhuǎn)化及其耐寒性分析

張?zhí)m1**，滕珂1**，肖國增2，梁小紅1，許立新1，尹淑霞1，晁躍輝1*

(1.北京林業(yè)大學(xué)林學(xué)院草坪研究所，北京 100083； 2.長江大學(xué)園藝園林學(xué)院，湖北 荊州 434025)

為研究日本結(jié)縷草ZjADH基因是否與植物耐寒有關(guān)，通過DNA重組技術(shù)將ZjADH基因插入3302Y質(zhì)粒中，成功構(gòu)建了植物表達載體3302Y-ZjADH，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花序侵染法獲得具有草銨膦抗性的轉(zhuǎn)基因植株。PCR和qRT-PCR鑒定表明，目的基因已整合入擬南芥基因組中并能夠成功表達。對野生型和轉(zhuǎn)基因擬南芥進行低溫(4 ℃)處理和耐寒分析，結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因擬南芥對低溫脅迫的抵抗能力明顯高于未轉(zhuǎn)基因植株。在低溫脅迫下，轉(zhuǎn)基因擬南芥中脯氨酸的含量顯著高于野生型植株，而活性氧的積累明顯低于野生型植株；對轉(zhuǎn)基因植物抗性相關(guān)基因的表達分析顯示：轉(zhuǎn)基因植物體內(nèi)SOD、APX及LEA基因的表達水平明顯高于未轉(zhuǎn)基因植株，說明ZjADH基因可能通過提高轉(zhuǎn)基因植物體內(nèi)SOD、APX及LEA的表達活性來增強植物的抗寒性。綜上所述，日本結(jié)縷草ZjADH基因的表達能夠提高轉(zhuǎn)基因植株的耐寒性，對ZjADH基因的研究也為進一步獲得抗寒轉(zhuǎn)基因日本結(jié)縷草植株奠定理論依據(jù)。

ZjADH基因；轉(zhuǎn)基因擬南芥；低溫脅迫；脯氨酸；活性氧

乙醇脫氫酶(alcohol dehydrogenase，ADH)雖然是植物中一個小的基因家族，但在植物抵抗低溫、干旱和高鹽等環(huán)境脅迫時，ADH通過將乙醛轉(zhuǎn)化為乙醇，產(chǎn)生少量能量來維持植物在逆境條件下的能量需求[1]。有關(guān)ADH基因在植物抵抗冷害脅迫中已有報道，研究表明，在模式植物擬南芥(Arabidopsisthaliana)和谷類作物中，ADH基因在其抵抗低溫脅迫的過程中發(fā)揮重要的作用，是低溫誘導(dǎo)基因之一[2]；在玉米(Zeamays)幼苗遭受冷害脅迫時，植物體內(nèi)ADH基因的表達量增加，而且在其雙缺失突變體Adh1-Adh2中，細胞膜損傷嚴重，直接導(dǎo)致細胞受損[3]；水稻(Oryzasativa)幼苗在低溫脅迫下，通過快速誘導(dǎo)該基因的表達，提高ADH的活性從而加強乙醇發(fā)酵途徑[4]。在野草莓(Fragariavesca)抵御低溫的過程中，ADH基因成為標記候選基因[5]；小果野蕉(Musaacuminata)ADH基因(MaADH)的表達也隨溫度的降低而逐漸升高[6]。

日本結(jié)縷草(Zoysiajaponica)主要分布在亞熱帶和熱帶地區(qū)，在改良生態(tài)環(huán)境、園林綠化和固土護坡等方面都起著不可代替的作用[7]，但因其不能在夏季太短或冬季太冷的地方生存，且在氣溫降至10 ℃以下時，生長緩慢或停止，葉片開始變黃甚至萎蔫，大大降低了其坪用價值和觀賞價值[8]。因此，低溫是限制和影響日本結(jié)縷草坪用性狀、自然分布和推廣應(yīng)用的主要因素[9-10]。隨著全球氣候變暖影響，種植在過渡地帶的日本結(jié)縷草更容易受“倒春寒”氣候的影響。本實驗室前期已從日本結(jié)縷草中克隆到ADH基因，被命名為ZjADH(GenBank登錄號為：KT596065)。在前期實驗的基礎(chǔ)上，通過構(gòu)建植物表達載體3302Y-ZjADH，利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化野生型擬南芥，經(jīng)除草劑草銨膦篩選和PCR鑒定轉(zhuǎn)基因植株后，對野生型和轉(zhuǎn)基因擬南芥進行冷脅迫處理及其相關(guān)生理生化指標測定，以此分析ZjADH基因在可能提高植物耐寒性上所發(fā)揮的作用，為該基因在抗寒作物的育種上提供技術(shù)支持和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

本試驗所用日本結(jié)縷草品種Zenith 的種子購自美國Hancock種子公司；野生型擬南芥(A.thaliana, Col-0)為本實驗室保存，播種參照Clarke的方法[11]，試驗于2015年6-12月，在北京林業(yè)大學(xué)苗圃溫室和草坪實驗室進行。MS培養(yǎng)基、表面活性劑Silwet-77購自Sigma公司；限制性內(nèi)切酶BglⅡ以及反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自Takara公司；實時熒光定量SYBR Mixture購自康為世紀生物科技有限公司；無縫連接酶購自中美泰和生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1ZjADH基因植物表達載體的構(gòu)建 根據(jù)本實驗室前期得到的日本結(jié)縷草ADH基因的已知序列設(shè)計用于構(gòu)建植物表達載體的引物，ADH-F：CACGGGGGACTCTTGACCATGGTAATGGCGACCGCCGGG-AAGGT；ADH-R：GGTACACGCGTACTAGTCAGATCGTTCTCCATGCGGATGATGCAG。以pEASY-ADH質(zhì)粒為模板，ADH-F和ADH-R為引物，擴增出帶有酶切位點的ADH基因的ORF。

通過BglⅡ限制性內(nèi)切酶對3302Y質(zhì)粒進行酶切處理，利用核酸純化試劑盒分別回收目的DNA。將純化的PCR產(chǎn)物及3302Y按照1∶1比例混勻，在無縫連接酶的作用下50 ℃反應(yīng)15 min。將反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受態(tài)細胞Trans-T1，并將其涂布含有50 mg/L卡那霉素的LB平板上，經(jīng)抗生素篩選后挑取能在平板上生長的單菌落，使用引物3302Y-F(TGACGCACAATCCCACTATCCTT)和3302Y-R(CCGTCCAGCTCGACCAGGAT)進行菌體PCR檢測。瓊脂糖凝膠電泳檢測過后，將能夠擴增出目的大小的DNA的大腸桿菌菌液送至北京睿博生物技術(shù)公司進行測序檢測。

1.2.2 擬南芥的轉(zhuǎn)化和篩選 利用CaCl2凍融法將1.2.1得到的正確重組質(zhì)粒導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)細胞中，挑取陽性農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化子，以3302Y-F和3302Y-R為引物進行菌體PCR鑒定。將含有植物表達載體3302Y的農(nóng)桿菌重新懸浮于侵染液中(含5%蔗糖和 0.05% Silwet-L77的1/2 MS培養(yǎng)液)；采用優(yōu)化的花序侵染法[11-12]將處于花蕾期的野生型擬南芥的花序浸泡在侵染液中，保持1～2 min，侵染后以較高的濕度在培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)24 h后正常培養(yǎng)。1周后再侵染一次，直至擬南芥正常開花結(jié)果，收獲種子。

將收獲的擬南芥種子消毒后，均勻撒在土中，放置在光照培養(yǎng)箱中，待擬南芥幼苗展開兩片子葉，對其噴施60 mg/L草銨膦，觀察生長狀態(tài)。挑取能夠正常生長的抗性幼苗，轉(zhuǎn)移至新花盆中，繼續(xù)生長。

1.2.3 再生植株的檢測 由于野生型擬南芥基因組中存在ADH基因序列，所以使用植物表達載體3302Y通用引物進行PCR鑒定。采用CTAB 法提取野生型和轉(zhuǎn)基因型擬南芥的基因組DNA，以3302Y-F和3302Y-R為上下游引物，基因組DNA為模板進行PCR鑒定。用Trizol 法提取擬南芥總RNA[13]，使用Primerscrip反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成第一鏈cDNA，以ADH-RT-F(TGTAAACCCGAAAGACCACAAGAA)和ADH-RT-R(GTACGCCCACCAGAACAGCAAC)為引物，cDNA為模板，擬南芥看家基因UBQ10(GenBank登陸號為：CP002687；UBQ10-F：AGTCCACCCTTCATCTTGTTCTC，UBQ10-R：GTCAGCCAAAGTTCTTCCATCT)作為內(nèi)參基因，qRT-PCR檢測擬南芥中ZjADH基因的相對表達量。反應(yīng)程序為：94 ℃ 10 min；94 ℃ 30 s；68 ℃ 1 min，40個循環(huán)。所得結(jié)果采用2-ΔΔCt法計算。

1.2.4 轉(zhuǎn)基因植株的低溫處理 將正常條件下生長30 d的轉(zhuǎn)基因和野生型擬南芥植株，轉(zhuǎn)移至低溫光照培養(yǎng)箱中，處理溫度為4 ℃。待14 d后，觀察表型，分析轉(zhuǎn)基因和野生型擬南芥對低溫的抵抗能力。此外，將低溫脅迫處理的植物取部分樣本后，立即放于液氮中速凍，之后保存于-80 ℃超低溫冰箱中，以備后續(xù)實驗。

1.2.5 轉(zhuǎn)基因擬南芥抗逆相關(guān)基因的表達分析 為分析日本結(jié)縷草ZjADH基因?qū)D(zhuǎn)基因擬南芥中其他抗逆相關(guān)基因的影響，通過qRT-PCR，對轉(zhuǎn)基因和野生型擬南芥中的抗壞血酸過氧化物酶(ascorbate peroxidase，APX)基因(APX-F：CTCTGGGACGATGCCACAAG；APX-R：CTCGACCAAAGGACGGAAAA)、過氧化物酶(peroxidase，POD)基因(POD-F：CCAAACTCTTCGTGGACTATGC；POD-R：AACTCTTGGTCGCTCTGGAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)基因(SOD-F：CGCATGATCCTTTGGCTTCG；SOD-R：TCCTGGTTGGCTGTGGTTTC)以及晚期胚胎發(fā)生豐富蛋白(late embriogenesis abundant protein，LEA)基因(LEA-F：GATTGACCCGGCTGAGCTACGA；LEA-R：AGATGGGATTCACCACAAAAGA)進行實時熒光定量檢測，以擬南芥看家基因UBQ10作為內(nèi)參基因?；蛳鄬Ρ磉_量的算法具體參照1.2.2。

1.2.6 擬南芥生理指標的測定 分別對低溫處理后的野生型和轉(zhuǎn)基因植株進行脯氨酸含量[14]和活性氧積累[15]的測定，明確其抗逆情況。

1.3 統(tǒng)計分析

采用Excel 2010和SPSS 18.0對熒光定量所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，Sigma Plot軟件進行作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 轉(zhuǎn)ZjADH基因擬南芥的鑒定

圖1 轉(zhuǎn)ZjADH基因擬南芥鑒定Fig.1 Validation of transgenic A. thaliana

通過花序侵染法，轉(zhuǎn)化野生型擬南芥植株，收種篩選。噴施草銨膦7 d后，未轉(zhuǎn)化成功的擬南芥逐漸枯萎、死亡，而轉(zhuǎn)基因成功的擬南芥仍能保持綠色，正常生長。提取具有草銨膦抗性的擬南芥基因組DNA，進行PCR檢測。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖電泳檢測分析表明，所選的擬南芥大多均能在1100 bp左右的位置處擴增出一條與目的基因大小吻合的條帶(圖1)，初步證明，目的基因ZjADH轉(zhuǎn)化擬南芥成功。

圖2 野生型與轉(zhuǎn)基因擬南芥中ZjADH基因的相對表達水平 Fig.2 Relative expression levels of ZjADH in wild type and transgenic A. thalianaWT：野生型擬南芥Wild type A. thaliana；OE-1，OE-2：轉(zhuǎn)基因擬南芥Transgenic A. thaliana. 下同 The same below.

圖3 野生型和轉(zhuǎn)基因擬南芥低溫處理Fig.3 Cold treatment of WT and transgenic A. thaliana

圖4 野生型與轉(zhuǎn)基因擬南芥中脯氨酸含量Fig.4 Proline contents in WT and transgenic A. thaliana0 d：正常生長條件Normal conditions；14 d：低溫處理14 d Cold conditions for 14 days.

圖5 野生型與轉(zhuǎn)基因擬南芥中活性氧的積累 Fig.5 Accumulation of ROS in WT and transgenic A. thaliana

利用熒光定量RT-PCR的方法分析轉(zhuǎn)基因及野生型擬南芥中ZjADH基因的表達情況，結(jié)果表明，在轉(zhuǎn)基因植株中ZjADH基因高效表達，而野生型擬南芥中沒有檢測到日本結(jié)縷草ZjADH基因的表達(圖2)。選取高效表達外源基因的擬南芥植株OE-1和OE-2進行下一步的實驗。

2.2 低溫脅迫下轉(zhuǎn)基因擬南芥的生理生化指標分析

2.2.1 低溫脅迫提高轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗寒性 本實驗室前期對ZjADH基因的研究表明：ZjADH基因受低溫脅迫誘導(dǎo)表達。為進一步研究ZjADH基因是否與提高植物抗寒性有關(guān)，從生理生化角度分析轉(zhuǎn)ZjADH基因的擬南芥與野生型之間的異同。4 ℃低溫處理使得轉(zhuǎn)基因和野生型擬南芥均呈現(xiàn)不同程度的萎蔫，但轉(zhuǎn)基因擬南芥明顯比野生型擬南芥生長狀態(tài)要好，尤其是OE-2植株，葉片幾乎沒有變化(圖3)。從葉片表型的異同說明轉(zhuǎn)ZjADH基因的擬南芥與野生型相比，抗寒性有所差異。

2.2.2 轉(zhuǎn)ZjADH基因提高脯氨酸含量 植物體內(nèi)脯氨酸的含量在一定程度上反映了植物的抗逆性。在低溫條件下，植物組織中脯氨酸增加，可提高植物的抗寒性[16]。因此，測定低溫處理前后野生型和轉(zhuǎn)基因擬南芥中脯氨酸的含量，結(jié)果顯示：無論是野生型還是轉(zhuǎn)基因植株低溫處理后脯氨酸含量均有明顯的升高，但轉(zhuǎn)基因植物中脯氨酸提高的水平明顯高于野生型，其中OE-1低溫處理后脯氨酸含量升高355%，OE-2升高了408%，而野生型升高了127%(圖4)。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)ZjADH基因的擬南芥植株能顯著增加低溫處理后脯氨酸的含量。

2.2.3 轉(zhuǎn)ZjADH基因?qū)钚匝踝杂苫挠绊?環(huán)境脅迫會使植物細胞積累大量的活性氧，從而損傷生物大分子，甚至毒害植物細胞[17]。用DAB染液分別侵染低溫處理后野生型和轉(zhuǎn)基因擬南芥葉片，結(jié)果顯示：野生型擬南芥葉片過氧化氫的積累量顯著高于OE-1和OE-2，尤其是OE-2植物葉片中超氧負離子和過氧化氫的積累量明顯少于野生型擬南芥(圖5)。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)ZjADH基因的擬南芥植株能通過消除體內(nèi)活性氧的過量積累而提高抗逆性。

圖6 抗氧化基因相對表達水平Fig.6 Relative expression levels of genes involved in anti-oxidation

2.2.5 轉(zhuǎn)ZjADH基因?qū)EA基因的影響研究

圖7 LEA相對表達水平Fig.7 Relative expression levels of LEA

表明，擬南芥、煙草(Nicotianatabacum)、桑樹(Morusalba)，菠菜(Spinaciaoleracea)等植物在受到冷害脅迫后，可誘導(dǎo)大量LEA蛋白表達，從而減緩低溫對植物引起的傷害[19]。為了分析ZjADH基因?qū)χ参矬w內(nèi)LEA基因表達的影響，進行了實時熒光定量檢測。結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)基因植物中LEA基因的表達水平顯著高于野生型，其中OE-1中LEA基因表達水平提高了127%，OE-2中LEA基因表達水平提高了151%(圖7)。由此表明，ZjADH基因能夠通過提高LEA基因的表達水平，進而增強轉(zhuǎn)基因植物對低溫的抵抗能力。

3 討論

轉(zhuǎn)基因作為基因工程的一種重要技術(shù)，在基因功能鑒定方面得到了越來越多的應(yīng)用。在模式植物中表達外源基因，可通過表型觀察和相關(guān)生理指標測定初步分析其功能。本研究中的ZjADH基因是本實驗室在前期研究獲得的，其核酸長度1140 bp，編碼一條379個氨基酸的多肽鏈，C端有一個ADH-Zinc-N結(jié)構(gòu)，屬于MDR超家族。前人報道表明，ADH基因不僅參與植物器官的生長發(fā)育，而且在逆境脅迫條件下，植物會通過ADH參與的乙醇代謝途徑而獲得能量，同時也減少了乙醛對植物體的傷害[20]。目前，雖然已經(jīng)從不同物種中克隆出ADH基因，并分析了其在不同激素和環(huán)境脅迫下的表達模式，但通過擬南芥轉(zhuǎn)化研究日本結(jié)縷草ADH基因功能的文章尚未報道。研究表明，不同物種中，ADH基因的耐受性有所差異：煙草中ADH基因的表達更易受干旱和鹽脅迫誘導(dǎo)；大豆(Glycinemax)中ADH基因的表達雖不受冷害和干旱脅迫影響，但澇害能明顯誘導(dǎo)其表達；在谷類作物和香蕉中，ADH基因是響應(yīng)冷脅迫較常見的一種基因[21]。日本結(jié)縷草ADH基因在前期的研究結(jié)果表明，低溫、干旱和高鹽脅迫均能誘導(dǎo)ZjADH基因的表達，鑒于日本結(jié)縷草在過渡地帶易受低溫環(huán)境影響，因此，通過轉(zhuǎn)基因的方法能更進一步明確ZjADH基因在提高植物耐寒性上的作用。

在低溫等逆境條件下，為維持正常的新陳代謝活動，植物體內(nèi)會通過基因表達和酶活性的變化富集一系列具有保護功能的親水性蛋白，如胚胎發(fā)育晚期豐富蛋白LEA等來保護其免受傷害[22]。前人研究表明，LEA蛋白具有清除活性氧自由基等功能[23]。此外，對轉(zhuǎn)檉柳(Tamarixchinensis)LEA基因煙草的耐低溫分析表明，野生型煙草的相對電導(dǎo)率和丙二醛含量明顯高于轉(zhuǎn)基因煙草，表明檉柳LEA蛋白基因的導(dǎo)入提高了煙草的耐低溫能力[24]。本研究中轉(zhuǎn)ZjADH基因擬南芥中LEA基因的相對表達水平顯著高于野生型，該結(jié)果表明，ZjADH基因一方面可能通過提高植物體內(nèi)LEA基因的表達水平清除體內(nèi)過量活性氧的積累，防止植物受氧化損傷；另一方面可能通過富集大量的LEA蛋白提高植物的耐寒性。

正常情況下，植物體內(nèi)活性氧的產(chǎn)生和清除總是處于動態(tài)平衡，但在遭受非生物脅迫時，會迫使植物體內(nèi)細胞產(chǎn)生大量活性氧自由基，而其對細胞有明顯的毒害作用[17]。本研究結(jié)果表明ZjADH基因不僅能增強植物體內(nèi)SOD和APX基因的表達水平，而且轉(zhuǎn)基因擬南芥在低溫脅迫下過氧化氫和超氧陰離子自由基的積累明顯少于野生型，說明ZjADH基因很可能通過提高植物體內(nèi)SOD和APX基因的表達水平而清除植物體內(nèi)過量活性氧的積累，從而減少植物在低溫條件下產(chǎn)生的氧化損害。至于轉(zhuǎn)基因植株中POD表達量下降的原因，還需做進一步的實驗研究。

脯氨酸作為一種重要的植物逆境響應(yīng)的指標，實驗證明脯氨酸在植物遭受冷害脅迫時，通過滲透調(diào)節(jié)作用保護原生質(zhì)體和蛋白質(zhì)分子，也可以作為能源物質(zhì)和N源來補償植物所需能源的不足[16]。因此，低溫條件下植物體內(nèi)脯氨酸的積累被廣泛用于抗寒力鑒定。本實驗中，轉(zhuǎn)基因植物與野生型在正常條件下，脯氨酸含量沒有明顯差別，但低溫處理14 d后，轉(zhuǎn)基因植物脯氨酸提高的水平明顯高于野生型的提高水平，說明ZjADH可能通過調(diào)節(jié)脯氨酸含量來提高植物的耐低溫性。

4 結(jié)論

本研究成功構(gòu)建了植物表達載體3302Y-ZjADH，通過轉(zhuǎn)化野生型擬南芥，獲得轉(zhuǎn)ZjADH基因植株，低溫脅迫下，轉(zhuǎn)基因擬南芥能通過增強體內(nèi)SOD、APX和LEA基因的表達水平、增加脯氨酸含量及清除活性氧自由基的過量積累來提高植物的耐寒性，為利用基因工程技術(shù)培育抗寒性的日本結(jié)縷草新品種提供了理論依據(jù)。

在新時期、新課程的背景下，自主閱讀教學(xué)研究成為高中語文教學(xué)的重要課題，語文閱讀教學(xué)目標是否正確、教育成敗優(yōu)劣深深地影響著我國國民素質(zhì)的高低，影響未來人才質(zhì)量的高低。所以教師要在實際教學(xué)中，促使學(xué)生進行自主學(xué)習(xí)，通過對話教學(xué)不斷提高學(xué)生對語言的運用能力，充分發(fā)揮學(xué)生自主學(xué)習(xí)的效果，使學(xué)習(xí)達到最佳效果。

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Transformation ofZjADHgene intoArabidopsisthalianaand cold-tolerance analysis of transgenic plants

ZHANG Lan1**, TENG Ke1**, XIAO Guo-Zeng2, LIANG Xiao-Hong1, XU Li-Xin1, YIN Shu-Xia1, CHAO Yue-Hui1*

1.TurfgrassResearchInstitute,CollegeofForestry,BeijingForestryUniversity,Beijing100083,China; 2.TheCollegeofHorticultureandGarden,YangtzeUniversity,Jingzhou434025,China

To study the relationship between theZjADHgene and plant cold tolerance, a plant expression vector 3302Y-ZjADH was constructed through DNA recombination technology. TransgenicArabidopsisthalianaplants with glufosiante resistance were generated by floral dip method. PCR and qRT-PCR results showed that the target gene was successfully integrated with the genomes of Arabidopsis and could express efficiently. Both wild type and transgenic Arabidopsis plants were subjected to 4 ℃ to investigate their cold tolerance. Tests demonstrated that, compared with the wild type, the transgenic plants were more tolerant of cold stress. The free proline content in transgenic plants was significantly higher than the control, while the accumulation of ROS was much lower than the wild type. In addition, the expression levels of genes related to stresses likeSOD,APXandLEAin transgenic plants were much higher than in the control. Results indicated that over-expression ofZjADHmay improve the activities of superoxide dismutase (SOD), ascorbate peroxidase (APX) and late embryogenesis abundant proteins (LEA) to improve the cold tolerance of transgenic plants. In conclusion, the heterologous expression ofZjADHgenes could reinforce the resistance of plants to cold stress. This study provides a theoretical foundation for future research on theZjADHgene and the cultivation of cold-tolerantZoysiajaponicacultivars.

ZjADHgene； transgenicArabidopsisthaliana； cold stress； proline； ROS

10.11686/cyxb2016158

http://cyxb.lzu.edu.cn

2016-04-12；改回日期：2016-06-06

北京林業(yè)大學(xué)科技創(chuàng)新計劃項目(BLX2014-06)，國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(863計劃)(2013AA102607)和中國林學(xué)會-青年人才托舉工程資助。

張?zhí)m(1990-)，女，甘肅平?jīng)鋈耍谧x碩士。E-mail: zhangdalan@bjfu.edu.cn。滕珂(1989-)，男，山東淄博人，在讀博士。 E-mail: tengke@bjfu.edu.cn。**共同第一作者These authors contributed equally to this work.*通信作者Corresponding author. E-mail: chaoyuehui@163.com

張?zhí)m，滕珂，肖國增，梁小紅，許立新，尹淑霞，晁躍輝. 日本結(jié)縷草ZjADH基因?qū)M南芥的轉(zhuǎn)化及其耐寒性分析. 草業(yè)學(xué)報, 2016, 25(11): 43-49.

ZHANG Lan, TENG Ke, XIAO Guo-Zeng, LIANG Xiao-Hong, XU Li-Xin, YIN Shu-Xia, CHAO Yue-Hui. Transformation ofZjADHgene intoArabidopsisthalianaand cold-tolerance analysis of transgenic plants. Acta Prataculturae Sinica, 2016, 25(11): 43-49.