李 輝,湯 進(jìn),黃曉霞

(1.漢中市中心血站檢驗(yàn)科，陜西漢中 723000；2.漢中市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西漢中 723000)

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·論 著·

涂陽肺結(jié)核患者TB-DNA定量、γ干擾素釋放試驗(yàn)、結(jié)核抗體檢測的價值

李 輝1,湯 進(jìn)2△,黃曉霞2

(1.漢中市中心血站檢驗(yàn)科，陜西漢中 723000；2.漢中市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西漢中 723000)

目的 探討肺結(jié)核(TB)-DNA定量、γ干擾素釋放試驗(yàn)(T-SPOT.TB)、結(jié)核抗體檢測對活動性肺結(jié)核輔助診斷的價值。方法 回顧性分析2013年7月至2014年6月入院確診為肺結(jié)核且抗酸桿菌痰涂片陽性51例患者的TB-DNA定量、T-SPOT.TB、結(jié)核抗體檢測指標(biāo)。結(jié)果T-SPOT.TB檢測陽性率為90.2%，靈敏度最高；其次為TB-DNA定量，陽性率為74.5%；結(jié)核抗體檢測陽性率僅為37.3%，靈敏度最低。結(jié)論T-SPOT.TB檢測不受標(biāo)本采集的影響，靈敏度高，對活動性肺結(jié)核的輔助診斷具有較高價值。

結(jié)核,肺/診斷； 分枝桿菌,結(jié)核; 染色與標(biāo)記; 顯微鏡檢查；TB-DNA定量；γ干擾素釋放試驗(yàn)； 結(jié)核抗體

我國是世界上22個結(jié)核病高疫情國家之一，患者數(shù)居世界第2位，感染率為44．5%，活動性結(jié)核病患者為450萬例，每年死亡人數(shù)達(dá)13萬例，是其他傳染病總死亡人數(shù)的2倍以上[1]。其中肺結(jié)核(TB)最為常見，痰涂片抗酸桿菌陽性(以下簡稱涂片陽性)是最簡便、實(shí)用的手段，也是活動性TB重要檢測指標(biāo)之一。本研究試圖通過對51例確診為活動性TB且涂片陽性患者的DNA定量、γ干擾素釋放試驗(yàn)(T-SPOT.TB)、結(jié)核抗體檢測探討活動性肺結(jié)核輔助診斷的價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年7月至2014年6月陜西省漢中市中心醫(yī)院確診為TB且涂片陽性患者51例，其中男27例，女24例，男女性別比1∶1.12；年齡13～78歲。51例患者均進(jìn)行結(jié)核桿菌痰涂片、TB-DNA定量、T-SPOT.TB、結(jié)核抗體檢測。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集

1.2.1.1 痰液標(biāo)本的采集 患者清晨用生理鹽水漱口后深部咳出痰于2個無菌密封痰杯內(nèi)，30 min內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室；立即進(jìn)行痰涂片顯微鏡低倍視野下白細(xì)胞大于25個，鱗狀上皮細(xì)胞小于10個，判斷痰液合格后進(jìn)行抗酸染色及TB-DNA定量檢測。

1.2.1.2 血液標(biāo)本的采集 用肝素鈉管和生化管分別采集患者清晨空腹靜脈血3、5 mL，2 h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測。

1.2.2 結(jié)核桿菌痰涂片 染色方法采用齊爾-尼爾森(Ziehl-Neelsen)染色法；試劑采用貝索公司成品染液。結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)：在淡藍(lán)色背景下抗酸桿菌呈紅色，其他細(xì)菌和細(xì)胞呈藍(lán)色。根據(jù)細(xì)菌數(shù)量分為6個標(biāo)準(zhǔn)：(1)抗酸桿菌陰性，連續(xù)觀察300個不同視野，未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌；(2)抗酸桿菌可疑(±)，1～2條抗酸桿菌/300視野；(3)抗酸桿菌陽性(1+)，3～9條抗酸桿菌/100視野；(4)抗酸桿菌陽性(2+)，1～9條抗酸桿菌/10視野；(5)抗酸桿菌陽性(3+)，1～9條抗酸桿菌/每視野；(6)抗酸桿菌陽性(4+)，≥10條抗酸桿菌/每視野。

1.2.3 TB-DNA定量 熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)基因擴(kuò)增儀及TB-PCR熒光定量檢測試劑盒使用中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司產(chǎn)品，結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)：>50拷貝為TB-DNA陽性。

1.2.4 T-SPOT.TB 使用英國Oxford Immunotec公司結(jié)核感染T細(xì)胞檢測試劑盒，結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)：A抗原孔或B抗原孔斑點(diǎn)數(shù)大于等于6為陽性。

1.2.5 結(jié)核抗體檢測 金標(biāo)法試劑盒由珠海市銀科醫(yī)學(xué)工程有限公司提供。

2 結(jié) 果

2.1 51例涂片陽性患者TB-DNA、T-SPOT.TB、結(jié)核抗體檢測結(jié)果 T-SPOT.TB檢測A抗原孔均值為63，B抗原孔均值為179。TB-DNA在103拷貝級別5例，占9.8%；104拷貝級別7例，占13.7%；105拷貝級別5例，占9.8%；106拷貝級別18例，占35.3%；107拷貝級別3例，占5.9%。見表1。

表1 51例涂片陽性患者TB-DNA、T-SPOT.TB、結(jié)核抗體檢測結(jié)果

續(xù)表1 51例涂片陽性患者TB-DNA、T-SPOT.TB、結(jié)核抗體檢測結(jié)果

2.2 51例涂片陽性患者TB-DNA、T-SPOT.TB、結(jié)核抗體檢測結(jié)果比較 見表2。

表2 51例涂片陽性患者TB-DNA、T-SPOT.TB、結(jié)核抗體檢測結(jié)果比較

3 討 論

不同方法對痰液結(jié)核分枝桿菌的檢測效果存在差異，應(yīng)根據(jù)臨床實(shí)際情況加以選擇，發(fā)揮不同檢測手段的優(yōu)勢[2]。通過對涂片陽性TB患者TB-DNA、T-SPOT.TB、結(jié)核抗體檢測結(jié)果顯示，T-SPOT.TB檢測陽性率為90.2%，靈敏度最高，與于永敏[3]和王瑩等[4]報道的結(jié)果相近。5例陰性患者中4例均來自血液科，白細(xì)胞計數(shù)均低于2.0×106L-1，是否對T-SPOT.TB檢測構(gòu)成影響尚有待于進(jìn)一步研究。

TB-DNA檢測陽性率為74.5%，與朱玉蘭等[5]報道的100.0%有一定差距，分析其原因可能有以下幾點(diǎn)：(1)與痰標(biāo)本留取的質(zhì)量有關(guān)，如果患者痰液留取不規(guī)范，標(biāo)本中很可能無結(jié)核桿菌，故造成陰性；(2)主觀誤差，PCR檢測操作要求很高，個別標(biāo)本在DNA提取過程中很有可能造成DNA裂解或破壞，造成陰性；(4)本研究TB-DNA和結(jié)核桿菌涂片未用同一份標(biāo)本檢測，而是2份標(biāo)本分別檢測，會造成2份標(biāo)本有一定差異；(4)朱玉蘭等[5]報道的100.0%陽性率尚有待于其他研究進(jìn)一步論證。

結(jié)核抗體檢測陽性率僅為37.3%，靈敏度很低，與張瑛等[6]報道的結(jié)果一致，但與辛茶香等[7]和邱素娟等[8]報道的79.6%和84.1%差距較大，分析可能為不同廠家試劑靈敏度和特異性存在較大差異。故在活動性結(jié)核診斷中不推薦應(yīng)用。

通過以上分析作者認(rèn)為，T-SPOT.TB檢測不受標(biāo)本采集的影響，靈敏度高，對活動性TB的輔助診斷具有很高價值。劉珍瓊等[9]采用T-SPOT．TB檢測外周血和胸腔積液中單個核細(xì)胞結(jié)核桿菌感染，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有助于提高結(jié)核性胸膜炎的診斷率，且在疑似結(jié)核患者中T-SPOT．TB檢測陽性預(yù)測值為96.5%，陰性預(yù)測值為86.9%，具有較高的靈敏度和特異性[10]，另外伍仕敏等[11]報道T-SPOT.TB檢測對診斷結(jié)核病有較高的靈敏度與特異性，尤其是對抗酸桿菌陰性的肺結(jié)核和肺外結(jié)核有80%以上的檢出率，有很好的臨床應(yīng)用前景[11]，故作者認(rèn)為該項技術(shù)值得臨床推薦應(yīng)用。

T-SPOT.TBA抗原孔均值為63，B抗原孔均值為179；對高于均值的其他結(jié)核患者是否提示活動性結(jié)核的可能？尚有待于進(jìn)一步研究。

[1]全國結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查技術(shù)指導(dǎo)組．2000年全國結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查報告[J]．中國防癆雜志，2002，24(2)：65-108.

[2]王慧.3種方法對痰液標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌檢測結(jié)果的影響[J].臨床合理用藥雜志，2013，6(7)：107-108.

[3]于永敏.結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽性患者T-SPOT．TB檢測結(jié)果分析[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(1)：106-107.

[4]王瑩，陽幼榮，尹文東，等.全血γ-干擾素釋放試驗(yàn)對活動性結(jié)核病的輔助診斷價值[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2012，19(4)：193-197.

[5]朱玉蘭，王佃鵬，高朝賢，等.結(jié)核分枝桿菌熒光定量PCR檢測方法的建立與應(yīng)用[J].中國熱帶醫(yī)學(xué)，2008，8(10)：1680-1682

[6]張瑛，孫亞蒙，徐欣暉，等.結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在結(jié)核性疾病中的診斷價值[J].中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2010，4(12)：64-67.

[7]辛茶香，陳超.血清中結(jié)核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測在肺結(jié)核診斷中的應(yīng)用價值[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2015，33(4)：430-431.

[8]邱素娟，歐宏杰，馬筱玲.289例結(jié)核感染患者外周全血T-SPOT.TB檢測與結(jié)核抗體IgM比較結(jié)果分析[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥，2013，20(13)：104-105.

[9]劉珍瓊，段永和，張齊龍，等.T-SPOT．TB技術(shù)檢測胸腔積液在結(jié)核性胸膜炎診斷中的應(yīng)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2013，31(4)：306-308.

[10]雷紅鴿，張敏，韓豐娟，等.疑似結(jié)核患者T-SPOT.TB檢測結(jié)果分析[J].河北醫(yī)藥，2015，37(10)：1523-1526.

[11]伍仕敏，項杰，周虹，等.γ-干擾素釋放試驗(yàn)在肺結(jié)核和肺外結(jié)核診斷中的應(yīng)用[J].武漢大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2013，34(3)：403-406.

The value of quantitative TB-DNA test，interferon gamma release test，tuberculosis antibody detection in the pulmonary tuberculosis smear positive patients

LiHui1，TangJin2△，HuangXiaoxia2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,HanzhoungCentralBloodStation，Hanzhong，Shannxi723000,China; 2.DepartmentofClinicalLaboratory，HanzhongCentralHospital，Hanzhong，Shannxi723000,China)

Objective To investigate the value of quantitative TB-DNA test，interferon gamma release test and the detection of tuberculosis antibodies for the diagnosis of active pulmonary tuberculosis.Methods 51 patients were diagnosed as tuberculosis from 2013 July to 2014 June in the hospital，whose sputum smear microscopy for acid fast bacilli were positive.Then TB-DNA quantitative test，interferon gamma release test (T-SPOT.TB)and tuberculosis antibody detection were performed for those patients.All the result were retrospectively analysed.Results The positive rate of T-SPOT.TB was 90.1%，the positive rate of quantitative TB-DNA test was 74.5% and the positive rate of tuberculosis antibody detection was 37.3%.Conclusion Because the result of T-SPOT.TB is not affected by the process of specimen collection，it is the most sensitive test of the three tests at present，and has higher value in the auxiliary diagnosis of active pulmonary tuberculosis than the other two.

tuberculosis,pulmonary/diagnosis； mycobacterium tuberculosis； staining and labeling； microscopy； quantitative TB-DNA; interferon gamma release test; tuberculosis antibody

李輝，男，主管檢驗(yàn)醫(yī)師，主要從事血液檢測的研究。△

E-mail：5461718@qq.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.02.028

A

1673-4130(2016)02-0211-03

2015-09-19)