劉 閆，王康康（黃淮學(xué)院化學(xué)化工系，河南 駐馬店 463000）

氯霉素殘留檢測(cè)方法研究進(jìn)展

劉 閆，王康康
（黃淮學(xué)院化學(xué)化工系，河南 駐馬店 463000）

氯霉素殘留對(duì)人體的危害極大，因此在國(guó)際上有關(guān)氯霉素的檢測(cè)方法備受關(guān)注和研究。起初是利用微生物進(jìn)行定性檢測(cè)，目前應(yīng)用較多的是先進(jìn)檢測(cè)技術(shù)的聯(lián)用，例如：UPLC-MS/MS，LC-MS等技術(shù)使氯霉素的檢測(cè)限、精密度和回收率等方面都得到了極大提高。

氯霉素；檢測(cè)方法；研究進(jìn)展

目前有關(guān)氯霉素的檢測(cè)方法有十幾種，在這些現(xiàn)有檢測(cè)方法中，公認(rèn)的方法是色譜法和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，但此技術(shù)仍需不斷地改進(jìn)。在國(guó)內(nèi)外對(duì)氯霉素殘留量的檢測(cè)方法仍在不斷的研究中。

1　色譜法

1.1薄層色譜法

莫金娜［1］等利用薄層色譜方法（TLC）檢測(cè)化妝品中的氯霉素殘留量。該方法是先用乙醇溶劑提取，以硅膠制板為載體、在展開(kāi)劑為三氯甲烷-甲烷（85∶15）的薄層條件下鑒別化妝品中的氯霉素殘留量。從此實(shí)驗(yàn)得知，所檢驗(yàn)的樣品最小的檢限度為1.0mg/g。

1.2高效液相色譜-熒光檢測(cè)法

潘瑩宇等［2］高效液相色譜-熒光檢測(cè)方法（HPLC-FL）檢測(cè)牛奶中氯霉素殘留量。氯霉素易與鋅粉發(fā)生還原反應(yīng)，將氯霉素與鋅粉反應(yīng)后的溶液在緩沖溶液（醋酸鈉-醋酸）條件下可發(fā)生熒光衍生化反應(yīng)，之后加入熒光胺丙酮溶液。將待測(cè)品逐漸稀釋后在一定的色譜條件下進(jìn)行檢測(cè)。上述實(shí)驗(yàn)得出，氯霉素檢測(cè)檢出限為0.2μg/L。運(yùn)用此方法檢測(cè)牛奶中氯霉素的殘留量準(zhǔn)確度高，靈敏度好，操作較簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。

1.3超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

彭麟等［3］利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）方法檢測(cè)黃鱔肌肉中氯霉素殘留量。此實(shí)驗(yàn)首先在黃鱔肌肉樣品中加入無(wú)水硫酸鈉和氯化鈉溶液，用堿性乙酸乙酯提取兩次。合并兩次提取液，在45℃水浴中氮吹至干。之后用5%甲醇溶液復(fù)溶，再加正己烷除脂，將下層水相過(guò)0.22μm濾膜，進(jìn)樣檢測(cè)。上述實(shí)驗(yàn)得出氯霉素檢測(cè)限為0.1μg/kg。本實(shí)驗(yàn)使用的UPLC-MS/MS方法具有精密度高，重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)可以在保證回收率的基礎(chǔ)上有效地提高了檢測(cè)效率。

1.4氣相色譜-負(fù)化學(xué)離子源質(zhì)譜檢測(cè)法

潘玉香等［4］利用氣相色譜-負(fù)化學(xué)離子源質(zhì)譜（GC-MS/NCI）檢測(cè)方法對(duì)各種動(dòng)物源性食品中氯霉素殘留量進(jìn)行檢測(cè)。此實(shí)驗(yàn)方法以氘代氯霉素（D5-CAP）為內(nèi)標(biāo)物，用乙酸乙酯對(duì)各類樣品中的氯霉素進(jìn)行提取，用正己烷和40g/LNaCl溶液液液分配除脂肪，經(jīng)硅烷化衍生后由GC-MS/NCI在選擇離子監(jiān)測(cè)模式下進(jìn)行測(cè)定。此實(shí)驗(yàn)得出動(dòng)物源性食品中氯霉素殘留量的檢出限為0.5μg/kg。GC-MS/NCI檢測(cè)方法具有分析快速，操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。

2　免疫分析法

免疫分析法在食品分析中正得到越來(lái)越廣泛的運(yùn)用，免疫分析法具有特異性、靈敏度高、快速和低成本等優(yōu)點(diǎn)，能夠用于樣品的定性篩選，也能夠?qū)悠愤M(jìn)行定量測(cè)定以確定樣品中氯霉素的含量，常用的有下面三種。

2.1免疫膠體金法

用于快速檢測(cè)樣品中氯霉素殘留含量的膠體金免疫層析試紙條，采用免疫競(jìng)爭(zhēng)法，將抗氯霉素單克隆抗體-膠體金復(fù)合物包被在膠體金結(jié)合墊上，并將人工合成的氯霉素抗原包被在硝酸纖維素薄膜表面作為檢測(cè)線，其與待測(cè)樣品中氯霉素競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合膠體金標(biāo)記的氯霉素單克隆抗體。李余動(dòng)等［5］利用免疫膠體金法檢測(cè)蝦肉等組織試樣時(shí)，靈敏度最低值可達(dá)到1ng/ml，試紙條具有較高的靈敏度及特異性，操作便捷，穩(wěn)定可靠，可作為氯霉素殘留現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控的有效篩檢手段。

2.2酶聯(lián)免疫法

酶聯(lián)免疫法（ELISA）又稱酶標(biāo)法，是測(cè)定水產(chǎn)品中氯霉素含量的一種好方法。張勝幫等［6］利用酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法測(cè)定水產(chǎn)品中殘留氯霉素殘留量。實(shí)驗(yàn)得出∶樣品在0.025～2.00ng/mL測(cè)定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，檢出限為0.009ng/mL。ELISA法具有檢測(cè)快速快、靈敏度高、穩(wěn)定性好、適用范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。

2.3化學(xué)發(fā)光酶免疫法

張啟模等［7］以人工合成的氯霉素-牛血清白蛋白免疫Balb/c小鼠，應(yīng)用雜交瘤技術(shù)獲得了一株分泌抗氯霉素單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞5D7，并對(duì)其進(jìn)行效價(jià)、親和力和特異性測(cè)定。應(yīng)用上述單抗建立的檢測(cè)氯霉素的化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法，檢出限達(dá)0.0025μg/L可滿足我國(guó)對(duì)水產(chǎn)品中氯霉素殘留檢測(cè)的要求。

3　其他新型的檢測(cè)技術(shù)

3.1分子印跡膜技術(shù)

李歡歡等［8］合成了對(duì)氯霉素具有快速響應(yīng)能力的聚苯胺分子印跡膜，實(shí)驗(yàn)結(jié)合差示脈沖伏安法建立了對(duì)氯霉素殘留量的檢測(cè)方法，同時(shí)將聚苯胺分子印跡膜用作電化學(xué)傳感器可以用以測(cè)定氯霉素眼藥水中的氯霉素。這種分子印跡膜制備方法具有操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)短，分子印跡膜均勻穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。

3.2比色適配體傳感器

高慧菊等［9］提出了一種新穎的比色適配體傳感器用于快速檢測(cè)魚(yú)肉和鵝肉中氯霉素。本方法的建立是基于核酸適配體特異性結(jié)合目標(biāo)物的高選擇性能和氧化鈀納米顆粒標(biāo)記聚合酶螯合物的雙重信號(hào)放大效應(yīng)，它能特異性、靈敏性地快速檢測(cè)樣品中痕量氯霉素。該方法已經(jīng)成功地應(yīng)用于分析魚(yú)肉和鵝肉樣品中的氯霉素，其結(jié)果與傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法相一致。

4　結(jié)語(yǔ)

氯霉素殘留問(wèn)題已引起國(guó)際組織和許多國(guó)家和地區(qū)的高度重視，氯霉素殘留快速檢測(cè)方法的研究備受關(guān)注。氯霉素殘留量的檢測(cè)還有其他方法，如毛細(xì)管電泳法、生物傳感器法、超臨界流體色譜等。同時(shí)各種技術(shù)的聯(lián)用具有很重要的研究意義。

［1］潘瑩宇，許茜，康學(xué)軍等.高效液相色譜-熒光檢測(cè)法測(cè)定牛奶中氯霉素的殘留量［J］.色譜，2013（23）:577-580

［2］彭麟，郭大偉，張偉等.UPLC-MS/MS法檢測(cè)黃鱔中氯霉素類藥物殘留［J］.畜牧與獸醫(yī)，2016，48（04）:30-35

［3］潘玉香，董靜，呂建霞等.GC-MS/NCI穩(wěn)定同位素稀釋技術(shù)檢測(cè)動(dòng)物源性食品中氯霉素的含量［J］.分析試驗(yàn)室，2010，29（02）:720-1000.

［4］李余動(dòng)，張少恩，吳志剛等.膠體金免疫層析法快速檢測(cè)氯霉素殘留［J］.中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2005（05）:416-419.

［5］張勝幫，董士華.中國(guó)食品學(xué)報(bào).酶聯(lián)免疫檢測(cè)法測(cè)定水產(chǎn)品中殘留氯霉素的研究［J］.2006（06）:1009-7848.

［6］張啟模，楊姝，馬玲.氯霉素及其在畜水產(chǎn)品中殘留檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展［J］.2011，32（8）:12-16.

［7］李歡歡，常志顯等.聚苯胺分子印跡膜電化學(xué)傳感器檢測(cè)氯霉素［J］.化學(xué)研究，2013（06）:11-1008.

［8］高慧菊，潘道東，孫楊贏等.魚(yú)肉和鵝肉中氯霉素的比色適配體傳感器快速檢測(cè)［J］.現(xiàn)代食品科技，2016，32，5.

10.16640/j.cnki.37-1222/t.2016.18.005