劉丹，吳志龍，蔣帆，劉澤璽，馮翠萍

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山西太谷030801）

靈芝菌絲體速溶粉的體外抗氧化作用*

劉丹，吳志龍，蔣帆，劉澤璽，馮翠萍**

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山西太谷030801）

試驗(yàn)研究靈芝菌絲體速溶粉的體外抗氧化作用，為其功能定位提供參考。主要對(duì)靈芝菌絲體速溶粉清除DPPH·、·OH、O2-·的能力，總還原力以及抑制脂質(zhì)過氧化的能力進(jìn)行測定，并檢測了靈芝菌絲體中的多糖含量。結(jié)果表明，靈芝菌絲體速溶粉中的靈芝多糖含量為4.89%。隨著靈芝菌絲體速溶粉濃度的增加，清除各自由基的清除率、總還原力和抑制脂質(zhì)過氧化的抑制率均逐漸增大；清除DPPH·、·OH、O2-·的IC50值分別為0.912 mg·mL-1、3.173 mg·mL-1、0.863 mg·mL-1，抑制脂質(zhì)過氧化作用的IC50值為6.706 mg·mL-1。說明靈芝菌絲體速溶粉有較強(qiáng)的抗氧化活性。

靈芝菌絲體速溶粉；多糖；自由基；總還原力；脂質(zhì)過氧化作用

靈芝屬于擔(dān)子菌門（Basidiomycete）擔(dān)子菌綱（Basidiomycetes）多孔菌科（Polyporaceae），是我國傳統(tǒng)的藥食同源的真菌。靈芝子實(shí)體中含有多糖、核苷、三萜類化合物等多種活性成分[1]，其中靈芝多糖具有增強(qiáng)機(jī)體免疫、抗癌、抗氧化、降血糖等功能[2-4]；靈芝菌絲體中也含有水溶性多糖、三萜類化合物等活性成分[5-6]。因靈芝菌絲體液態(tài)發(fā)酵具有生產(chǎn)周期短、產(chǎn)量大等特點(diǎn)，被作為提取活性物質(zhì)的重要來源[7]。研究表明，靈芝菌絲體中有多種葡聚糖、雜多糖以及多糖-蛋白質(zhì)復(fù)合物等被分離出來，并顯示明顯的免疫活性[8]，且靈芝菌絲體中的三萜類化合物具有抗腫瘤作用[9]。本試驗(yàn)對(duì)研制出的靈芝菌絲體速溶粉體外抗氧化作用進(jìn)行研究，從而為該產(chǎn)品的功能定位提供一定的理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1靈芝菌絲體

山西農(nóng)業(yè)大學(xué)食用菌中心提供。

1.1.2主要試劑

2,2-二苯基-1-苦基脛基游離自由基（DPPH·）、Tris：美國Sigma公司；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.1.3主要儀器與設(shè)備

2100型可見光分光光度計(jì)，上海尤尼柯儀器有限公司；分析天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；高速電動(dòng)離心機(jī)，常州華普達(dá)教學(xué)儀器有限公司；科偉電熱恒溫水浴鍋，北京化玻聯(lián)醫(yī)療器械有限公司；PHS-SC型精密酸度計(jì)，上海虹儀儀器儀表有限公司；磁力加熱攪拌器，杭州儀表電機(jī)廠；TU-1801紫外可見光光度計(jì)，北京普析通用儀器公司。

1.2方法

1.2.1靈芝菌絲體速溶粉工藝流程

靈芝菌絲體速溶粉工藝流程見圖1。

圖1　靈芝菌絲體速溶粉工藝流程Fig.1 Process flow of Ganoderma lucidum mycelium instant powder

1.2.2靈芝菌絲體速溶粉中靈芝菌絲體多糖的測定

參照參考文獻(xiàn)[10]按苯酚-硫酸法進(jìn)行測定。

1.2.3靈芝菌絲體速溶粉濃度的配置

配置8 mg·mL-1的靈芝菌絲體速溶粉溶液，梯度稀釋為4 mg·mL-1、2 mg·mL-1、1 mg·mL-1、0.5 mg·mL-1、0.25 mg·mL-1、0.125 mg·mL-1備用。

1.2.4清除DPPH·能力的測定

DPPH·清除率（P1）參照參考文獻(xiàn)[11]的方法進(jìn)行測定，公式為：

式中：A0為無水乙醇吸光值；A1為樣液添加DPPH·及無水乙醇的吸光值；A2為樣液添加無水乙醇而未添加DPPH·的吸光值。

1.2.5清除·OH能力的測定

參照參考文獻(xiàn)[12]的方法進(jìn)行測定，·OH清除率（P2）公式為：

式中：A3為蒸餾水作參比溶液的吸光值；A4為樣品反應(yīng)液的吸光值；A5為樣液和無水乙醇溶液的吸光值。

1.2.6清除超氧陰離子能力的測定

參照參考文獻(xiàn)[13]的方法進(jìn)行測定，清除率（P3）公式為：

式中：V1為加入樣液的鄰苯三酚氧化速率；V0為鄰苯三酚的自氧化速率。

1.2.7總還原力的測定

參照參考文獻(xiàn)[14]的方法進(jìn)行測定，總還原力（H）公式為：

式中：A6為樣品反應(yīng)液的吸光值；A7為未添加反應(yīng)液的樣品溶液吸光值。

1.2.8抑制脂質(zhì)過氧化能力的測定

抑制脂質(zhì)過氧化能力的測定參照參考文獻(xiàn)[15]的方法進(jìn)行，清除率（P4）公式為：

式中：A8為以蒸餾水代替樣品的反應(yīng)液吸光值；A9為樣品反應(yīng)液的吸光值；A10為未添加反應(yīng)液的樣品溶液的吸光值。

2　結(jié)果與分析

2.1靈芝菌絲體速溶粉菌絲體多糖含量

經(jīng)實(shí)驗(yàn)測得，靈芝菌絲體粉中的多糖含量為4.89%。

2.2清除DPPH·的能力

靈芝菌絲體速溶粉對(duì)DPPH·自由基的清除作用及其IC50值見圖2。

由圖2可見，在試驗(yàn)范圍內(nèi)隨著濃度的增加，靈芝菌絲體速溶粉對(duì)DPPH·的清除能力逐漸增強(qiáng)，當(dāng)濃度為2 mg·mL-1時(shí)，清除率達(dá)到91.92%（圖2A），IC50值為0.912 mg·mL-1（圖2B）。

2.3清除·OH的能力

靈芝菌絲體速溶粉對(duì)·OH的清除作用及其IC50值見圖3。

由圖3可見，在試驗(yàn)范圍內(nèi)隨著濃度的增加，靈芝菌絲體速溶粉對(duì)羥基自由基的清除能力逐漸增強(qiáng)，當(dāng)濃度為8 mg·mL-1時(shí)，清除率達(dá)到72.66%（圖3A），IC50值為3.173 mg·mL-1（圖3B）。

2.4清除O2-·的能力

靈芝菌絲體速溶粉對(duì)O2-·的清除作用及其IC50值見圖4。

由圖4可見，在試驗(yàn)范圍內(nèi)隨著濃度的增加，靈芝菌絲體速溶粉對(duì)O2-·的清除能力逐漸增強(qiáng)，當(dāng)濃度為8 mg·mL-1時(shí)，清除率達(dá)到69.31%（圖4A），IC50值為0.863 mg·mL-1（圖4B）。

2.5脂質(zhì)過氧化抑制能力

靈芝菌絲體速溶粉對(duì)脂質(zhì)過氧化的抑制作用及其IC50值見圖5。

由圖5可見，在試驗(yàn)范圍內(nèi)隨著濃度的增加，靈芝菌絲體速溶粉對(duì)脂質(zhì)過氧化的抑制能力逐漸增強(qiáng)，當(dāng)濃度為8 mg·mL-1時(shí)，清除率達(dá)到54.77%（圖5A），IC50值為6.706 mg·mL-1（圖5B）。

2.6總還原力

靈芝菌絲體速溶粉的總還原力見圖6。

由圖6可見，在試驗(yàn)范圍內(nèi)隨著濃度的增加，靈芝菌絲體速溶粉總還原力逐漸增強(qiáng)，當(dāng)濃度為4 mg·mL-1時(shí)，吸光值達(dá)到0.710。

圖2　靈芝菌絲體速溶粉對(duì)DPPH·自由基的清除作用及其IC50值Fig.2Scavenging activities of Ganoderma lucidum mycelium instant powder on DPPH·and IC50

圖3　靈芝菌絲體速溶粉對(duì)羥自由基的清除作用及其IC50值Fig.3Scavenging activities of Ganoderma lucidum mycelium instant powder on·OH and IC50

圖4　靈芝菌絲體速溶粉對(duì)超氧陰離子的清除作用及其IC50值Fig.4Scavenging activities of Ganoderma lucidum mycelium instant powder on O2-·and IC50

3　結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，靈芝菌絲體速溶粉具有一定的抗氧化作用，這可能與產(chǎn)品中含有的多糖等活性成分有一定的關(guān)系。靈芝菌絲體速溶粉中含有多糖分子上的醇羥基等活性基團(tuán)與自由基，表現(xiàn)出強(qiáng)還原力，同時(shí)，降低了脂質(zhì)過氧化速率；醇羥基等活性基團(tuán)能傳遞質(zhì)子和電子，與DPPH·自由基能有效結(jié)合，從而起到清除DPPH·自由基的目的；其活性基團(tuán)能與·OH及·OH產(chǎn)生所必需的金屬離子有效反應(yīng)，抑制·OH的產(chǎn)生并清除已產(chǎn)生的部分·OH；能通過活性羥基提供的氫原子與活潑的超氧陰離子反應(yīng)生成穩(wěn)定化合物，從而起到清除O2-·的作用[16-17]，但體內(nèi)是否具有抗氧化活性還有待進(jìn)一步研究。

靈芝菌絲體速溶粉中的靈芝多糖含量4.89%，有較強(qiáng)的清除自由基和抑制脂質(zhì)過氧化能力，說明研制的靈芝菌絲體速溶粉具有抗氧化作用。

圖5　靈芝菌絲體速溶粉對(duì)脂質(zhì)過氧化的抑制作用及其IC50值Fig.5Reducing activity of lipid peroxidation and the IC50of Ganoderma lucidum mycelium instant powder

圖6　靈芝菌絲體速溶粉的總還原力Fig.6Total reducing power of Ganoderma lucidum mycelium instant powder

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Anti-oxidation Activity of Ganoderma lucidum Mycelium Instant Powder

LIU Dan,WU Zhi-long,JIANG Fan,LIU Ze-xi,FENG Cui-ping
(College of Food Science and Engineering,Shanxi Agricultural University,Taigu 030801,China)

The anti-oxidation activity of Ganoderma lucidum mycelium instant powder in vitro were studied,which provided some references for its functional localization.The polysaccharide contents were determined,and G.lucidum mycelium instant scavenging capacity of DPPH·,·OH and O2-·,the total reducing power and inhibiting lipid oxidation activity were detected. The results showed that the G.lucidum polysaccharide content of mycelium instant powder is 4.89%.With the increase of the concentrations of G.lucidum mycelium instant,values of the anti-oxidant ability increased,and the IC50on DPPH·,·OH,O2-· and lipid peroxidation is 0.912 mg·mL-1,3.173 mg·mL-1,0.863 mg·mL-1and 6.706 mg·mL-1respectively.We infered that G. lucidum mycelium instant powder had strong antioxidant activity.

Ganoderma lucidum mycelium instant powder;polysaccharide;free radicals;reducing power;inhibiting lipid oxidation activity

S646.9

A

1003-8310（2016）04-0063-04

10.13629/j.cnki.53-1054.2016.04.016

山西省普通高等學(xué)校大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項(xiàng)目（12-23）；山西省煤基重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目（FT2014-03-01）。

劉丹（1995-），女，本科在讀，主要研究方向?yàn)槭秤镁鸂I養(yǎng)與加工。E-mail:liudan95730@163.com

**通信作者：馮翠萍（1970-），女，博士，教授，主要從事食品營養(yǎng)加工與安全研究。E-mail:ndfcp@163.com

2016-05-25