樂 勇 歐陽晗月 張永法 郭榮平 石 明

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·基礎研究·

肝細胞肝癌內(nèi)NAP1L1的表達及其臨床意義

樂 勇 歐陽晗月 張永法 郭榮平 石 明

目的 探討肝癌組織中核小體組裝蛋白1-like-1(NAP1L1)的表達情況。方法 應用免疫組化法檢測173例肝癌及癌旁肝組織中NAP1L1的表達情況。結(jié)果 NAP1L1蛋白在癌旁肝組織中不表達,而在肝癌組織中高表達且表達陽性率為28.32%(49/173)，且NAP1L1表達上調(diào)與肝硬化、AFP水平顯著相關(guān)。結(jié)論 NAP1L1在肝癌組織中高表達提示著患者的不良預后,表明NAP1L1在肝癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起著一定的作用。

肝癌；NAP1L1；預后

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:1741～1743)

NAP1L1是核小體組裝蛋白1-like(NAP1L)家族中的一員，最早是從人胸腺組織中發(fā)現(xiàn)[1]。目前，核小體組裝蛋白家族的成員發(fā)現(xiàn)有5種(NAP1L1～5)，其中NAP1L1和NAP1L4廣泛表達于人體的各種組織器官中[2]，且在增值的細胞中其mRNA和蛋白明顯升高；表明它們有著增殖的作用。NAP1L2、NAP1L3、NAP1L5特異性表達于神經(jīng)元內(nèi)，其主要參與神經(jīng)元的分化、增值和凋亡[3-4]。核小體組裝蛋白家族成員都有著介導核小體組裝的功能，其中NAP1L1卻有著更高的核小體去組裝能力[5]。和成年人的肝臟相比，胎肝內(nèi)的NAP1L1表達較高[6]；同樣肝母細胞瘤內(nèi)NAP1L1的蛋白水平高于正常成年人的肝臟[7]。約50%的結(jié)腸癌內(nèi)呈現(xiàn)高表達的NAP1L1[8]；同時也有報道稱和正常小腸粘膜相比，小腸腺類癌內(nèi)NAP1L1表達升高[9]。此外，還有其他研究表明NAP1L1在腫瘤組織中明顯高表達，并與腫瘤增殖，侵襲相關(guān)[10]。然而，目前尚無相關(guān)研究闡述NAP1L1與肝癌的關(guān)系。因此，本文目的在于探討NAP1L1蛋白在肝癌癌巢及癌旁非腫瘤組織中的表達情況；并結(jié)合患者相關(guān)資料分析其肝癌內(nèi)的預后意義。

1 材料與方法

1.1 研究對象

入組肝癌患者:收集2005年至2008年間于我院肝膽科行手術(shù)切除治療的原發(fā)性肝癌病例173例，入組標準：①首次就診診斷為原發(fā)性肝癌并未接受任何治療；②無腹腔積液及肝性腦?。虎鄹喂δ芊旨墳镃hild-Pugh A級。臨床分期采用第七版TNM分期系統(tǒng)，病理分級則采用Edmondson-Steiner分級法。隨訪資料均來自于我院隨訪科。入組患者的相關(guān)資料見表1。

1.2 主要試劑和儀器

免疫組化用NAP1L1兔抗人多克隆抗體一抗購自美國sigma公司；免疫組化用鼠/兔通用二抗及DAB顯色系統(tǒng)等均購自丹麥Dako公司。

1.3 免疫組織化學染色的主要步驟及結(jié)果判定

免疫組化主要步驟：二甲苯脫蠟和梯度酒精水化后，依次經(jīng)3%過氧化氫10 min、檸檬酸緩沖液微波修復高火，5 min；中低火25 min。滴加NAP1L1一抗4 ℃過夜，室溫平衡至少30 min。滴加二抗后于37 ℃孵育30 min。PBS漂洗后經(jīng)DAB顯色約2 min。雙蒸水漂洗4次后蘇木精復染1 min，自然晾干后中性樹脂封片。

結(jié)果判定：按照細胞著色的強度分為四個等級：無細胞著色為0分；淡黃色為1分；黃色為2分；棕色為3分。同時評出陽性細胞分布百分數(shù)。然后運用積分綜合計量法；即每種陽性強度對應的值×該強度細胞的百分比，然后求和。以中位數(shù)為分界點，將肝癌患者分為NAP1L1陰性表達組和陽性表達組。

1.4 統(tǒng)計學處理

應用全SPSS 19.0軟件進行分析，χ2檢驗分析 NAP1L1表達水平與肝癌患者臨床病理資料的相關(guān)性； NAP1L1陰性和陽性肝癌患者的生存曲線采用Kaplan-Meier方法繪制，Log-Rank檢驗用于比較生存曲線間的差異。P<0.05認為有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 NAP1L1在肝癌組織和癌旁非腫瘤組織中的表達情況

在癌旁非腫瘤組織中NAP1L1完全不表達，無論是在實質(zhì)細胞還是間質(zhì)細胞中均無陽性信號；而在肝癌組織中呈現(xiàn)不同強度的表達；且其信號主要定位于腫瘤細胞胞質(zhì)內(nèi)。并且根據(jù)前述結(jié)果判定方法將患者分為NAP1L1陽性表達組和陰性表達組。

2.2 NAP1L1表達與肝癌臨床病理資料的關(guān)系

結(jié)果表明，NAP1L1表達與甲胎蛋白水平、肝硬化程度存在一定的相關(guān)性，而與性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、癌栓、TNM分期等指標無明顯相關(guān)性，見表1。

2.3 NAP1L1表達水平與肝癌患者預后的關(guān)系

生存分析顯示，NAP1L1表達陽性的肝癌患者其中位生存時間為 45.39 個月，而陰性患者僅為 58.12 個月，差異具有統(tǒng)計學意義，見圖1。

3 討論

肝細胞肝癌是1種常見的高侵襲性惡性腫瘤，有著很高的復發(fā)率和死亡率。近年來出現(xiàn)了許多治療方式，例如：射頻治療，微波消融，生物治療等；腫瘤切除仍然是目前主要的根治性治療方式，但預后多不良，其5年復發(fā)率仍高達70%左右[11-12]。因此，深入研究肝細胞肝癌的發(fā)生和進展的分子機制，有助于肝癌的個體化診治。

表1 NAP1L1表達與肝癌臨床病理資料的相關(guān)性/例

圖1 NAP1L1表達與肝癌患者生存曲線圖

NAP1L1是核小體組裝蛋白家族中的一員，其主要功能是參與核小體的組裝。核小體是由H2A，H2B，H3，H4這4個亞基構(gòu)成的八聚體；其中NAP1L1就是作為分子伴侶參與H2A-H2B的組裝[13]。因此認為NAP1L1是主要功能是參與細胞的增殖；還有些研究表明，NAP1L1可以通過NOTCH1信號通路介導細胞的分化過程[14]。在肝癌組織中我們的發(fā)現(xiàn)NAP1L1蛋白表達的陽性率約為28.32%(49/173)，且其陽性信號集中在肝癌細胞質(zhì)中。而在癌旁的非腫瘤組織中，NAP1L1蛋白則完全不表達；提示肝癌組織中NAP1L1的表達呈現(xiàn)不同程度的上調(diào)。進一步與患者的臨床相關(guān)資料分析得出NAP1L1的高表達與患者AFP水平和肝硬化程度呈現(xiàn)一定的相關(guān)性；而與患者的其他資料例如：腫瘤的分期、腫瘤大小、數(shù)目、是否有癌栓等則無明顯相關(guān)性。通過生存分析表明NAP1L1表達陽性的肝癌患者其中位生存期明顯低于NAP1L1表達陰性患者(45.39個月 VS 58.12個月；P=0.022)，提示在肝癌患者組織中NAP1L1的高表達提示著患者的不良預后。因此，進一步的研究NAP1L1在肝癌發(fā)生發(fā)展中的機制，有助于為今后肝癌的個體化治療提供理論基礎。

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(編輯：吳小紅)

Expression of NAP1L1 in Primary Hepatocellular Carcinoma and Its Clinical Significance

LEYong,OUYANGHanyue,ZHANGYongfa,etal.

SunYat-senUniversityCancerCenter,Guangzhou,510060

Objective To explore the expression of NAP1L1 in resectable human hepatocellular carcinoma (HCC).Methods Expression of NAP1L1 in 173 cases of HCC tissues and adjacent-tumor tissues were detected by immunohistochemistry (IHC) method.Results The expression of NAP1L1 in adjacent-tumor tissues was totally negative,while the expression of NAP1L1 of HCC tissues was highly-expressed and the positive rate was 28.32%..The expression level of NAP1L1 was significantly correlated with the level of AFP and cirrhosis.Conclusion Overexpression of NAP1L1 in HCC indicates the patients' poor prognosis.The expression of NAP1L1 may play a certain role in the occurrence and development of liver cancer.

Hepatocellular carcinoma(HCC);NAP1L1;Prognosis

國家自然科學基金項目(編號：81272639)；中山大學5010計劃項目(編號：2007043)

510060 中山大學腫瘤防治中心

石 明

10.3969/j.issn.1001-5930.2016.11.001

R735.7

A

1001-5930(2016)11-1741-03

2015-12-07

2016-08-20)