胡美琴 高琨 唐昃 龔軍

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·論著·

β-arrestin2基因轉(zhuǎn)染對(duì)人肺腺癌細(xì)胞A549的增殖影響

胡美琴 高琨 唐昃 龔軍

目的 觀察外源性β-arrestin2基因?qū)θ朔蜗侔┘?xì)胞A549增殖的影響。方法 利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將真核表達(dá)重組體pcDNA3.1-β-arrestin2質(zhì)粒和空載體pcDNA3.1質(zhì)粒分別導(dǎo)入A549細(xì)胞,經(jīng)G418篩選后獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆,RT-PCR和Western blotting檢測(cè)β-arrestin2基因表達(dá)的影響。采用MTT(四甲基偶氮唑鹽)法分析轉(zhuǎn)染細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果 經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染和篩選,建立了穩(wěn)定表達(dá)β-arrestin2基因的A549細(xì)胞系。與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染空白載體組比較,轉(zhuǎn)染β-arrestin2基因的細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯減慢(P< 0. 05)。結(jié)論 β-arrestin2基因可能通過抑制P65活性而抑制人肺腺癌細(xì)胞A549的生長(zhǎng)。

β-arrestin2；肺腺癌；A549細(xì)胞；細(xì)胞增殖

目前肺癌在男性腫瘤死因中已居首位，其 5 年生存率僅為8%～11%，30%的肺癌患者診斷時(shí)已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，50%～60%肺癌患者在治療過程中發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[1]。肺癌是一種常見的嚴(yán)重威脅人類生命健康的惡性腫瘤。近年來肺癌的發(fā)病率和病死率逐步增加,已成為全世界發(fā)病率和病死率最高的癌癥之一。多種基因參與肺癌細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲及遷徙等生物學(xué)行為的調(diào)控，研究相關(guān)基因與肺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的關(guān)系、闡明肺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制、尋求有效的治療靶點(diǎn)，對(duì)改善肺癌患者的預(yù)后具有重要意義。NF-κB是一類參與免疫炎性反應(yīng)、細(xì)胞增殖分化、細(xì)胞周期以及凋亡的多功能轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子[2]。許多實(shí)驗(yàn)資料表明,在人類腫瘤中，NF-κB家族基因存在擴(kuò)增、移位等現(xiàn)象,而引起NF-κB促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄的活性增強(qiáng),結(jié)果導(dǎo)致某些控制細(xì)胞轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵靶基因轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)[3]。有研究表明NF-κB亞單位P65在肺癌中陽性率高達(dá)71.4%,明顯高于癌旁支氣管上皮和肺泡上皮細(xì)胞[4]。β-arrestin是一種重要的支架蛋白,由β腎上腺素受體激酶(βARK)純化，在G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)的信號(hào)傳導(dǎo)中起重要作用[5, 6]。GPCR活化后，MDM2和β抑制蛋白的相互結(jié)合，以形成具有GPCR的磷酸化的三聚體和介導(dǎo)受體的內(nèi)吞作用的過程[7-9]。研究表明，β-arrestin是一種腫瘤因子，為內(nèi)源核因子-κB(NF-κB)的負(fù)調(diào)控蛋白[10, 11]。NF-κB是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，廣泛存在于細(xì)胞質(zhì)中。 NF-κB可以呈遞亞基P65，BMP2，MSX2，和RUNX2的表達(dá)。β-arrestin2可以通過激活NF-κB來調(diào)節(jié)炎癥和血管生成[12-14]。目前β-arrestin2基因在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及對(duì)P65表達(dá)的影響的報(bào)道筆者所見少見。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將β-arrestin2基因?qū)階549細(xì)胞,分析外源性β-arrestin2基因?qū)θ朔蜗侔┘?xì)胞A549生長(zhǎng)的影響,探討β-arrestin2基因在肺癌中的作用及其機(jī)制。本研究以攜帶β-arrestin2基因的重組慢病毒顆粒和未攜帶目的基因的空載體慢病毒顆粒分別感染 A549細(xì)胞,用G418篩選法建立穩(wěn)定細(xì)胞株，以RT-PCR和 Western blotting 方法分別檢測(cè)感染后目的基因mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)以確認(rèn)獲得穩(wěn)定高表達(dá)β-arrestin2基因的A549細(xì)胞。并運(yùn)用 MTT法觀察β-arrestin2基因?qū)549 細(xì)胞體外增殖的影響。以期闡明該基因?qū)τ诜蜗侔┥飳W(xué)行為影響的具體分子機(jī)制，為本病的生物治療尋找新的靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞系:人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549購自中科院上海細(xì)胞生物研究所，用含有10%胎牛血清(杭州四季青公司)的RPMI1640培養(yǎng)基在37℃,5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.1.2 試劑:質(zhì)粒抽提試劑盒購自Qiagen公司,RT-PCR試劑盒、限制性核酸內(nèi)切酶BamHⅠ,XbaⅠ購自Ferments公司;脂質(zhì)體購自Invitrogen公司;鼠抗人β-arrestin2抗體購自Santa Cruz Biotechnology;G418,Trizol,DEPC購自上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 質(zhì)粒的小量提取及酶切鑒定:將pcDNA3.1-β-arrestin2質(zhì)粒轉(zhuǎn)化TG1感受態(tài),常規(guī)鋪板,挑取菌落擴(kuò)增,采用質(zhì)粒抽提試劑盒提取質(zhì)粒,應(yīng)用限制性內(nèi)切酶BamHⅠ,XbaⅠ雙酶切鑒定質(zhì)粒。

1.2.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染:以每孔5×105個(gè)細(xì)胞的密度將A549細(xì)胞接種于6孔板中,培養(yǎng)至80%融合時(shí),應(yīng)用脂質(zhì)體按說明書進(jìn)行轉(zhuǎn)染,實(shí)驗(yàn)分為3組:未轉(zhuǎn)染組、轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒(pcDNA3.1)組和轉(zhuǎn)染陽性質(zhì)粒(pcDNA3.1-β-arrestin2)組。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染48 h后,換含800 μg/L G418的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)4 d,再換含300 μg/L G418的選擇培養(yǎng)基維持篩選至出現(xiàn)細(xì)胞克隆,挑取細(xì)胞克隆擴(kuò)大培養(yǎng)備用。

1.2.3 定量RT-PCR檢測(cè)β-arrestin2 mRNA表達(dá)的變化:RNA提取按照trizol試劑盒操作指南進(jìn)行，反轉(zhuǎn)錄依照試劑盒操作說明書進(jìn)行，總反應(yīng)體系為25 μl，反轉(zhuǎn)錄條件為42℃反應(yīng)60 min，β-arrestin2引物：forward primer:5'-CCCTGGATGGGAAACTCAAG-3';reverse primer: 5'-AGG ATTCCCAGCACCTCCTT-3'；β-actin: forward primer:5'-CCACGAAA CTACCTTCAACT-3';reverse primer: 5'-TCATACTCCTGCTGCTTGCTGATCC-3'。cDNA產(chǎn)物直接取2 μl加入PCR反應(yīng)體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃變性30 s,55℃退火30 s，72℃延伸3 min，30個(gè)循環(huán)后，72℃維持10 min，反應(yīng)結(jié)束后，記錄下他們的ct值。

1.2.4 Western blot 檢測(cè)β-arrestin2蛋白表達(dá)的變化:分別收集轉(zhuǎn)染后穩(wěn)定表達(dá)的各組細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌，加入蛋白裂解液，提取總蛋白，用Bradford 法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。分別取50 μg蛋白，變性后經(jīng)5%SDS-PAGE濃縮膠和10%SDS-PAGE分離膠電泳，電泳完后取出凝膠轉(zhuǎn)膜，將凝膠置于轉(zhuǎn)移緩沖液中平衡20 min，半干后轉(zhuǎn)印蛋白到PVDF膜上，脫脂奶粉室溫震蕩封閉90 min，孵一抗，4℃過夜。加辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記二抗，37℃室溫孵育1 h。取等量ECL顯示試劑A、B液混勻后孵育PVDF膜，曝光顯影。以β-actin為內(nèi)參。

1.2.5 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖:將穩(wěn)定表達(dá)系對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549細(xì)胞制備成單細(xì)胞懸液，以3×103細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，加入培養(yǎng)液200 μl，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)，分別培養(yǎng)24 h、48 h、72 h、96 h后，每孔加入5 mg/ml MTT溶液 20 μl，37℃、5%CO2孵箱中繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄去孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入150 μl DMSO，振蕩10 min，酶標(biāo)儀下490 nm波長(zhǎng)處讀取吸光度值(A)。以時(shí)間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)取平均值繪制生長(zhǎng)曲線。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示,多組比較采用單因素方差分析,計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 質(zhì)粒酶切鑒定 pcDNA3.1-β-arrestin2質(zhì)粒經(jīng)XbaⅠ和BamHⅠ雙酶切,得到了大小與pcDNA3.1質(zhì)粒相符的5.4 kb大片段和與目的基因片段相符的1.1 kb 片段。

2.2 定量RT-PCR檢測(cè)β-arrestin2 mRNA表達(dá) 通過RT-PCR檢測(cè)β-arrestin2 mRNA在β-arrestin2轉(zhuǎn)染組、陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組細(xì)胞中的表達(dá)，每一個(gè)樣本設(shè)3個(gè)復(fù)孔，取平均值為檢測(cè)結(jié)果，以β-actin為內(nèi)參。根據(jù)公式Δct=[ct(目的基因)]-[ct(內(nèi)參基因)]和ΔΔct=[Δct(研究組)]-[Δct(對(duì)照組)]，計(jì)算出2-ΔΔct，以反映出目的基因在研究組中表達(dá)水平(相對(duì)于對(duì)照組)。β-arrestin2 mRNA在β-arrestin2轉(zhuǎn)染組中的表達(dá)高于陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組細(xì)胞中的表達(dá)(P<0.05)，而陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組細(xì)胞中的β-arrestin2 mRNA的表達(dá)無明顯差異(P>0.05)。見圖1。

圖1 β-arrestin2 mRNA在β-arrestin2轉(zhuǎn)染組、陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組中的表達(dá)水平

2.3 Western blot 檢測(cè)β-arrestin2蛋白表達(dá) Western blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明β-arrestin2組的蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明轉(zhuǎn)染β-arrestin2 A549細(xì)胞β-arrestin2蛋白表達(dá)明顯增加。見圖2。

圖2 Western blot 檢測(cè)β-arrestin2轉(zhuǎn)染對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞β-arrestin2基因蛋白水平表達(dá)的影響

2.4 β-arrestin2基因轉(zhuǎn)染對(duì)A549細(xì)胞生長(zhǎng)速率的影響 利用MTT法對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)速率進(jìn)行比較，空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、β-arrestin2轉(zhuǎn)染組細(xì)胞以相同的細(xì)胞密度接種進(jìn)行培養(yǎng)，每天各測(cè)一次，共測(cè)4 d。空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、β-arrestin2轉(zhuǎn)染組細(xì)胞在生長(zhǎng)12、24、48、72 h后的MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：β-arrestin2轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的生長(zhǎng)速度明顯慢于陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組中A549細(xì)胞的增殖差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1，圖3。

表1 β-arrestin2的表達(dá)被干擾后對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響 ±s

表1 β-arrestin2的表達(dá)被干擾后對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響 ±s

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

組別24h(OD)48h(OD)72h(OD)96h(OD)空白對(duì)照組0.176±0.0020.326±0.0060.560±0.0150.838±0.018陰性對(duì)照組0.178±0.0060.408±0.0160.572±0.0110.790±0.031β-arrestin2干擾組0.156±0.0040.179±0.009*0.219±0.013*0.345±0.039*

圖3 β-arrestin2基因轉(zhuǎn)染對(duì)A549細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用

3 討論

隨著NF-κB抑制細(xì)胞凋亡作用機(jī)制的研究深入，并應(yīng)用于炎癥、腫瘤等疾病的治療，人們發(fā)現(xiàn) NF-κB在不同的刺激因素及特定的細(xì)胞類型中還有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用[15]。Ping等[3]通過酵母菌二次雜交實(shí)驗(yàn)證明 NF-κB可與IκBα直接結(jié)合，并且通過刺激Hela、HEK293和COS-7細(xì)胞系的β2腎上腺素受體(β2AR)而明顯增加β-arrestin2的數(shù)量[16]。Luan等[17]研究發(fā)現(xiàn)β-arrestin2與IκB相互作用可阻止IκB的磷酸化和降解，從而減少紫外線照射引發(fā)的 NF-κB信號(hào)活化。證明，β-arrestin2是NF-κB的負(fù)調(diào)控蛋白，抑制NF-κB的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的途徑。β-arrestin作為多功能蛋白，能夠引起GPCR的脫敏和內(nèi)吞來調(diào)節(jié)GPCRs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，結(jié)合MAPK JNK3，招募凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1、MEK1和MKK4等上游激酶，增強(qiáng)GPCRs介導(dǎo)的JNK3的激活，與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)[18]。

目前對(duì)于肺癌的治療，臨床上采用手術(shù)、放療和化療等方法創(chuàng)傷大，不良反應(yīng)重，尋求一種新的微創(chuàng)、不良反應(yīng)小、可以根治宮頸癌的方法勢(shì)在必行。本實(shí)驗(yàn)將β-arrestin2基因擴(kuò)增轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，在基因水平及蛋白表達(dá)水平驗(yàn)證對(duì)β-arrestin2的靶向作用。

筆者將β-arrestin2基因轉(zhuǎn)染至人肺腺癌細(xì)胞A549,發(fā)現(xiàn)與未轉(zhuǎn)染組和空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比,轉(zhuǎn)染組A549細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯下降。這些結(jié)果提示β-arrestin2基因能抑制惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),可能是肺癌的候選抑制基因。結(jié)果提示β-arrestin2基因可能對(duì)p65基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯過程無顯著影響,但可阻止P65由胞漿轉(zhuǎn)入胞核,從而抑制NF-κB的活性。本實(shí)驗(yàn)研究顯示外源性β-arrestin2基因表達(dá)能夠抑制人肺腺癌細(xì)胞A549增殖。

目前國(guó)內(nèi)外少見關(guān)于β-arrestin2基因?qū)Ψ伟┘?xì)胞生物學(xué)行為影響的相關(guān)報(bào)道。本研究在以前研究的基礎(chǔ)上首次研究了β-arrestin2基因?qū)θ朔蜗侔┘?xì)胞 A549體外增殖的影響。為了解β-arrestin2 基因?qū)Ψ伟┘?xì)胞生物學(xué)特性影響及其機(jī)制，有必要構(gòu)建β-arrestin2基因高表達(dá)的肺癌穩(wěn)定細(xì)胞株。RT-PCR 實(shí)驗(yàn)顯示各組β-arrestin2 mRNA 表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，Western blotting實(shí)驗(yàn)顯示β-arrestin2轉(zhuǎn)染組蛋白表達(dá)量明顯高于 A549 細(xì)胞對(duì)照組。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)β-arrestin2 mRNA 及蛋白已經(jīng)在 A549細(xì)胞中穩(wěn)定地高表達(dá)。成功地構(gòu)建β-arrestin2基因過表達(dá)的肺腺癌穩(wěn)定細(xì)胞株，是進(jìn)一步研究該基因?qū)ο鄳?yīng)癌細(xì)胞作用及機(jī)制的基礎(chǔ)。本研究首次通過MTT實(shí)驗(yàn)研究β-arrestin2對(duì)于肺腺癌細(xì)胞A549體外增殖的影響。結(jié)果顯示，β-arrestin2轉(zhuǎn)染組在不同時(shí)間(1、2、3、4、5 d)MTT法所測(cè)吸光度(OD)值與 A549 細(xì)胞對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明β-arrestin2基因轉(zhuǎn)染能抑制人肺腺癌細(xì)胞的體外增殖。今后一方面需要觀察β-arrestin2異常表達(dá)對(duì)其他類型肺癌體外增殖、凋亡及侵襲等生物學(xué)行為的效應(yīng)，另一方面有必要通過后續(xù)的體外實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步觀察該基因?qū)D(zhuǎn)移的其他環(huán)節(jié)的影響效應(yīng)，并進(jìn)行作用機(jī)制的深入研究，以期闡明該基因?qū)τ诜蜗侔┥飳W(xué)行為影響的具體分子機(jī)制，為本病的生物治療尋找新的靶點(diǎn)。

1 Funderburgh JL,Funderburhg ML,Hevelone ND,et al.Sequence, molecular properties, and chromosomal mapping of mouse lumican. Invest Ophthalmol Vis Sci,1995,36:2296-2303.

2 Lin CP,Huang PH,Lai CF,et al.Simvastatin attenuates oxidative stress, NF-kappaB activation, and artery calcification in LDLR-/- Mice fed with high fat diet via down-regulation of tumor necrosis factor-alpha and TNF receptor 1. PLoS One,2015,10:e0143686.

3 Ping FM,Liu GJ,Liu ZJ,et al.Expression of RKIP, E-cadherin and NF-kB p65 in esophageal squamous cell carcinoma and their correlations.Int J Clin Exp Pathol,2015,8:10164-10170.

4 李翔,曾慶富,蔣海鷹.核轉(zhuǎn)錄因子κB和表皮生長(zhǎng)因子受體在細(xì)支氣管肺泡癌中表達(dá)的研究.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2002,12:44-45.

5 Li Y,Li H,Liu X,et al.Regulation of amygdalar PKA by beta-arrestin-2/phosphodiesterase-4 complex is critical for fear conditioning. Proc Natl Acad Sci USA,2009,106:21918-21923.

6 Armando S,Quoyer J,Lukashova V,et al.The chemokine CXC4 and CC2 receptors form homo- and heterooligomers that can engage their signaling G-protein effectors and betaarrestin. FASEB J,2014,28:4509-4523.

7 Kim IM,Tiuey DG,Chen J,et al.Beta-blockers alprenolol and carvedilol stimulate beta-arrestin-mediated EGFR transactivation. Proc Natl Acad Sci USA,2008,105:14555-14560.

8 Zhang LS,Wang YJ,Ju YY,et al.Role for engagement of beta-arrestin2 by the transactivated EGFR in agonist-specific regulation of delta receptor activation of ERK1/2. Br J Pharmacol,2015,172:4847-4863.

9 Santos-Zas I,Gurriaran-Rodriguez U,Cid-Diaz T,et al.beta-Arrestin scaffolds and signaling elements essential for the obestatin/GPR39 system that determine the myogenic program in human myoblast cells. Cell Mol Life Sci,2016,73:617-635.

10 Witherow DS,Garrison TR,Miller WE,et al.beta-Arrestin inhibits NF-kappaB activity by means of its interaction with the NF-kappaB inhibitor IkappaBalpha. Proc Natl Acad Sci U S A,2004,101:8603-8607.

11 Sun J,Lin X.Beta-arrestin 2 is required for lysophosphatidic acid-induced NF-kappaB activation. Proc Natl Acad Sci U S A,2008,105:17085-17090.

12 Bianchi EN,Ferrari SL.Beta-arrestin2 regulates parathyroid hormone effects on a p38 MAPK and NFkappaB gene expression network in osteoblasts. Bone,2009,45:716-725.

13 Gupta K,Subramanian H,Klos A,et al.Phosphorylation of C3a receptor at multiple sites mediates desensitization, beta-arrestin-2 recruitment and inhibition of NF-kappaB activity in mast cells. PLoS One,2012,7:e46369.

14 Lee SU,In HJ,Kwon MS,et al.beta-Arrestin 2 mediates G protein-coupled receptor 43 signals to nuclear factor-kappaB. Biol Pharm Bull,2013,36:1754-1759.

15 Angileri FF,Aguennouz M,Conti A,et al.Nuclear factor-kappaB activation and differential expression of survivin and Bcl-2 in human grade 2-4 astrocytomas.Cancer,2008,112:2258-2266.

16 Gao H,Sun Y,Wu Y,et al.Identification of beta-arrestin2 as a G protein-coupled receptor-stimulated regulator of NF-kappaB pathways. Mol Cell,2004,14:303-317.

17 Luan B,Zhang Z,Wu Y,et al.Beta-arrestin2 functions as a phosphorylation-regulated suppressor of UV-induced NF-kappaB activation. EMBO J,2005,24:4237-4246.

18 Ferguson SS.Evolving concepts in G protein-coupled receptor endocytosis: the role in receptor desensitization and signaling. Pharmacol Rev,2001,53:1-24.

Effects ofβ-arrestin2 gene transfection on the proliferation of human pulmonary adenocarcinoma cells A549 in vitro

HUMeiqin*,GAOKun,TANGZe*,etal.DepartmentofOncology,CentralHospitalofHuangshiCity,Hubei,Huangshi435000,China

Objective To observe the effects of exogenous β-arrestin2 gene transfection on the proliferation of human pulmonary adenocarcinoma cells A549 in vitro.Methods The pcDNA3. 1-β-arrestin2 plasmid and and empty carrier-pcDNA3. 1 plasmid were introduced into A549 cells by liposomes transfection technique,then the cell clones that could express stably β-arrestin2 gene were established by G418 screening. The expression levels of β-arrestin2 were detected by RT-PCR and Western Blotting,respectively.The proliferation status of positive clones was observed by methythiazoletertraolium (MTT) assay.Results The A549 cell line that could express stably β-arrestin2 gene was established by liposome transfection and screening.As compared with that in non-transfection group and blank carrier-transfection group,the growth velocity in the cells that were transfected by β-arrestin2 gene was significantly decreased (P<0.05). Conclusion The β-arrestin2 gene can inhibit the growth of of human pulmonary adenocarcinoma cells-A549 in vitro by inhibiting the activity of P65 protein.

β-arrestin2; pulmonary adenocarcinoma; A549 cells; cell proliferation

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.22.001

項(xiàng)目來源：湖北省黃石市醫(yī)藥衛(wèi)生科研立項(xiàng)項(xiàng)目(編號(hào)：201402)

435000 鄂東醫(yī)療集團(tuán)黃石市中心醫(yī)院(湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院)腹盆腫瘤內(nèi)科(胡美琴、唐昃、龔軍)，骨科(高琨)

龔軍，435000 鄂東醫(yī)療集團(tuán)黃石市中心醫(yī)院(湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院)腹盆腫瘤內(nèi)科；

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R 734.2

A

1002-7386(2016)22-3365-04

2016-03-19)