田衛(wèi)花，馬文媛，李莎莎

(1.甘肅省中醫(yī)藥研究院，甘肅蘭州 730050；2.甘肅省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，甘肅蘭州 730050)

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·論 著·

抗CCP抗體、AKA及APF聯(lián)合檢測(cè)在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷中的應(yīng)用價(jià)值

田衛(wèi)花1，2，馬文媛2，李莎莎2

(1.甘肅省中醫(yī)藥研究院，甘肅蘭州 730050；2.甘肅省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，甘肅蘭州 730050)

目的 觀察抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體、抗角蛋白抗體(AKA)及核周因子(APF)對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的診斷價(jià)值。方法 選擇RA患者110例(RA組)、其他自身免疫性疾病患者50例(非RA組)和健康體檢者110例(對(duì)照組)為研究對(duì)象，采用間接免疫熒光法檢測(cè)AKA、APF，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)抗CCP抗體。結(jié)果 RA組患者3項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)陽(yáng)性率均明顯高于非RA組和對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；3項(xiàng)目串聯(lián)試驗(yàn)的靈敏度和特異性分別為44.55%、99.38%，3項(xiàng)目并聯(lián)試驗(yàn)的靈敏度和特異性分別為93.64%、85.63%。結(jié)論 在RA的診斷中抗CCP抗體具有較高的特異性和靈敏度，3項(xiàng)目串聯(lián)試驗(yàn)可以提高特異性，降低誤診率，3項(xiàng)目并聯(lián)試驗(yàn)可以提高靈敏度，降低漏診率，3項(xiàng)目聯(lián)合檢測(cè)指導(dǎo)臨床對(duì)RA的診斷具有重要價(jià)值。

關(guān)節(jié)炎,類風(fēng)濕/診斷; 自身抗體/診斷應(yīng)用； 角蛋白質(zhì)類/免疫學(xué); 抗體/血液； 核周因子

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種以關(guān)節(jié)損傷為主的慢性全身性自身免疫性疾病。RA致殘率高，如不能早期診斷、合理治療，3年內(nèi)關(guān)節(jié)破壞可達(dá)90%，進(jìn)而造成永久性的關(guān)節(jié)畸形[1-2]。2010年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)聯(lián)合歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟(EULAR)發(fā)表了新的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎分類標(biāo)準(zhǔn)，引入了抗瓜氨酸蛋白抗體(ACPA)作為新的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一[3]。經(jīng)典的類風(fēng)濕因子(RF)特異性較差，且符合該標(biāo)準(zhǔn)的患者常已出現(xiàn)骨關(guān)節(jié)破壞，不利于早期診治[4-5]。而對(duì)ACR 新的診斷標(biāo)準(zhǔn)在國(guó)內(nèi)使用也需要進(jìn)一步的驗(yàn)證[5]。本研究選擇了抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體、抗角蛋白抗體(AKA)及核周因子(APF)3個(gè)與RA相關(guān)的檢測(cè)指標(biāo)進(jìn)行對(duì)比分析，以明確其在臨床診斷中的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 RA組 選擇2012年10月至2014年3月甘肅省中醫(yī)院風(fēng)濕骨病科住院的RA患者110例，其中男40例，女70例；年齡25～70歲，均符合ACR 1987年修訂的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)，無嚴(yán)重腎損傷、甲狀腺、甲狀旁腺等疾病。

1.1.2 非RA組 選擇2012年10月至2014年3月甘肅省中醫(yī)院住院及門診就診的其他自身免疫性疾病患者50例，其中男12例，女38例；年齡25～75歲；關(guān)節(jié)炎患者33例，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)2例，原發(fā)性干燥綜合征(Pss)15例。均有關(guān)節(jié)疼痛的臨床表現(xiàn)，診斷均符合相應(yīng)的國(guó)際診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.1.3 對(duì)照組 選擇同期在甘肅省中醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的健康者110例，均排除各種自身免疫性疾病。

1.2 儀器與試劑 抗CCP抗體、AKA與APF試劑盒均為北京和杰創(chuàng)新公司產(chǎn)品，均提供質(zhì)控血清。儀器為芬蘭雷勃MK2洗板機(jī)、雷杜RT-6100 酶標(biāo)分析儀和奧林帕斯BX43熒光顯微鏡等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 采集研究對(duì)象早晨空腹靜脈血3～5 mL，離心后的血清標(biāo)本儲(chǔ)存于-70 ℃冰箱待測(cè)。

1.3.1 ELISA方法檢測(cè)抗CCP抗體 按試劑盒操作說明書將患者血清進(jìn)行1∶50稀釋，依次加入A～E標(biāo)準(zhǔn)品、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、稀釋后患者血清，均做2個(gè)復(fù)孔?？笴CP抗體大于25 U/mL定義為陽(yáng)性。

1.3.2 間接免疫熒光法(IIF)檢測(cè)AKA和APF 按試劑盒操作說明書將血清進(jìn)行1∶10稀釋并按試劑盒操作說明書加至反應(yīng)孔上，設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照。封片后熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，采用四格表χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。靈敏度=檢測(cè)陽(yáng)性例數(shù)/真陽(yáng)性例數(shù)；特異性=檢測(cè)陰性例數(shù)/真陰性例數(shù)；陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=檢測(cè)真陽(yáng)性例數(shù)/所有檢測(cè)陽(yáng)性例數(shù)；陰性預(yù)測(cè)值=檢測(cè)真陰性例數(shù)/所有檢測(cè)陰性例數(shù)[2，6-8]。RA組患者全部符合ACR 1987年修訂的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)，臨床確診為RA，該組檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果屬于檢測(cè)真陽(yáng)性；非RA組、對(duì)照組已被臨床排除RA的可能，該兩組檢測(cè)的陰性結(jié)果屬于檢測(cè)真陰性。

2 結(jié) 果

2.1 AKA及APF檢測(cè)結(jié)果 AKA檢測(cè)陽(yáng)性表現(xiàn)為大鼠食道角質(zhì)層有多條連續(xù)的板層狀或非連續(xù)的點(diǎn)片狀熒光，見圖1。APF檢測(cè)陽(yáng)性表現(xiàn)為頰黏膜細(xì)胞核周圍出現(xiàn)圓形、均質(zhì)的綠色熒光顆粒，且在同一反應(yīng)孔中觀察到5個(gè)以上可判斷為陽(yáng)性，見圖2。

圖1 AKA檢測(cè)陽(yáng)性

圖2 APF檢測(cè)陽(yáng)性

2.2 各組研究對(duì)象抗CCP抗體、AKA及APF陽(yáng)性率比較 RA組患者抗CCP抗體、AKA、APF陽(yáng)性率明顯高于非RA組及對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.3 3種檢測(cè)項(xiàng)目單項(xiàng)檢測(cè)的效能比較 3種檢測(cè)項(xiàng)目在RA診斷中的篩選能力見表2。AKA的靈敏度明顯低于抗CCP抗體和APF，特異性高于二者。

表1 各組研究對(duì)象抗CCP抗體、AKA及APF陽(yáng)性率比較[n(%)]

*：P<0.05，與RA組比較。

表2 抗CCP、AKA及APF單項(xiàng)檢測(cè)的靈敏度、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值(%)

2.4 RA組患者抗CCP抗體與AKA、APF檢測(cè)結(jié)果比較 RA組患者抗CCP抗體與AKA抗體檢測(cè)結(jié)果比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.562，P<0.05)，與APF抗體檢測(cè)結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.447，P>0.05)。

表3 RA組患者AKA、APF與抗CCP抗體檢測(cè)結(jié)果比較

2.5 3種特異性抗體串、并聯(lián)試驗(yàn)的靈敏度和特異性比較 同時(shí)檢測(cè)抗CCP抗體、AKA和APF，3項(xiàng)目串聯(lián)試驗(yàn)的特異性進(jìn)一步提高，但靈敏度下降；而3項(xiàng)目并聯(lián)試驗(yàn)的靈敏度提高，但特異性下降。見表5。

表5 3種特異性抗體串、并聯(lián)試驗(yàn)的靈敏度和特異性比較(n=270)

3 討 論

RA是一種以周圍關(guān)節(jié)受損為主的慢性自身免疫性疾病，是最常見的炎性關(guān)節(jié)疾病之一。RA的特征表現(xiàn)為對(duì)稱性、慢性、進(jìn)行性多關(guān)節(jié)炎并伴有全身多系統(tǒng)受累[9]。長(zhǎng)期以來，RF是診斷RA的唯一血清學(xué)指標(biāo)，但其存在靈敏度高但特異性差的缺點(diǎn)。例如在某些干燥綜合征、結(jié)締組織病等其他免疫性疾病患者的血清中也會(huì)出現(xiàn)RF的升高，這就難以避免出現(xiàn)假陽(yáng)性情況；況且很多早期RA患者體內(nèi)并不出現(xiàn)RF的升高，因此也會(huì)出現(xiàn)漏診[8]。

近年來相繼發(fā)現(xiàn)了一些在診斷RA中較為特異的抗體如抗CCP抗體、AKA、APF、抗Sa抗體等，后來發(fā)現(xiàn)AKA、抗CCP抗體和APF這3種自身抗體在化學(xué)結(jié)構(gòu)上具有一定的關(guān)聯(lián)性。APF、AKA和抗CCP抗體的靶抗原是上皮細(xì)胞分化終末階段的細(xì)胞骨架成分絲聚蛋白(Filaggrin)，而瓜氨酸是Filaggrin 的組成成分，稱為瓜氨酸相關(guān)的自身免疫系統(tǒng)[10-11]。大部分文獻(xiàn)報(bào)道診斷RA，抗CCP 抗體比RF 具有更高的特異性，較好的靈敏度，具有早期診斷價(jià)值[11-12]。2010年ACR和EULAR重新修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)中將抗CCP 抗體納入血清學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)[3，11]。本研究結(jié)果顯示，抗CCP抗體診斷RA的靈敏度和特異性分別為83．64%和88.00%，與國(guó)內(nèi)相關(guān)報(bào)道較為一致。

AKA是由Young等[13]于1979年采用IIF，以Wistar大鼠食管中1/3段上皮為底物，首先在RA患者的血清中檢測(cè)到的，發(fā)現(xiàn)其對(duì)RA具有高度特異性。本研究發(fā)現(xiàn)AKA靈敏度相對(duì)較低，但單項(xiàng)檢測(cè)其特異性最高，達(dá)94.00%。APF抗體靶抗原存在于人頰黏膜角質(zhì)透明顆粒中，1995年有學(xué)者從人頰黏膜細(xì)胞中提取該抗原，APF與角蛋白絲聚集原或Filaggrin前體的單克隆抗體可顯現(xiàn)相同的條帶[14]，故作為RA診斷指標(biāo)之一。

本研究發(fā)現(xiàn)，RA組患者抗CCP抗體、AKA、APF陽(yáng)性率明顯高于非RA組及對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)?？笴CP抗體單項(xiàng)檢測(cè)在RA組陽(yáng)性率為83.64%，在非RA組僅為12.00%，說明抗CCP抗體這個(gè)檢測(cè)指標(biāo)可以用來鑒別RA和其他相關(guān)自身免疫性疾病[8]，AKA的靈敏度為48.18%，明顯低于抗CCP抗體(83.64%)和APF(57.27%)；AKA的特異性為94.00%，高于APF(90.00%)和抗CCP抗體(88.00%)。3項(xiàng)目串聯(lián)試驗(yàn)可提高檢測(cè)特異性，高達(dá)99.38%，從而降低誤診率；3項(xiàng)指標(biāo)并聯(lián)試驗(yàn)可提高檢測(cè)靈敏度，達(dá)93.64%，降低了漏診率。

綜上所述，抗CCP抗體對(duì)RA的診斷具有較高的靈敏度、特異性和臨床應(yīng)用價(jià)值，AKA與APF是RA診斷較理想的補(bǔ)充項(xiàng)目?？笴CP抗體、AKA、APF聯(lián)合檢測(cè)能夠提供更加豐富的診斷信息，可顯著提高RA診斷的準(zhǔn)確性，降低漏診率和誤診率。

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Combined detection of anti CCP antibodies,AKA and APF in the diagnosis of rheumatoid arthritis*

TianWeihua1，2，MaWenyuan2，LiShasha2

(1.TraditionalChineseMedicineInstituteofGansuProvince，Lanzhou，Gansu730050，China; 2.GansuProvincialTCMHospital，Lanzhou,Gansu730050，China)

Objective To investigate the diagnostic value for rheumatoid arthritis(RA) by using combined detection of anti-cyclic citrullinated peptide antibody(anti CCP)，anti keratin antibody(AKA) and the antiperinuclear factor (APF) in serum．Methods A total of 110 RA patients(RA group)，50 patients with other autoimmune diseases(non RA group) and 110 healthy subjects (control group) were enrolled in the study．The concentrations of AKA,APF were detected by using indirect immunofluorescence assay and anti CCP by using ELISA．Results The positive rates of anti-CCP，AKA，APF in RA group were higher than those in non RA group and control group(P<0．05).In the series detection of the three indicators，the sensibility and specificity were 44.55% and 99.38% respectively;in the parallel detection of the three indicators the sensibility and specificity were 93.64% and 85.63% respectively.Conclusion Anti CCP detection exhibits relatively higher sensitivity and specificity in the diagnosis of RA.Series detection of the 3 indicators can improve the specificity,reduce the rate of misdiagnosis;parallel detection of the 3 indicators can improve the sensitivity,reduce the rate of misdiagnosis.The Combined detection of anti CCP，AKA and APF has better diagnostic efficiency than single detection.

arthritis,rheumatoid/diagnosis； autoantibodies/diagnostic use； keratins/immunology； antibodies/blood； antiperinuclear factor

甘肅省衛(wèi)生行業(yè)科研計(jì)劃管理資助項(xiàng)目(GWGL2013-1)。 作者簡(jiǎn)介：田衛(wèi)花，女，主管檢驗(yàn)師，主要從事自身抗體檢測(cè)和腫瘤免疫的研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.02.003

A

1673-4130(2016)02-0150-03

2015-08-22)