余喜然，卓德祥，湯俊峰，鄭水娥

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬三明第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建三明 365000)

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·論 著·

聯(lián)合檢驗(yàn)對(duì)珠蛋白生成障礙性貧血與缺鐵性貧血的診斷價(jià)值評(píng)價(jià)

余喜然，卓德祥，湯俊峰，鄭水娥

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬三明第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建三明 365000)

目的 研究聯(lián)合檢驗(yàn)對(duì)珠蛋白生成障礙性貧血(以下簡稱地貧)與缺鐵性貧血(IDA)的診斷價(jià)值。方法 選擇2013年8月至2015年2月該院收治的地貧患者36例、IDA患者34例及健康體檢者30例作為研究對(duì)象。對(duì)各組入選樣本進(jìn)行聯(lián)合檢驗(yàn)，檢測(cè)內(nèi)容包括平均紅細(xì)胞比容(MCV)、紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW)、血紅蛋白(Hb)電泳及紅細(xì)胞(RBC)滲透脆性試驗(yàn)(以下簡稱RBC脆性)等血液學(xué)指標(biāo)。結(jié)果IDA組和地貧組患者M(jìn)CV、RBC脆性均下降，IDA組患者RDW上升，地貧組患者HbA2上升，與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RDW對(duì)IDA的靈敏度為70.6%，低于地貧(77.8%)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。MCV、Hb電泳、RBC脆性對(duì)地貧的靈敏度分別為97.2%、88.9%、77.8%，特異性分別為80.0%、90.0%、83.3%。MCV聯(lián)合Hb電泳、Hb電泳聯(lián)合RBC脆性、MCV聯(lián)合Hb電泳聯(lián)合RBC脆性并聯(lián)試驗(yàn)對(duì)地貧的靈敏度分別為100.0%、97.2%、100.0%，明顯高于單項(xiàng)檢驗(yàn)的靈敏度；而MCV聯(lián)合Hb電泳、Hb電泳聯(lián)合RBC脆性、MCV聯(lián)合Hb電泳聯(lián)合RBC脆性串聯(lián)試驗(yàn)對(duì)地貧的特異性分別為96.7%、100.0%、100.0%，明顯高于單項(xiàng)檢驗(yàn)特異性，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 應(yīng)用血液學(xué)指標(biāo)、Hb電泳及RBC脆性聯(lián)合檢驗(yàn)地貧與IDA能顯著提高診斷準(zhǔn)確性，值得推廣應(yīng)用。

實(shí)驗(yàn)室技術(shù)和方法； 地中海貧血/診斷； 貧血,缺鐵性/診斷

珠蛋白生成障礙性貧血(以下簡稱地貧)是一種遺傳性溶血性疾病，是由珠蛋白肽鏈合成速率不平衡，引起血紅蛋白合成障礙所致[1]。地貧除伴輕微貧血或精神不佳外通常無明顯臨床特征，但當(dāng)配偶均為地貧雜合子攜帶者時(shí)則易發(fā)生基因缺失或突變，導(dǎo)致新生兒死亡或妊娠晚期胎死腹中。隨著循證檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的興起，發(fā)現(xiàn)過多的檢查會(huì)干擾診斷結(jié)果和治療預(yù)后。鑒于此，本研究從循證觀念著手，對(duì)平均紅細(xì)胞比容(MCV)、紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW)、血紅蛋白(Hb)電泳及紅細(xì)胞(RBC)滲透脆性試驗(yàn)(以下簡稱RBC脆性)等指標(biāo)檢測(cè)及其聯(lián)合檢測(cè)進(jìn)行系統(tǒng)分析，旨在篩查出地貧雜合子攜帶者，改善圍生兒不良結(jié)局，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年8月至2015年2月本院收治的地貧患者36例(地貧組)，其中男21例，女15例；年齡7～42歲，平均(24.9±3.3)歲。缺鐵性貧血(IDA)患者34例(IDA組)，其中男12例，女22例；年齡10～54歲，平均(31.4±4.1)歲。地貧組和IDA組患者均經(jīng)《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》分型確診[2]。另選擇同期健康體檢者30例為對(duì)照組，其中男14例，女16例；年齡19～51歲，平均(33.6±3.4)歲。

1.2 標(biāo)本采集及檢驗(yàn) 采集入選者早晨空腹肘靜脈血1～2 mL置于含乙二胺四乙酸二鉀的冷試管中混合10～20 min，保存于溫室中，每日質(zhì)控。

1.2.1 MCV、RDW檢驗(yàn) 采用日本K-4500型全自動(dòng)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)儀嚴(yán)格按操作流程進(jìn)行測(cè)定。正常范圍：MCV 82～94 fL，RDW 11.6%～14.6%。

1.2.2 Hb電泳檢驗(yàn) 采用美國spife3000型全自動(dòng)電泳分析儀進(jìn)行Hb電泳檢驗(yàn)。參考標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴快速區(qū)帶初步診斷為α-地貧；(2)HbA2 3.5%～6.0%診斷為輕型β-地貧；(3)HbF>40.0%，僅少量或無HbA確診為重型β-地貧。

1.2.3 RBC脆性檢驗(yàn) 采用簡易紅細(xì)胞脆性一管法，正常參考值為溶血百分率大于60%。

1.2.4 地貧基因診斷 α-珠蛋白基因檢驗(yàn)應(yīng)用雙重PCR擴(kuò)增技術(shù)，β-珠蛋白基因采用反向雜交技術(shù)。

1.3 診斷評(píng)價(jià) 參考全國臨床血液學(xué)指標(biāo)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)[3]：MCV陽性數(shù)和敏感數(shù)均為小于82 fL，陰性數(shù)和不敏感數(shù)均為大于82 fL；RDW陽性數(shù)和敏感數(shù)均為大于14.6%，陰性數(shù)和不敏感數(shù)均為11.6%～14.6%；Hb電泳陽性數(shù)和敏感數(shù)均為小于2.5%或大于3.5%，陰性數(shù)和不敏感數(shù)均為2.5%～3.5%；RBC脆性陽性數(shù)和敏感數(shù)均為小于60%，陰性數(shù)和不敏感數(shù)均為大于60%。并聯(lián)試驗(yàn)：檢驗(yàn)中存在陽性結(jié)果即為陽性數(shù)；串聯(lián)試驗(yàn)：所有檢驗(yàn)均為陽性結(jié)果即為陽性數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1 各組血液學(xué)指標(biāo)比較IDA組患者M(jìn)CV下降，RDW上升，RBC脆性下降；地貧組患者M(jìn)CV下降，HbA2上升，RBC脆性下降。與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組血液學(xué)指標(biāo)比較

*：P<0.05，與對(duì)照組比較。

2.2RDW檢驗(yàn)IDA與地貧的結(jié)果 34例IDA組患者中RDW陽性14例，陰性10例，RDW對(duì)IDA的靈敏度為70.6%；36例地貧組患者中RDW陽性8例，陰性28例，RDW對(duì)IDA的靈敏度為77.8%。RDW對(duì)IDA的靈敏度低于地貧，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 單項(xiàng)檢驗(yàn)對(duì)地貧的診斷評(píng)價(jià) 36例地貧組患者中MCV陽性35例，陰性1例；Hb電泳陽性32例，陰性4例；RBC脆性陽性28例，陰性8例。30例對(duì)照組健康者中MCV陽性5例，陰性24例；Hb電泳陽性3例，陰性27例；RBC脆性陽性5例，陰性25例。MCV對(duì)地貧的靈敏度為97.2%，特異性為80.0%；Hb電泳對(duì)地貧的靈敏度為88.9%，特異性為90.0%；RBC脆性對(duì)地貧的靈敏度為77.8%，特異性為83.3%。

2.4 聯(lián)合檢驗(yàn)對(duì)地貧的診斷評(píng)價(jià)MCV聯(lián)合Hb電泳、Hb電泳聯(lián)合RBC脆性、MCV聯(lián)合Hb電泳聯(lián)合RBC脆性并聯(lián)試驗(yàn)對(duì)地貧的靈敏度分別為100.0%、97.2%、100.0%；MCV聯(lián)合Hb電泳、Hb電泳聯(lián)合RBC脆性、MCV聯(lián)合Hb電泳聯(lián)合RBC脆性串聯(lián)試驗(yàn)對(duì)地貧的特異性分別為96.7%、100.0%、100.0%。見表2。

表2 聯(lián)合檢驗(yàn)對(duì)地貧的診斷評(píng)價(jià)(n)

3 討 論

IDA是由體內(nèi)鐵供應(yīng)量難以滿足正常紅細(xì)胞生長的需求量而引起Hb合成障礙的一種常見貧血[4]。而地貧是一組染色體不完全顯性遺傳性溶血性貧血，地貧患者可以通過配偶雙方遺傳給下代。因此，婚齡夫婦在婚前、孕前進(jìn)行地貧檢查對(duì)改善圍生兒不良結(jié)局至關(guān)重要。據(jù)國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道，聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)結(jié)合其他分子生物學(xué)檢驗(yàn)是地貧檢測(cè)最有效的診斷方法，但價(jià)格昂貴、操作復(fù)雜，不利于臨床普檢[5-6]。IDA和地貧均為小細(xì)胞低色素貧血[7]，且MCV、RDW、Hb電泳及RBC脆性血液學(xué)指標(biāo)均是小細(xì)胞低色素貧血的常用分類指標(biāo)。因此，本研究將該類血液學(xué)指標(biāo)應(yīng)用于產(chǎn)前對(duì)地貧雜合子攜帶者的篩查，且與分子學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，以評(píng)價(jià)上述檢驗(yàn)方式在篩查地貧中的應(yīng)用價(jià)值，進(jìn)而獲得一種最為合適的檢驗(yàn)方式。

本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較IDA組患者RDW上升，而地貧組患者RDW無明顯變化，且RDW對(duì)IDA的靈敏度為70.6%。提示RDW能區(qū)分IDA與地貧，且可以作為篩查IDA的初步診斷指標(biāo)，與Singer等[8]和張莉等[9]研究結(jié)果相似，依據(jù)MCV、RDW參數(shù)分類法，IDA屬小細(xì)胞不均一性貧血，表現(xiàn)為MCV下降，RDW上升；而地貧屬小細(xì)胞均一性貧血，表現(xiàn)為MCV下降，RDW正常。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，地貧組患者M(jìn)CV、HbA2、RBC脆性與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明MCV、HbA2、RBC脆性聯(lián)合檢驗(yàn)可降低漏檢率。另外在單項(xiàng)檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，MCV對(duì)地貧的靈敏度優(yōu)于Hb電泳、RBC脆性，提示MCV下降是地貧的一種普遍特性。這可能與以下因素有關(guān)：(1)在行電泳區(qū)帶的洗脫及檢驗(yàn)時(shí)易出現(xiàn)洗脫不徹底或比色卡誤差，進(jìn)而造成對(duì)輕型β-地貧的漏診；(2)重癥地貧會(huì)發(fā)生溶血反應(yīng)，使網(wǎng)織紅細(xì)胞或紅細(xì)胞碎片增加或采集血液不新鮮都易產(chǎn)生假陰性[10]，影響RBC脆性結(jié)果，使地貧攜帶者未能被檢查出來。然而從本研究結(jié)果可知，IDA也常伴MCV下降，因而單純MCV診斷仍有漏診的可能。為進(jìn)一步提高對(duì)地貧的檢驗(yàn)結(jié)果，本研究遵循循證檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)原理將已有的檢驗(yàn)相結(jié)合，即聯(lián)合檢驗(yàn)。結(jié)果表明，MCV聯(lián)合Hb電泳、MCV聯(lián)合Hb電泳聯(lián)合RBC脆性并聯(lián)試驗(yàn)對(duì)地貧的靈敏度均達(dá)100.0%，且Hb電泳聯(lián)合RBC脆性、MCV聯(lián)合Hb電泳聯(lián)合RBC脆性串聯(lián)試驗(yàn)對(duì)地貧的特異性也均達(dá)100.0%，與李萍[11]和Khalil等[12]研究結(jié)果相符，說明并聯(lián)試驗(yàn)有利于提高地貧的靈敏度，而串聯(lián)試驗(yàn)則提高了地貧的特異性。提示實(shí)施MCV聯(lián)合Hb電泳聯(lián)合RBC脆性并聯(lián)試驗(yàn)對(duì)診斷地貧的應(yīng)用價(jià)值較高。

綜上所述，應(yīng)用血液學(xué)指標(biāo)、Hb電泳、RBC脆性聯(lián)合檢驗(yàn)?zāi)苡行岣邔?duì)地貧與IDA的診斷準(zhǔn)確性，且時(shí)效性強(qiáng)，操作簡單，值得臨床廣泛應(yīng)用。

[1]章小東，鄭穗瑾，湯惠華，等.紅細(xì)胞參數(shù)及血清鐵蛋白檢測(cè)在珠蛋白生成障礙性貧血產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10 (11)：1386-1387.

[2]岑嶺，姜玉，陳濤，等.熒光原位雜交檢測(cè)100例多發(fā)性骨髓瘤染色體異常的臨床分析[J].中華內(nèi)科雜志，2013，52(9)：757-758.

[3] Loussaief C,Toumi A,Ben Brahim H，et al.Macrophage activation syndrome：rare complication of murine typhus[J].Pathol Biol (Paris)，2014，62 (1)：55-56.

[4]汪文娟，王浩，陳哲，等.Hepcidin在老年缺鐵性貧血和慢性病貧血中的診斷價(jià)值[J].中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2015，23(1)：155-158.

[5]董樹旭，趙軾軒，王穎，等.利用透射電鏡技術(shù)分析血細(xì)胞自噬在血液病中的分布特點(diǎn)[J].中華血液學(xué)雜志，2015，36(2)：144-147.

[6] Box MJ,Sullivan EL,Ortwine KN，et al.Outcomes of rapid identification for gram-positive bacteremia in combination with antibiotic stewardship at a community-based hospital system[J].Pharmacotherapy，2015，35(3)：269-276.

[7]王鵬，王靜，張洪為，等.高效液相色譜法在β地中海貧血診斷中的應(yīng)用[J].國際輸血及血液學(xué)雜志，2014，37(4)：307-310.

[8] Singer ST,Kuypers F,Fineman J，et al.Elevated tricuspid regurgitant jet velocity in subgroups of thalassemia patients:insight into pathophysiology and the effect of splenectomy[J].Ann Hematol，2014，93(7)：1139-1148.

[9]張莉，黃偉忠，唐景云，等.聯(lián)合應(yīng)用MLPA和測(cè)序技術(shù)檢測(cè)地中海貧血基因缺陷[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2014，21(7)：779-781.

[10]胡斌，孫鳴，黃朝陽，等.閩南地區(qū)α和β地中海貧血的遺傳異質(zhì)性研究[J].醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志，2014，11 (1)：22-25.

[11]李萍.血常規(guī)在缺鐵性貧血和地中海貧血中的診斷價(jià)值[J].醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床，2014，25(4)：76-77.

[12] Khalil MS,Marouf S,Element D，et al.A study of δ-globin gene mutations in the UK population：identification of three novel variants and development of a novel DNA test for Hb A′2[J].Hemoglobin，2014，38(30)：201-206.

The value of the combined test for the diagnosis of thalassemia and iron deficiency anemia

YuXiran，ZhuoDexiang，TangJunfeng，ZhengShui′e

(DeparmentofClinicalLaboratory,theFirstHospitalofSanmingCityAffiliatedtoFujianMedicalUniversity,Sanming,Fujian365000,China)

Objective To investigate the value of the combined test in the diagnosis of thalassemia and iron deficiency anemia(IDA).Methods From August 2013 to February 2015,36 patients with thalassemia,34 patients with IDA,and 30 healthy people who had undergone physical examination were enrolled in the study.The blood samples of those people were tested,and items of the combined test included content of red blood cell volume(MCA),red blood cell volume distribution width(RDW),hemoglobin(Hb) electrophoresis and red blood cell(RBC).Results The patients with IDA or thalassemia had reduced MCA and RBC fragile,patients with IDA had increased RDW,and patients with thalassemia had increased HbA2,compared with the control group the differences were all statistically significant(P<0.05).The sensitivity of RDW to IDA was 70.6%,and to thalassemia was 77.8%,the difference was not statistically significant (P>0.05).The sensitivities of MCV,Hb electrophoresis,RBC fragility to thalassemia were 97.2%,88.9%,77.8% respectively,and the specificity were 80.0%,90.0%,83.3% respectively.The sensitivities of MCA test combined with Hb electrophoresis,hemoglobin electrophoresis combined with RBC brittleness test and parallel combined test of MCA，Hb electrophoresis and RBC brittleness to thalassemia were 100.0%,97.2%,100.0% respectively,which were significantly higher than those of single tests;the specificities were 96.7%,100.0% and 100.0% respectively,which were significantly higher than those of single tests;the differences were statistically significant(P<0.05).Conclusion The application of hematological parameters,Hb and RBC in the diagnosis of anemia and IDA could significantly improve the diagnostic accuracy,and it is worthy of popularization and application.

laboratory techniques and procedures； thalassemia/diagnosis； anemia,iron-deficiency/diagnosis

余喜然，男，副主任技師，主要從事臨床血液學(xué)檢驗(yàn)的研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.02.011

A

1673-4130(2016)02-0169-03

2015-07-10)