王艷華 付華珍 傅愛榮

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胃癌組織中MAT1及MCM2表達的臨床病理意義

王艷華 付華珍 傅愛榮

目的 探討胃癌組織中相關(guān)基因1(MAT1)以及微小染色體維持蛋白2(MCM2)的表達及其臨床意義。方法 選取95例胃癌患者，采用免疫組化法檢測所有患者癌組織以及癌旁組織MAT1、MCM2的表達情況，分析胃癌組織表達中MAT1、MCM2與患者各臨床指標的相關(guān)性。結(jié)果 ①胃癌組織表達MAT1、MCM2的陽性率顯著高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。②MAT1表達與年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)、腫瘤分化程度無顯著相關(guān)性(P>0.05)，與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性(P<0.05)。③MCM2表達與年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)、遠處轉(zhuǎn)移無顯著相關(guān)性(P>0.05)，與腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性(P<0.05)。結(jié)論 胃癌組織中MAT1、MCM2表達與其臨床指標密切相關(guān)，從而進一步影響患者的預(yù)后。

胃癌；轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1；微小染色體維持蛋白2

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:1770～1772)

胃癌是目前臨床上最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其發(fā)生是1個多階段、進行性的過程，但是該過程中的具體機制尚未完全明確，因此胃癌發(fā)生、發(fā)展的分子機制一直以來就是胃癌腫瘤學(xué)研究的重要方向[1-2]。本研究即旨在探討胃癌組織表達轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(MAT1)以及微小染色體維持蛋白2(MCM2)的臨床病理意義，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2012年9月至2015年11月江西省腫瘤醫(yī)院收治的95例胃癌患者作為研究對象，所有患者均經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診，且既往未接受針對胃癌的任何治療，其中男性63例，女性32例；年齡27～65歲，平均(59.3±14.2)歲；體質(zhì)指數(shù)22.4～29.7 kg/m2，平均(24.6±4.3)kg/m2；分化程度：低分化21例、中分化29例、高分化45例；浸潤深度：T1～T2 30例、T3～T4 65例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：陰性56例、陽性39例；遠處轉(zhuǎn)移：陰性77例、陽性18例。

1.2 MAT1與MCM2檢測方法

采用免疫組化法檢測胃癌組織以及癌旁組織中MAT1、MCM2的表達情況，癌旁組織為距離手術(shù)切緣5 cm以上的正常胃黏膜。方法如下：①將石蠟切片60 ℃烘烤30 min，二甲苯(Ⅰ)脫蠟15 min，二甲苯(Ⅱ)脫蠟15 min。無水乙醇(Ⅱ)5 min，無水乙醇(Ⅰ)5 min，95%乙醇5 min，85%乙醇5 min，75%乙醇5 min，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次，5 min/次。②在電熱手提式壓力蒸汽滅菌器中用檸檬酸抗原修復(fù)液進行抗原修復(fù)，當(dāng)有蒸汽冒出2 min后，取出冷卻。PBS洗滌3次，5 min/次。③去除多余液體，置于濕盒，滴加3%過氧化氫去離子水，孵育10 min。PBS洗滌3次，5 min/次。④去除多余液體，置于濕盒，滴加羊血清工作液，孵育15 min。⑤滴加50 μl一抗稀釋液，稀釋劑為PBS，稀釋比例為1∶100，4 ℃冰箱過夜?；謴?fù)室溫1 h，PBS洗滌3次，5 min/次。⑥置于濕盒，滴加生物素化二抗工作液，孵育15 min。PBS洗滌3次，5 min/次。⑦置于濕盒，滴加辣根過氧化物酶(HRP)標記鏈霉素液，孵育15 min。PBS洗滌3次，5 min/次。⑧置于濕盒，滴加二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑50 μl，當(dāng)細胞質(zhì)呈棕黃色時將切片浸入自來水中終止顯色，流水沖洗5 min。⑨蘇木精復(fù)染1 min，流水沖洗5 min。1%鹽酸乙醇分化1～2 s，流水洗滌20 min。⑩75%乙醇脫水3 min，95%乙醇脫水3 min。無水乙醇(Ⅰ)脫水3 min，無水乙醇(Ⅱ)脫水3 min，二甲苯(Ⅰ)透明10 min，二甲苯(Ⅱ)透明10 min，中性樹膠封片。 鏡下觀察結(jié)果。

1.3 結(jié)果判斷

由2名病理醫(yī)生進行結(jié)果判斷，在400倍顯微鏡下觀察10個視野，每個視野計數(shù)100個腫瘤細胞。染色陽性細胞數(shù)評分：陽性腫瘤細胞百分率>50%為3分，25%～50%為2分，5%～25%為1分，<5%為0分。染色強度評分：深棕色為3分，黃棕色為2分，淡黃色為1分，未著色為0分。計算染色陽性細胞數(shù)評分與染色強度評分的乘積，2～9分為陽性，0～1分為陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織以及癌旁組織中MAT1與MCM2表達陽性率的比較

胃癌組織MAT1、MCM2表達陽性率顯著高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 胃癌組織以及癌旁組織中MAT1與MCM2表達陽性率的比較(例，%)

2.2 MAT1表達與胃癌臨床病理特征的相關(guān)性分析

MAT1表達與年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)、腫瘤分化程度無顯著相關(guān)性(P>0.05)，與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性(P<0.05)，見表2。

表2 MAT1表達與胃癌臨床指標的相關(guān)性分析/例

2.3 胃癌組織MCM2表達與其臨床指標的相關(guān)性分析

MCM2表達與年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)、遠處轉(zhuǎn)移無顯著相關(guān)性(P>0.05)，與腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性(P<0.05)，見表3。

表3 胃癌組織MCM2表達與其臨床指標的相關(guān)性分析/例

3 討論

胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一。與其他大多數(shù)惡性腫瘤一樣，胃癌發(fā)病較隱匿，很多胃癌患者在確診時已經(jīng)是為進展期，此時已經(jīng)喪失了最佳的手術(shù)治療機會[3]，因此胃癌常給患者身心健康帶來巨大威脅。值得注意的是，胃癌的發(fā)生、發(fā)展涉及多個因素的參與，其中的分子機制成為當(dāng)前胃癌腫瘤學(xué)研究的重要課題。

MTA1是Pencil等在1993年應(yīng)用相差雜交技術(shù)在鼠乳腺癌細胞株中分離出來的1個新的乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因，Toh等在1994年測定該基因的核苷酸序列以及蛋白產(chǎn)物的氨基酸序列，并將其命名為MTA1。目前有關(guān)MTA1與惡性腫瘤的研究較多。侯二文等[4]報道，膀胱癌組織MTA1表達水平顯著高于癌旁組織，且MTA1表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴管浸潤等指標密切相關(guān)，從而進一步影響患者的預(yù)后。秦曉寧等[5]報道，胃癌組織表達MTA1蛋白與腫瘤的浸潤深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但是與腫瘤分化程度未見明顯相關(guān)性。原甜甜等[6]報道，沉默MTA1表達可抑制胃癌細胞株SGC7901的遷移、侵襲能力，但是并不影響胃癌細胞株SGC7901增殖，MTA1在胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移過程中可能發(fā)揮重要作用。

MCM2是微小染色體維持蛋白家族中的一員。在正常組織以及某些反應(yīng)性組織中，MCM2僅僅表達于正常增殖的細胞區(qū)域，但是在不典型增生組織、惡性腫瘤組織中，MCM2則表達于大多數(shù)細胞并且可以延伸到上皮全層[7]，因此MCM2比其他增殖標記蛋白能夠更好地區(qū)分正常組織與不典型增生組織。目前MCM2檢測已經(jīng)應(yīng)用于多種類型惡性腫瘤。栗東海等[8]報道，乳腺癌組織MCM2表達陽性率顯著高于乳腺纖維腺瘤，且MCM2表達與腫瘤直徑、組織學(xué)分級、臨床分期、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。楊春等[9]報道，胃癌組織表達MCM2與患者年齡、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性，但是與腫瘤大小、腫瘤位置、遠處轉(zhuǎn)移、UICC分期無顯著相關(guān)性。

在本研究中，初步結(jié)果分析顯示胃癌組織MAT1、MCM2表達陽性率顯著高于癌旁組織，這與目前其他臨床報道均一致。進一步結(jié)果分析MAT1、MCM2表達與患者臨床指標的相關(guān)性，結(jié)果顯示MAT1表達與年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)、腫瘤分化程度無顯著相關(guān)性，與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性，MCM2表達年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)、遠處轉(zhuǎn)移無顯著相關(guān)性，與腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性。上述結(jié)果與既往研究有一定區(qū)別，如MCM2表達與遠處轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，潘崢等[10]認為胃癌組織表達MCM2與患者是否發(fā)生肝轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。分析兩者差異的原因，可能是試劑盒質(zhì)量、樣本量等因素影響所致，因此其具體關(guān)系有待進一步研究?？傊赴┙M織表達MAT1、MCM2與患者某些臨床指標有著密切的關(guān)系，檢測MAT1、MCM2表達對預(yù)測胃癌患者預(yù)后有一定的臨床應(yīng)用價值。

[1] 葛艷麗，張俊杰，王志榮，等.胃癌組織中血管內(nèi)皮生長因子C的表達及其臨床意義〔J〕.實用癌癥雜志，2015，30(2)：159-161.

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(編輯：吳小紅)

Clinical Pathological Significance of Expression of MAT1 and MCM2 in Gastric Carcinoma Tissues

WANGYanhua,FUHuazhen,FUAirong.

JiangxiCancerHospital,Nanchang,330029

Objective To investigate the clinical pathological significance of expression of metastasis-associated gene1(MAT1) and minichromosome maintenance protein2(MCM2) in gastric carcinoma tissues.Methods 95 cases of patients with gastric carcinoma were selected as the objects of study,and expression of MAT1 and MCM2 in gastric carcinoma tissues and carcinoma adjacent tissues of all patients were detected by imunohistochemistry method,then the correlation between expression of MAT1 and MCM2 in gastric carcinoma tissues and clinical indexes in patients with gastric carcinoma were analyzed.Results ①The positive rates of expression of MAT1 and MCM2 in gastric carcinoma tissues were obviously higher than those in carcinoma adjacent tissues,respectively(P<0.05).②There were no significant correlations between expression of MAT1 and age,sex,body mass index and tumor differentiation(P>0.05),while expression of MAT1 was significantly correlated with depth of invasion,lymph node metastasis and distant metastasis(P<0.05).③There were no significant correlations between expression of MCM2 and age,sex，body mass index and distant metastasis(P>0.05),while expression of the MCM2 was significantly correlated with tumor differentiation,depth of invasion and lymph node metastasis (P<0.05).Results The expression of MAT1 and MCM2 in gastric carcinoma are closely related to clinical indexes,which can influence the prognosis of patients with gastric cancer.

Gastric carcinoma；Metastasis-associated gene1(MAT1) ；Minichromosome maintenance protein2(MCM2)

330029 江西省腫瘤醫(yī)院(王艷華，傅愛榮)；336400 上高縣中醫(yī)院 (付華珍)

傅愛榮

10.3969/j.issn.1001-5930.2016.11.009

R735.2

A

1001-5930(2016)11-1770-03

2016-04-21

2016-06-12)