賀奮義，陳 昌，高生智，劉全元，張福亨，馬胡賽，劉志軍，史萬(wàn)貴，潘永紅，劉 旭，詹 芳

（1．甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，蘭州730046；2．甘肅省甘南州瑪曲縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，瑪曲747300；3．甘肅省甘南州碌曲縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，碌曲747200；4．甘肅省慶陽(yáng)市環(huán)縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，環(huán)縣745700）

羊棘球蚴（包蟲(chóng)）病基因工程亞單位疫苗（EG95）在甘肅地區(qū)的免疫試驗(yàn)

賀奮義1，陳 昌1，高生智1，劉全元1，張福亨2，馬胡賽3，劉志軍4，史萬(wàn)貴1，潘永紅1，劉 旭1，詹 芳1

（1．甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，蘭州730046；2．甘肅省甘南州瑪曲縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，瑪曲747300；3．甘肅省甘南州碌曲縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，碌曲747200；4．甘肅省慶陽(yáng)市環(huán)縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，環(huán)縣745700）

甘肅省是全國(guó)包蟲(chóng)病疫區(qū)省份之一，多年來(lái)人間、畜間包蟲(chóng)病流行嚴(yán)重。為了驗(yàn)證羊棘球蚴（包蟲(chóng)）病基因工程亞單位疫苗在甘肅地區(qū)使用的安全性和免疫效果，2015年用羊棘球蚴（包蟲(chóng)）病基因工程亞單位疫苗，在甘肅省甘南州的瑪曲縣、碌曲縣和慶陽(yáng)市的環(huán)縣3個(gè)點(diǎn)進(jìn)行了免疫試驗(yàn)，同時(shí)采取首免前、二免前及免后90 d的羊血分離血清，采用羊棘球蚴Eg95包被的ELISA抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明：試驗(yàn)組首免前羊棘球蚴抗體陽(yáng)性率0.99%～11.63%；二免前陽(yáng)性率73.13%～85.57%；首免后90 d陽(yáng)性率81.54%～98.44%。對(duì)照組首免前羊棘球蚴抗體陽(yáng)性率為0；二免前陽(yáng)性率0～5.71%；首免后90 d陽(yáng)性率11.11%～20.00%。羊棘球蚴（包蟲(chóng)）病基因工程亞單位疫苗反應(yīng)在羊只品種上有差異：山羊上有反應(yīng)，而藏綿羊上無(wú)反應(yīng)。

棘球蚴（包蟲(chóng)）病；基因疫苗；免疫試驗(yàn)；疫苗反應(yīng)

棘球蚴?。╡chinoeoccosis）又稱(chēng)包蟲(chóng)?。╤ydatidosis），是由帶科（Taeniidae）棘球?qū)伲‥chinococcus）的棘球絳蟲(chóng)（Echinococcus granulosus）的中絳期幼蟲(chóng)寄生于動(dòng)物和人的肝、肺及其他器官內(nèi)所引起的一種人獸共患病，農(nóng)業(yè)部將其列為二類(lèi)動(dòng)物疫病。甘肅省是全國(guó)包蟲(chóng)病疫區(qū)省份之一，多年來(lái)人間、畜間包蟲(chóng)病流行嚴(yán)重。為了驗(yàn)證羊棘球蚴（包蟲(chóng)）病基因工程亞單位疫苗在甘肅地區(qū)使用的安全性和免疫效果，筆者等以包蟲(chóng)病多發(fā)地區(qū)、養(yǎng)羊大縣、牧區(qū)和農(nóng)區(qū)相結(jié)合的選點(diǎn)原則，選擇甘肅省甘南州瑪曲縣、碌曲縣和慶陽(yáng)市環(huán)縣3個(gè)點(diǎn)進(jìn)行免疫試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組

1.1.1 綿羊 選擇甘南州瑪曲縣、碌曲縣的2～4月齡藏羊羔羊，首次免疫日期定為2015年6月13日，飼養(yǎng)方式為自然放牧。

1.1.2 山羊 選擇慶陽(yáng)市環(huán)縣的2～4月齡絨山羊羔羊，首次免疫日期定為2015年7月28日，飼養(yǎng)方式為舍飼圈養(yǎng)。

1.1.3 分組 在瑪曲縣進(jìn)行了試驗(yàn)組（100只）與對(duì)照組（40只）的設(shè)立，碌曲縣進(jìn)行了試驗(yàn)組（43只）與對(duì)照組（10只）的設(shè)立，環(huán)具進(jìn)行了試驗(yàn)組（70只）與對(duì)照組（10只）的設(shè)立。

1.2 疫苗

為重慶澳龍生物制品有限公司生產(chǎn)的羊棘球蚴（包蟲(chóng)）病基因工程亞單位疫苗，生產(chǎn)批號(hào)：20140910；生產(chǎn)日期：20140908；50頭份/瓶，有效期12個(gè)月。

1.3 免疫程序與免疫方法

首免后1個(gè)月進(jìn)行二免（即間隔4周進(jìn)行二免）。按瓶簽注明頭份，每頭份疫苗兌1 mL滅菌生理鹽水的比例進(jìn)行稀釋?zhuān)恐桓嵫蝾i部皮下注射1 mL，稀釋后疫苗限3 h內(nèi)用完。

1.4 免疫效果評(píng)價(jià)

1.4.1 安全性評(píng)價(jià) 現(xiàn)場(chǎng)觀察免疫動(dòng)物10 min，確定有無(wú)疫苗反應(yīng)。

1.4.2 免疫抗體監(jiān)測(cè)

1.4.2.1 分離血清 羊在一免前、二免前、首免后90 d分別采血3次，分離血清，冷藏運(yùn)輸1～2d，冷凍保存7～90d。

1.4.2.2 抗體檢測(cè) 用重慶澳龍生物制品有限公司生產(chǎn)的羊棘球蚴（包蟲(chóng)）病ELISA抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)；樣品OD450nm≤0.3±0.05，判為陰性；樣品OD450nm＞0.3± 0.05，但≤0.6±0.05，判為弱陽(yáng)性；樣品OD450nm＞0.6± 0.05，判為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2.1 疫苗安全性

藏綿羊基本無(wú)疫苗反應(yīng)，山羊發(fā)現(xiàn)有疫苗反應(yīng)，具體表現(xiàn)為全群精神萎靡，飲食欲廢絕，步態(tài)僵硬或不同程度的跛行，大多羊免疫部位無(wú)異常，有少量免疫羊注射部位輕微腫脹，有反應(yīng)羊只約50%，部分羊尾巴下垂。檢測(cè)8只羊體溫，分別在39.5～41.8℃之間。認(rèn)為是疫苗注射引起的應(yīng)激反應(yīng)，故及時(shí)采取了以下補(bǔ)救措施：全群羊飲水中添加黃芪多糖、維生素C，自由飲用；跛行羊肌內(nèi)注射安痛定；重癥羊肌內(nèi)注射地塞米松2 mL，靜脈注射10%萄葡糖250～500 mL；加強(qiáng)消毒和飼養(yǎng)管理，跟蹤觀察。采取補(bǔ)救措施后3～5 d，反應(yīng)羊只逐漸好轉(zhuǎn)。

2.2 免疫效果檢測(cè)

試驗(yàn)組：一免前陽(yáng)性率為4.67%，二免前為80.00%，免后90 d為89.00%。甘南州瑪曲縣首免前、二免前、首免后90 d羊棘球蚴抗體ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率分別為0.99%、85.57%、87.65%；甘南州碌曲縣首免前、二免前、首免后90 d羊棘球蚴抗體ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率分別為11.63%、73.13%、81.54%；慶陽(yáng)市環(huán)縣首免前、二免前、首免后90 d羊棘球蚴抗體ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率分別為5.71%、78.69%、98.44%。

對(duì)照組：一免前陽(yáng)性率為0，二免前為3.70%，免后90 d為17.31%。甘南州瑪曲縣一免前、二免前、首免后90 d羊棘球蚴抗體ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率分別為0、5.71%、20.00%。甘南州碌曲縣一免前、二免前、首免后90 d羊棘球蟲(chóng)幼抗體ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率分別為0、0、12.50%。慶陽(yáng)市環(huán)縣一免前、二免前、首免后90 d羊棘球蟲(chóng)幼抗體ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率分別為0、0、11.11%。見(jiàn)表1～4。

表1 免疫效果檢測(cè)

表2 甘南州瑪曲縣免疫效果檢測(cè)

表3 甘南州碌曲縣免疫效果檢測(cè)

表4 慶陽(yáng)市環(huán)縣免疫效果檢測(cè)

3 討論與分析

（1）試驗(yàn)組二免后血清中羊棘球蚴抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率可達(dá)81.54%～98.44%，且3個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)羊棘球蚴抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率均可達(dá)到80%以上；而對(duì)照組抗體陽(yáng)性率最高為20.00%。這與他人的試驗(yàn)結(jié)果基本一致。如張壯志等［1］以綿羊包蟲(chóng)病基因工程疫苗（His-EG95）對(duì)新生新疆細(xì)毛羊、山羊和巴音布魯克羊進(jìn)行兩次免疫，結(jié)果顯示二免后人工感染保護(hù)率均達(dá)到82.2%以上，最高保護(hù)率為89%。據(jù)朱興全［2］等報(bào)道，宿主免疫后攻擊原頭蚴時(shí)，抗體滴度越高，攻擊感染后包囊越少，表明抗體滴度與免疫保護(hù)之間存在明顯正相關(guān)關(guān)系。

（2）本試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)組與對(duì)照組之間血清中羊棘球蚴抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率在相同時(shí)間內(nèi)差異顯著。隨著時(shí)間的推移，對(duì)照組血清中羊棘球蚴抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率呈現(xiàn)增高趨勢(shì)，即由一免前0.00%提高到90 d時(shí)的20.00%。不同品種羊只的疫苗免疫反應(yīng)有差異，山羊有免疫反應(yīng)，而藏綿羊則無(wú)反應(yīng)。

（3）試驗(yàn)對(duì)照組綿羊包蟲(chóng)病感染17.31%，比詹芳等［3］調(diào)查的甘肅省部分地區(qū)綿羊包蟲(chóng)自然感染率9.68%要高近一倍，分析可能原因是選點(diǎn)所造成的。

［1］ 張壯志，石保新，張文寶.綿羊包蟲(chóng)病基因工程疫苗（Eg95）免疫試驗(yàn)［J］.中國(guó)人畜共患病學(xué)報(bào)，2008，24（3）：252-256.

［2］ 朱興全，竇蘭清，史曉紅，等.細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)排泄分泌抗原研究——六鉤蚴排泄分泌抗原的免疫原性［J］.中國(guó)獸醫(yī)科技，1991，21（9）：6-9.

［3］ 詹芳，史萬(wàn)貴，劉全元，等.甘肅省部分地區(qū)家畜包蟲(chóng)病感染情況調(diào)查［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2015，34（6）：73-74.

10.3969/j.issn.2095-3887.2016.02.013

S852.7

A

2095-3887（2016）02-0048-03

2015-12-11

甘肅省科技重大專(zhuān)項(xiàng)（1203NKDA017）；甘肅省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新項(xiàng)目（GNCX-2013-43）

賀奮義，男，研究員，大學(xué)本科，碩士生導(dǎo)師。

高生智，男，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事寄生蟲(chóng)防控工作。