蒲文靜 高蓉 馬文卓 尹亮亮

（甘肅醫(yī)學(xué)院，甘肅 平?jīng)?744000）

肺淤血水腫實驗教學(xué)方法改進

蒲文靜 高蓉 馬文卓 尹亮亮

（甘肅醫(yī)學(xué)院，甘肅 平?jīng)?744000）

淤血、水腫、心力衰竭均為病理學(xué)中的重要內(nèi)容。淤血、水腫、心力衰竭之間存在著內(nèi)部聯(lián)系，我們使用大白鼠復(fù)制肺淤血水腫模型，通過左心衰竭引起肺水腫的實驗來驗證水腫的發(fā)生機制，同時也可以觀察到左心衰的臨床表現(xiàn)和肺淤血的病理變化。實踐證明，整個實驗過程中雖然增加了實驗操作，但節(jié)約了實驗成本，而且提高了教學(xué)效果，推廣性強。

肺淤血水腫；實驗教學(xué)方法；改進

淤血、水腫、心力衰竭均為病理學(xué)中的重要內(nèi)容。水腫是過多的體液在組織間隙或體腔中積聚。目前，驗證水腫發(fā)生機制的教學(xué)實驗主要有兩種，第一種是通過蟾蜍下肢灌流的方法復(fù)制水腫模型，第二種是用兔子復(fù)制左心衰引起肺水腫的模型。在日常的教學(xué)中，水腫和淤血的實驗都是單獨進行的，實驗動物的價格較高，造成實驗成本過高。淤血、水腫、心力衰竭之間存在著內(nèi)部聯(lián)系，我們使用大白鼠復(fù)制肺淤血水腫模型，通過左心衰竭引起肺水腫的實驗來驗證水腫的發(fā)生機制，同時也可以觀察到左心衰的臨床表現(xiàn)和肺淤血的病理變化。實踐證明，整個實驗過程中雖然增加了實驗操作，但節(jié)約了實驗成本，而且提高了教學(xué)效果，推廣性強。

一、實驗?zāi)康?/h2>

復(fù)制大白鼠左心衰肺水腫模型；驗證水腫的發(fā)生機制；觀察大白鼠左心衰后的臨床表現(xiàn)；學(xué)習(xí)肺系數(shù)的測定方法，肺組織的取材、固定及切片制作方法；驗證肺淤血水腫的肉眼及鏡下改變。

二、實驗方法

（一）傳統(tǒng)方法

1.實驗動物

家兔1只。

2.實驗器材及藥品

氣管插管，靜脈導(dǎo)管及靜脈輸液裝置，注射器，兔急性手術(shù)器械，燒杯，紗布，線，膠布，兔手術(shù)臺，嬰兒秤，生理鹽水，烏拉坦（20%），腎上腺素（0.1%），肝素（3g/L）。

3.實驗步驟

取家兔1只稱重，用20%烏拉坦5ml/kg耳緣靜脈注射麻醉，固定于兔臺上；進行頸部手術(shù)，分離氣管和一側(cè)頸外靜脈，作氣管插管；肝素化后，作靜脈插管并連于輸液裝置；給藥前觀察正常呼吸，輸入生理鹽水（輸入總量按100ml/kg，輸速150-200滴/分），待滴注接近完畢時立即向輸液瓶中加入腎上腺素（0.5ml/kg）繼續(xù)輸液，密切觀察呼吸改變和氣管插管內(nèi)是否有分紅色泡沫液體流出，死亡動物記錄死亡時間，所有動物均打開胸腔，用線在氣管分叉處結(jié)扎以防止肺水腫液滲出，在結(jié)扎處以上切斷氣管，把肺取出，用濾紙吸去肺表面的水份后稱重，然后肉眼觀察肺大體改變，并切開肺，觀察切面的改變。

（二）改進方法

1.實驗動物

SD大白鼠2只。

2.實驗器材及藥品

注射器及針頭，大白鼠急性手術(shù)器械，燒杯，濾紙，手術(shù)線，膠布，兔手術(shù)臺，嬰兒秤，電子天平，切片機，生理鹽水，烏拉坦（20%），腎上腺素（0.1%），肝素（3g/L），福爾馬林液，鹽酸，酒精，二甲苯，蘇木素-伊紅染液，石蠟，玻片。

3.實驗步驟

（1）取大白鼠2只稱體重（g）（體重220g左右，體重相差小于體重的5%）。做好標(biāo)記（甲鼠、乙鼠），觀察動物一般表現(xiàn)、呼吸頻率、深度及皮膚黏膜的顏色。每只大白鼠先腹腔注射20%烏拉坦5ml/kg麻醉大鼠，仰臥固定于手術(shù)臺上，觀察大白鼠呼吸狀況。

（2）過5分鐘后，甲鼠腹腔注射腎上腺素3mg/kg，同時尾靜脈推注生理鹽水；乙鼠腹腔注射等量生理鹽水。

（3）觀察2只大白鼠出現(xiàn)的癥狀（呼吸窘迫、紫紺等）并記錄，注意鼻孔是否有液體溢出。待甲鼠死亡或癥狀明顯時用頸椎脫臼法處死之，再處死乙鼠。分別解剖尸體：剪開胸壁，小心

取出肺臟，再用濾紙擦去肺表面血跡后準(zhǔn)確稱肺重。

（4）肉眼觀察肺部的改變，并切開肺，觀察切面的改變，注意有無泡沫狀液體流出。

（5）雙肺觀察結(jié)束后，將肺組織固定于10%的福爾馬林液中，兩天后制作石蠟切片、HE染色、觀察切片。

三、實驗結(jié)果

（一）一般情況

乙鼠呼吸平穩(wěn)，有節(jié)奏，心率整齊，唇舌黏膜正常。甲鼠腹腔注射后多數(shù)1min后出現(xiàn)呼吸頻率加快，3min可見呼吸困難，喘促，全身抽搐，口唇青紫，鼻腔有粉紅色泡沫狀液體流出。

（二）肉眼觀察

乙鼠雙肺正常、淺粉紅色，表面光滑，未見暗紅色的淤血區(qū)，切面未見液體溢出。甲鼠雙肺體積明顯增大，肺系數(shù)明顯增大，呈現(xiàn)暗紅色，有點狀或片狀出血（見圖1），氣管斷端流出泡沫樣液體，肺切面有粉紅色泡沫樣液體溢出（見圖2）。甲鼠肺系數(shù)明顯高于乙鼠。

圖1

圖2

（三）光鏡檢查

乙鼠肺泡結(jié)構(gòu)完整無明顯淤血，肺泡腔內(nèi)及間質(zhì)無出血及水腫（見圖3）。甲鼠大部分肺泡壁毛細(xì)血管擴張充血，多數(shù)肺泡內(nèi)可見紅染液體（見圖4），少部分肺泡內(nèi)可見出血，呈灶性分布，在肺組織中可以找到擴張淤血的小靜脈（見圖5）。

圖3

圖4

圖5

四、討論

在腹腔注射腎上腺素同時尾靜脈靜脈注射生理鹽水組復(fù)制大鼠肺水腫模型癥狀典型，3min后可見呼吸困難，喘促，全身抽搐，口唇青紫，鼻腔有粉紅色泡沫狀液體流出。肺體積增大，重量增加，呈暗紅色；鏡下見肺泡壁增厚，小靜脈明顯擴張充滿血液，肺泡腔內(nèi)可見蛋白水腫液，符合肺淤血水腫的病變特點。

腎上腺素引起肺水腫的機理目前比較清楚，腎上腺素對α和β受體都有激動作用，使皮膚、黏膜及內(nèi)臟的血管收縮，但對肺血管收縮作用甚弱，肺血管有時由于血壓升高還可被動地擴張[1]，可使皮膚、內(nèi)臟的血液回流增加肺血容量，導(dǎo)致肺毛細(xì)血管內(nèi)壓增高，促進肺水腫的發(fā)生。皮膚、黏膜及內(nèi)臟的血管收縮，動脈血壓升高增加左心的后負(fù)荷[2]，導(dǎo)致左心衰竭引起肺淤血，增加肺毛細(xì)血管內(nèi)流體靜壓，從而引起水腫。同時給予大白鼠腹尾靜脈注射生理鹽水，增加其體循環(huán)靜脈回流，也增加左心室前負(fù)荷導(dǎo)致肺淤血水腫，另外注入的生理鹽水稀釋了血液使血漿膠體滲透壓下降導(dǎo)致水腫發(fā)生。

本實驗通過增加左心前后負(fù)荷的方式復(fù)制了左心衰肺淤血水腫的模型，讓學(xué)生進一步理解了左心衰的發(fā)生機理和水腫的發(fā)生機制，同時加深了學(xué)生對肺淤血病理變化的理解程度，加深了學(xué)生對左心衰的臨床表現(xiàn)的認(rèn)識，取得了良好的教學(xué)效果。在實驗中把心力衰竭、淤血、水腫三個內(nèi)容有機的結(jié)合了起來，驗證了三方面的理論內(nèi)容，更使學(xué)生深刻理解了病理學(xué)、病理生理學(xué)和臨床是緊密聯(lián)系的。通過正常與異常肺組織的觀察，能夠從感性和理性兩個角度理解肺水腫，加深了對醫(yī)學(xué)知識的理解。

本實驗用兩只大白鼠代替了以往實驗中用的家兔，實驗成本基本相當(dāng)，但是增加了正常與病變肺組織的對照，更有利于學(xué)生觀察肺淤血水腫的病理變化，實驗中增加了肺組織的取材、固定、切片、染色，加深了學(xué)生對病理檢驗技術(shù)的掌握。

[1]楊世杰.腎上腺索受體激動藥.見：楊寶蜂，主編.藥理學(xué)（第6版）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：89-99.

[2]徐叔云.藥理學(xué)實驗方法學(xué)（第2版）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1991：1234-1256.

[3]李桂源.病理生理學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2010.

[4]陳杰.病理學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2010.

Congestion,edema and heart failure are important parts of pathology and there is a closed internal connection between them.Using rats replicate the model of pulmonary congestion edema,we can verify the pathogenetic mechanism of edema through an experiment of pulmonary edema caused by left heart failure.Meanwhile,we can also observe the clinical manifestations of the left heart failure and the pathological changes of the pulmonary blood clot.It has proved that this experiment can save cost and improve the teaching effective,although there are many experiment operation.It deserves to be widely used.

pulmonary congestion edema;experimental teaching method;improvement

G642

A

2096-000X（2016）23-0120-02

蒲文靜（1982-），女，本科，講師，主要從事病理教學(xué)和研究工作；高蓉（1981-），女，碩士，講師，主要從事病理教學(xué)和腫瘤病理研究工作；馬文卓（1978-），男，碩士，講師，主要從事病理教學(xué)和研究工作。